Değişen sertlikteki hidrojeller üzerinde kültürlenen nöral krest hücrelerinin floresan boyanması

Özet

Kaynak: Le, T. P., et al., Nöral Krest Hücrelerinde Mekanik Sinyalleri İncelemek için Optimize Edilmiş Bir O9-1/Hidrojel Sistemi. J. V olur. Uzm. (2021)

Bu videoda, hücre iskeleti organizasyonunu görselleştirmek ve analiz etmek için değişen sertlikteki hidrojeller üzerinde kültürlenen nöral krest hücrelerinin falloidin boyamasını göstermek için floresan mikroskobu kullanarak floresan boyama gerçekleştirme prosedürünü açıklıyoruz.

Protokol

1. İmmünofloresan boyama ile sertliğin moleküler analizi

1. Doğrudan plaka üzerinde büyütülen hücrelerden gelen yanlış sinyalleri en aza indirmek için lamel yeni bir plakaya taşımak için cımbız kullanın. Ölü hücreleri ve kalan kültür ortamlarını çıkarmak için hücreleri 500 μL steril PBS ile üç kez yıkayın.
2. Hücreleri oda sıcaklığında 10 dakika boyunca rahatsız edilmemiş 500 μL %4 paraformaldehit (PFA) kullanarak sabitleyin. Ardından, hücreleri her biri 2 dakika boyunca 500 μL PBS / kuyu kullanarak üç kez yeniden yıkayın.
   NOT: Prosedürel bir durdurma için 4 °C'de saklayın.
3. Hücreleri oda sıcaklığınd....

Malzemeler

Bu makalede kullanılan malzemelerin listesi

Ad	Şirket	Katalog numarası	Yorumlar
2 mm #1 Corning 0211 Cam Lamel	Chemglass Yaşam Bilimleri	CLS-1763-012
25 mm #1 Corning 0211 Cam Lamel	Chemglass Yaşam Bilimleri	CLS-1763-025
4 oyuklu hücre kültürü plakası	Termo Bilimsel	179830
4% Paraformaldehit	Sigma Aldrich	J61899-AP
%40 Akrilamid	Sigma Aldrich	A4058
Alexa Fluor 488 Phalloidin	Termo Balıkçı	A12379
Kollajen tip I (100mg)	Corning	354236
DAPI (4',6-Diamidino-2-fenilindol, dihidroklorür)	Termo Balıkçı	D1306
Eşek serumu	Sigma Aldrich	D9663
Steril 1x PBS	Hyclone	SH30256.02
Floresan mikroskobu	Leica