Hayvan modellerini içeren tüm prosedürler, yerel kurumsal hayvan bakım komitesi ve JoVE veteriner inceleme kurulu tarafından gözden geçirilmiştir.
1. Konular
- Erkek Sprague-Dawley sıçanları kullanın (varışta 250-300 g).
- %40-60 nem oranına ve 21 ± 1 °C oda sıcaklığına (RT) sahip bir koloni odasında katı tabanlı kafeslerde ev fareleri.
- Libitum'da su ve yiyecek bulundurun.
- Fareleri ters çevrilmiş 12:12 saat karanlık/aydınlık döngüsü altında tutun (ışıklar 20 saatte yanar).
2. Cerrahi
- Sıçan başına, yaklaşık 6 cm uzunluğunda iki parça kromik bağırsak bağı (5-0) hazırlayın ve kurumasını ve sertleşmesini ve kırılgan hale gelmesini önlemek için steril tuzlu suya koyun.
- Hayvanı pentobarbital (60 mg / kg, intraperitoneal [ip]) ile uyuşturun ve atropin (0.1 mg / kg, ip) ile tedavi edin. Yeterli basıncın uygulandığından emin olmak için bir bacağınızı uzatarak ve cilt ağını ayak parmakları arasında tırnağınızla sıkıştırarak anestezi seviyesini izleyin. Hayvanın uzvunu esnetmediğinden emin olun. Gerekirse, ek pentobarbital uygulayın.
- Sıçanın başını tıraş edin, böylece gözlerin merkezine ön ve arka eşit mesafelerde yaklaşık 25 mm'lik bir orta hat kafa derisi kesisi yapılabilir.
- Farenin kafasını stereotaksik bir çerçeveye sabitleyin veya farenin kafasını başka bir şekilde sabitleyin. Vücut ısısını korumak için fareyi ısıtılmış bir pedin üzerine yerleştirin.
- Kurumadan kaynaklanan hasarı önlemek için her iki göze de oftalmik merhem sürün.
- Tıraşlı baş bölgesini alkol, ardından betadin ile ovalayın.
- Kafatasını ve burun kemiğini açığa çıkaran orta çizgide bir kafa derisi kesisi yapın.
- 2.9 ila 2.16 arasındaki adımları gerçekleştirmek için bir ameliyat mikroskobu kullanın.
- Pamuk uçlu bir bez ve bir çift Dumont forseps kullanarak maksiller, frontal, lakrimal ve elmacık kemikleri tarafından oluşturulan yörüngenin kenarını serbest olarak inceleyin. Olası kanamadan kanı emmek için swabı kullanın.
- İnfraorbital sinire (IoN) erişim sağlamak için, orbital içeriği hassas bir pamuklu çubukla nazikçe saptırın ve IoN'den üst çaprazdan geçen anterior etmoidal siniri aşırı germemeye dikkat edin. Hassas pamuk uçlu bir çubuk ve bir yayma hareketi kullanarak bir çift Dumont forseps kullanarak IoN'yi çevredeki bağ dokusundan serbest bırakın. Olası kanamadan kanı emmek için swabı kullanın.
- Bir ligasyon gerçekleştirmek için, tek bir kromik bağırsak parçasının bir ucunu frontal kemik boyunca aşağı, IoN'ye medial olarak itin ve IoN'ye paralel ve daha düşük birkaç milimetre ilerletin. Ligatür şimdi IoN ve frontal kemik arasında yerinde tutulur.
- 45 derece açılı bir Dumont forsepsin ucunu, bağa yakın bir yere yerleştirmek için IoN'nin altına kaydırın. Forsepsin bağını ve ucunu ortaya çıkarmak için IoN'yi yanal olarak yavaşça geri çekin. Bağı forseps ile kavrayın ve forsepsleri IoN'nin altından yanal olarak çekin.
- Bağın her iki ucu da IoN'den az ya da çok eşit uzaklıkta olana kadar bağı yörünge boşluğundan dışarı çekin.
- Daralma derecesi üzerinde mükemmel kontrol sağlamak için bağın iki ucundan bir "kayma düğümü" yapın ve düğümü IoN'ye doğru kaydırın. IoN'yi daraltmak için düğümü daha fazla kaydırın, böylece sinirin çapı sadece fark edilir bir miktarda azalır. Daralma miktarı sabit kalacak şekilde kayma düğümünün üstüne normal bir düğüm atın (yani, yarık düğümün kaymasını önlemek için .,).
- Düğümden yaklaşık 2 mm serbest uç bırakacak şekilde bitişik harfleri kesin.
- İlkinden 2 mm aralıklarla ikinci bir ligasyon yapmak için aynı prosedürü tekrarlayın (2.11 ila 2.15. adımlar).
- Sahte cerrahi için 2.2 ila 2.10 arasındaki adımları uygulayın.
- Polyester dikişler (4-0) kullanarak kafa derisi kesisini kapatın ve farenin ısıtılmış bir ped üzerinde iyileşmesine izin verin. Sternal yaslanmayı sürdürmek için yeterli bilinci yeniden kazanana kadar hayvanı gözetimsiz bırakmayın ve tamamen iyileşene kadar hayvanı diğer hayvanların yanına geri göndermeyin.
- Nöropatik ağrı gelişimi üzerinde önleyici analjezik etkilerden kaçınmak için, cerrahi sonrası ağrı için analjezi uygulamayın.