Ağırlık Düşüşü Travmatik Yaralanma Yoluyla Bir Fare Modelinde Travma Sonrası Nöbetleri İndükleme Tekniği

Özet

Kaynak: Shandra, O. et al., Tekrarlayan Yaygın Travmatik Beyin Hasarının Fare Modelinde Travma Sonrası Epilepsinin İndüklenmesi. J. Vis. Uzm. (2020)

Protokol

Hayvan modellerini içeren tüm prosedürler, yerel kurumsal hayvan bakım komitesi ve JoVE veteriner inceleme kurulu tarafından gözden geçirilmiştir.

1. Kilo verme prosedürü

1. Fareyi bir indüksiyon odasına yerleştirin. Oksijen ve vakum akışını 1 L/dk'ya ve izofluran gazı seviyesini %3-%5'e ayarlayın. Fareyi 5 dakika boyunca uyuşturun.
2. Fareyi indüksiyon odasından çıkarın ve bir köpük ped üzerine yerleştirin. Bir ayak parmağı veya kuyruk tutamına yanıt verilmediğini test edin.
3. Deri altına bir analjezik (0.1 mg / kg buprenorfin) uygulayın. Elektroensefalografi (EEG) ameliyatı aynı gün yapılırsa, buprenorfini steroid olmayan antienflamatuar karprofen (5 mg / kg) ile kombinasyon halinde deri altına uygulayın.
4. Sodyum laktat çözeltisini (hayvanın ağırlığının gramı başına 3 μL) son darbeden önce veya sonra deri altına uygulayın. Sodyum laktat çözeltisi, tek bir enjeksiyonda hızlı uygulama için analjeziklerle karıştırılabilir.
   NOT: Sodyum laktat çözeltisi, suda sodyum klorür, potasyum klorür, kalsiyum klorür ve sodyum laktat karışımı içerir. Bu adım, sıvıların ve elektrolitlerin değiştirilmesine yardımcı olarak iyileşmeye yardımcı olur.
5. Farenin başını ağırlık düşürme tüpünün altına yerleştirin (Şekil 1A) ve başın ortasına, göz ve kulak çizgisi arasına düz bir paslanmaz çelik disk (1,3 cm çapında, 1 mm kalınlığında ve 880 mg ağırlığında) yerleştirin.
   NOT: Bu disk, darbeyi kafatasının yüzeyine yayar (Şekil 1B).
6. 100 g ağırlık çubuğunu 50 cm yükseklikten serbest bırakmak için ağırlık düşürme borusundaki pimi çıkarın. Kontrol fareleri için sahte yaralanmaya neden olmak için, pimin yanlışlıkla serbest kalmasını ve ağırlığın düşmesini önlemek için ağırlık çubuğunu tüpten çıkarın.
   NOT: Hayvanın kafası düz bir şekilde konumlandırılmalıdır, böylece çubuk diskin tüm yüzeyine serbestçe düşer.
7. Bilinçsiz hayvanı, steril poliastarlı emici bir havluyla kaplı bir ısıtma yastığına iyileşmesi için sırt üstü yatırın. Doğrultma refleksi toparlanma süresi (yani, farenin sırtından kendini düzeltmesi için geçen süre), bilinçsiz geçirilen süre için bir okuma olarak ölçülebilir.

Sonuçlar

Şekil 1: Tekrarlayan yaygın travmatik beyin hasarının (TBI) fare modeli. (A) Ağırlık düşürme cihazı. (a1) Ağırlık düşürme tüpü. (a2) 100 g ağırlığında bir çubuk. (a3) Çubuğu tutan pim. (a4) Yüksekliği değiştirirken veya çubuğu ağırlık düşürme borusundan çıkarırken çubuğu yukarı kaldırmak için ip. (a5

Malzemeler

Bu makalede kullanılan malzemelerin listesi

Ad	Şirket	Katalog numarası	Yorumlar
Buprenorfin	Par Pharmaceuticals, Cos. Inc., Spring Valley, NY, ABD	60969
C57BL/6 fare	Harlan/Envigo Laboratuvarları A.Ş		erkek, 12-16 haftalık
C57BL/6 fare	Jackson Laboratuvarı		erkek, 12-16 haftalık
Carprofen	Zoetis Hizmetleri LLC, Parsippany, NJ, ABD	26357	NOT: Bu ilaç sadece stereotaktik elektrot implantasyonu aynı gün
İnhalasyon anestezisi için fluriso sıvısı	MWI Veteriner Tedarik A.Ş., ABD	502017
Paslanmaz çelik disk			Özel yapım
Steril poli astarlı emici havlu pedleri	Kardinal Sağlık, ABD	3520

yapılacaksa kilo kaybı sırasında eklenir.