Numune toplama ile ilgili tüm prosedürler enstitünün IRB yönergelerine uygun olarak gerçekleştirilmiştir.
NOT: Protokol, insanlarda nöropatolojik çalışmalar için sonuçlandırılan ölüm sonrası beyin değerlendirmesi için simetrik bir bihemisferik beyin kesme prosedürünü tanımlar. İnsan beyninin kesilmesi için gerekli olan aparatların, aletlerin, malzemelerin ve malzemelerin ayrıntılı açıklamaları hariç tutulacaktır. Beyin diseksiyonları için materyaller ve malzemeler, tek araştırmacının takdirine bağlı olarak seçilir ve her araştırma kurumunda izin verilen veya onaylanan otopsi araçlarına dayanır. Bu prosedür için gereken minimum araç ve malzeme seti Malzeme/Ekipman Tablosunda açıklanmıştır. İnsan CJD'si gibi şüpheli bulaşıcı beyin hastalıkları için özel kesme prosedürleri ve önlemler bu makalenin amaçları dışındadır ve diğer kaynaklardan edinilebilir.
1. Simetrik Bihemisferik Beyin Kesimi
Not: Periagonal, metabolik (yani pH) ve doku koruma (yani sıcaklık) koşullarına bağlı olarak beynin iki ila üç haftalık bir süre boyunca gerekli doku fiksasyonunu (örneğin, nötr tamponlu %10 formalin kullanarak) aldığından emin olun. Bununla birlikte, görüntüleme-patoloji korelasyon çalışmaları için daha uzun bir fiksasyon süresi (>5.4 hafta) önerilmiştir.
- Beyni, ön kutupları araştırmacıya göre ters yönde yönlendirilecek şekilde, araştırmacıya bakan düz bir yüzeye yerleştirin.
- Beyni, tüm beynin tüm kortikal girüs ve sulkuslarının tam ve net bir şekilde görüntülenmesine izin verecek şekilde yerleştirin (Şekil 1a).
- İlk olarak, meningeal anomalileri, makroskopik hemisferik asimetrileri (fokal, lober veya genelleştirilmiş hemisferik atrofi fenomenlerinin olası göstergeleri), makroskopik doku lezyonlarını (ör., tümörler veya fıtıklaşma), konjenital malformasyonları, damar anormallikleri ve diğer olası anormallikleri veya serebral yüzeyin olağandışı sunumlarını arayın.
not: Bir insan beyninin nasıl değerlendirileceğine dair ayrıntılı açıklamalar için, piyasada bulunan nöropatoloji ders kitaplarına ve otopsi kılavuzlarına bakın.
2. Protokol Sırası
- Hemisferlerin yüzeysel yönleri (telensefalon) araştırmacıya bakacak şekilde, ön kutupları araştırmacıdan uzağa bakın. Olası makro anomalileri belgelemek ve olası kliniko-nöroanatomik ve kesim sonrası hususları hesaba katmak için her bir özel durumda gerektiği kadar dijital fotoğraf çekin. Bir araştırma görevlisinin tüm kortikal yüzeyi yakalamak için beyne dik olarak dijital fotoğraflar çekmesini sağlayın (Şekil 1a - c).
- Beyni kesmeden önce mürekkep veya renkli iğneler kullanarak pre-santral kortikal gyri işaretleyin (Şekil 1b).
not: Bu prosedür, kesimden sonra motorun ve somatosensoriyel primer kortekslerin daha hızlı tanınmasını kolaylaştırır.
- Beyni aynı yöne bakarken (yani, ön kutuplar araştırmacıdan uzağa bakarken) 180 derece döndürün. Beynin tabanını dikkatlice inceleyin. Serebrovasküler sistemlerin (yani baziler ve vertebral arterler ve Willis çemberi) ve beyin sapı çıkış/giriş seviyelerindeki kraniyal sinirlerin durumuna özellikle dikkat edin. Aşırı kırılganlıkları nedeniyle doku yırtılmasını önlemek için koku soğancıklarını ve yollarını özel bir dikkatle yönetin.
