Nöromusküler Bloker Tedavisi ile Kas Kasılmasının Değerlendirilmesi

Özet

Kaynak: Lin, C. U., et al., İnsan Kaynaklı Pluripotent Kök Hücrelerden İndüklenen İn Vitro Nöromüsküler Kavşak. J. Vis. Uzm. (2020)

Bu video, kültürlenmiş motor nöronlar, Schwann hücreleri ve miyotüpler kullanılarak kasın değerlendirilmesini ve ardından kasılmayı engellemek için bir nöromüsküler bloker ile tedaviyi göstermektedir. Renk kodlu zaman hareketi grafikleri, renk kodlu bir zaman hareketi grafiğini gösterir. Kırmızı en hızlı hareketi, mavi ise en yavaş hareketi gösterir.

Protokol

1. Kas kasılması ve kürare tedavisi

1. Miyotüp kasılmasını tetiklemek için, kültür ortamına 25 mM kalsiyum klorür (CaCl₂) ekleyin. Miyotüplerin hareketi 1\u20122 dakika içinde gözlemlenebilir.
2. 6 oyuklu plakayı ters çevrilmiş bir mikroskop tablasına yerleştirin. Canlı hücre mikroskobu ile miyotüp kasılmasının bir filmini kaydedin.
3. Miyotüp kasılmasını durdurmak için, kültür ortamına (300 ng / mL) kürare ekleyin. Ardından, filmi adım 1.2 olarak kaydedin.
4. Film dosyasını hareket vektörü analiz yazılımıyla açın, ardından Hareket Analizi Filmi analiz etmek için düğmesine basın.
   NOT: Miyotüplerin kasılması zaman-hareket grafiği olarak gösterilir. Filmler, miyotüplerin hareket hızını göstermek için renk kodludur. Renk kodlu ışıltılı sinyaller, kırmızı rengin en hızlı hareket hızını ve mavi rengin en yavaş hareket hızını gösterdiği miyotüplerin hareketlerini gösterir.

Malzemeler

Bu makalede kullanılan malzemelerin listesi

Ad	Şirket	Katalog numarası	Yorumlar
Ortam, büyüme faktörleri ve reaktifler	Öğe	Marka	Kedi. Sayı
	B27, Gibco	Gibco	12587-001
	BDNF	Ar-Ge Sistemleri	248-BD
	ECM, Matrigel (büyüme faktörü azaltıldı)	Corning	356230
	GDNF	Ar-Ge Sistemleri	212-GD
	İyon kaplayıcı	JEOL	JEC3000FC
	Canlı hücre mikroskobu	Nikon	Eclipse Ti mikroskobu
	Hareket vektörü analiz yazılımı	Sony	SI8000
	N2, Gibco	Gibco	17502-048
	Nörobazal ortam	Gibco	21103-049
	NT3	Ar-Ge Sistemleri	267-N3