- Olası makro anomalileri belgelemek ve olası kliniko-nöroanatomik ve kesim sonrası hususları hesaba katmak için her bir özel durumda gerektiği kadar dijital fotoğraf çekin. Kortikal ve beyin sapı yüzeylerinin tamamını yakalamak için bir araştırma görevlisinin beyne dik olarak dijital fotoğraflar çekmesini sağlayın.
- Beynin tabanına bakacak şekilde ve bir neşter kullanarak, beyin sapını ponsun üst kısmı seviyesinde (beynin tabanına mümkün olduğunca yakın) enlemesine kesin. SN'yi (yani solgunluk için) ve diğer komşu yapıları dikkatlice inceleyin. Muhtemelen bir ses kayıt cihazı kullanarak, normal bir beyne kıyasla beynin herhangi bir olağandışı görünümünü not edin.
- Yine, beyni 180 derece döndürün ve keskin bir bıçak kullanarak, korpus kallozum'u medial longitudinal fissür boyunca merkezi olarak keserek ve fronto-oksipital bir yön izleyerek iki yarım küreyi ayırın. Her yarım kürenin her iki tarafını olası anomaliler açısından inceleyin (ör., ventriküler genişlemeler, malformasyonlar, doku yumuşaması, tümörler vb.). Şekil 2a'ya bakın.
- Olası makro anomalileri belgelemek ve olası klinik-nöroanatomik ve kesim sonrası hususları hesaba katmak için her bir özel durumda gerektiği kadar dijital fotoğraf çekin. Bir araştırma görevlisinin tüm kortikal yüzeyi yakalamak için beyne dik olarak dijital fotoğraflar çekmesini sağlayın. Normal bir beyne kıyasla herhangi bir olağandışı beyin özelliğine dikkat edin.
- Şekil 2b'de gösterildiği gibi, iki yarım küreyi, ön loblar araştırmacıdan uzağa bakacak şekilde, medial yönleri üzerinde yatacak şekilde düz bir şekilde yerleştirin. Bunları merkezleri birbirine değecek şekilde yerleştirin (ayrıca belirgin yarım küre asimetrisi durumunda).
- Keskin bir bıçak kullanarak, ön kutuplardan başlayarak ve yarım kürelerin tüm uzunluğu boyunca oksipital kutuplara doğru ilerleyerek her iki serebral hemisferi manuel olarak kesin. İki seri 1 cm kalınlığında beyin dokusu bloğu elde edin (her yarım küre için yaklaşık 18 levha).
- Beyin plakalarını anatomik olarak organize edilmiş (fronto-oksipital yönde) ayrı bir düz yüzeye yerleştirin. Fotoğraf çekerken daha iyi kontrast için üzerine cetvel basılmış beyaz bir yüzey kullanın. İki serebral levha serisini anatomik olarak simetrik bir şekilde (fronto-oksipital yön) sergileyin ve koronal yüzeylerinin doğrudan göz muayenesi ve dijital fotoğrafçılık için görünür olduğundan emin olun (Şekil 3a). Beyin yapılarını, boyutlarını ve olası anormallikleri daha doğru bir şekilde lokalize etmek için her iki tarafında basılı milimetrik ızgaralar bulunan kesme yüzeyleri kullanın.
- Olası makro anomalileri belgelemek ve olası kliniko-nöroanatomik ve kesim sonrası hususları hesaba katmak için her bir özel durumda gerektiği kadar dijital fotoğraf çekin. Bir araştırma görevlisinin tüm kortikal yüzeyi yakalamak için beyne dik olarak dijital fotoğraflar çekmesini sağlayın. Normal bir beyne kıyasla beynin herhangi bir olağandışı yönünün notlarını alın (muhtemelen bir ses kayıt cihazı kullanarak).
- Keskin bir neşter kullanarak, kurulan her serebral bölge için daha küçük dikdörtgen beyin dokusu bloklarını manuel olarak inceleyin. Tablo 1'de açıklanan önerilen serebral bölge toplama şemasını izleyin.
- Her doku bloğunu ayrı ayrı etiketlenmiş histokasetlere koyun.
not: Beyin dokusunun her bir bloğunun, mümkün olduğunca standart histokaset maksimum hacmine (30 x 20 x 4 mm3) uyacak şekilde kesilmesi gerekir.
- Histokasetleri, her vaka için bir tanımlayıcı kod kullanarak ve belirli nöroanatomik tanımlayıcılar kullanarak etiketleyin (farklı beyinler için rastgele harfler veya sayılar kullanmayın; bunun yerine, Tablo 1'de gösterildiği gibi her zaman aynı bölgesel anatomik isimleri veya karşılık gelen numaraları kullanın). Örneğin, her vaka için rastgele veya yarı rastgele sayılar üreterek kimliksizleştirici kodlar oluşturun (yani, BRC 130, burada 5B Beyin için kalır, R Kaynak için kalır, C Merkez için kalır ve 130 aşamalı bir katılım veya AD160001, burada AD "Alzheimer hastalığı çalışması" anlamına gelir, 16 otopsinin yapıldığı yıldır (2016), ve 0001 aşamalı bir katılım örneği numarası).
not: Bu adım gelecekteki araştırmacılar için çok yararlıdır. Bir gösterge tutun ve yarım küreyi belirtin (L = sol yarım küre, R = sağ yarım küre). Her yarım küre için belirli bir renk oluşturmak için iki farklı renkte histokaset kullanın.
- Olası makroanomalileri belgelemek ve olası klinik-nöroanatomik ve kesim sonrası hususları hesaba katmak için her bir özel durumda gerektiği kadar çok dijital fotoğraf çekin. Bir araştırma görevlisinin tüm kortikal yüzeyi yakalamak için beyne dik olarak dijital fotoğraflar çekmesini sağlayın. Normal bir beyne kıyasla beynin herhangi bir olağandışı özelliğine dikkat edin.
- Kesilen beynin tamamının ve ilgili histokasetlerin dijital resimlerini (gerektiği veya istediğiniz kadar) çekin.
Tablo 1. Bihemisferik kesme şeması. Bu tablo, her beynin hem sol hem de sağ yarım kürelerinde incelenecek tek anatomik alanı göstermektedir. Bihemisferik simetrik kesim, taze ve sabit beyinlerde yapılabilir.
)
| Nöroanatomik bölge | etiket | Sol Sabit | Sağ Sabit | Sol Donmuş | Sağ Donmuş |
| Koku ampulü | Ob | | | | |
| Polar frontal korteks | Pfc | | | | |
| Orta frontal girus | Mfg | | | | |
| Orbito-frontal girus | OFG (İngilizce) | | | | |
| Parietal korteks lobulus inferior | PCLI (PCLI) | | | | |
| Üst temporal korteks | Stc | | | | |
| Orta temporal korteks | Mm | | | | |
| Anterior singulat korteks | Acc | | | | |
| Posterior singulat korteks | Pcc | | | | |
| Pre-central gyrus (Kesmeden önce bir pim koyun) | PrCRG (PrCRG) | | | | |
| Merkezi sonrası girus (Kesmeden önce bir pim koyun) | PoCRG (PoCRG) | | | | |
| Oksipital girus (Broadmann alanı 17 ve 18 dahil) | Oc | | | | |
| Amigdala | AMY (Türkçe) | | | | |
| Meynert'in bazal çekirdeği ile anterior komissür seviyesinde bazal gangliyonlar | BGMY (BGMY) | | | | |
| Thallamus ve subthallamus | TH-STH | | | | |
| Corpora, memeli ve hipotalamus | MAM+HIPO | | | | |
| Bazal forbrane çekirdekleri | Bf | | | | |
| Ön hipokampus | ey | | | | |
| Posterior hipokampus (korpus genikülat lateral seviyede), entorinal korteks ve inferior temporal korteks dahil | PH + EC+ ITC | | | | |
| Korteks serebelli ve Nucleus dentat | CRBDe | | | | |
| Mesencephalon (Substantia nigra dahil) | MESSN (MESAJ) | | | | |
| Locus coeruleus (LC) dahil olmak üzere Pons | Pons | | | | |
| Medula oblongata Medula DMV dahil | MObi (Türkçe) | | | | |
| Medula spinalis (Mantar Hastalığı) | MSpi (Yüksek Lisans | | | | |
| Omurilik üst | Sc | | | | |
| Dura Madre | Dm | | | | |
