Bir Murin Modelinde Kapalı Kafa Hafif Travmatik Beyin Hasarı Oluşturma

Hayvan modellerini içeren tüm prosedürler, yerel kurumsal hayvan bakım komitesi ve JoVE veteriner inceleme kurulu tarafından gözden geçirilmiştir.

1. Kemirgenlerde hafif travmatik beyin hasarının (TBI) deney düzeneğinin hazırlanması ve indüksiyonu

NOT: Travmatik beyin hasarı (TBI) deneylerinin başlamasından 30 dakika ila 1 saat önce kemirgenleri iklimlendirmek için tutma alanına aktarın. Prosedürün gürültüsünden minimum düzeyde etkilenen bir tutma alanı seçin.

1. Deney için gerekli tüm malzemeleri hazırlayın ve doğru kurulum için kurulumu kontrol edin (, örneğin , parametreleri çalışmanın amacına göre ayarlayın) (~5 – 10 dakika).
   NOT: Yaralanma şiddeti, polyester membranın kalınlığı seçilerek ayarlanabilir. Çalışmalarımıza dayanarak, farelerde hafif ila orta şiddette TBI için 25.4 ila 102 μm'lik bir membran kalınlığı kullanılmaktadır. Daha önce sıçanlarda hafif ila orta derecede TBI üretmek için 76.2 ila 127 μm kalınlığında membranlar kullandık.
   1. Polyester membranı dikkatlice kesin, tahrik ve sürücü bölümleri arasına yerleştirin ve bağlantı cıvatalarını sıkarak sabitleyin.
   2. Hızlı açılan bağlantı parçaları kullanarak gaz deposunu şok tüpüne bağlayın. Membranın sürücü ve tahrik edilen bölümler arasına sıkıca sabitlendiğinden emin olun.
   3. TBI indüksiyonu sırasında patlama dalgası özelliklerini izlemek için şok tüpünün çıkışına 120° aralıklarla üç basınç sensörü yerleştirin.
   4. Takılı mikrometreyi kullanarak şok tüpü aparatının ucuna olan mesafenin her bir konu için doğru olduğundan emin olun. Tutarlı yaralanma değerlendirmesine izin vermek için kemirgen başının konumunu (, pozisyon, mesafe) çalışmalarda sabit tutun.
      NOT: Patlama dalgasının kafaya çarpma yönü seçilerek farklı yaralanma türleri indüklenebilir. Burada tarif edilen hafif ila orta şiddette TBH'yi indükleme prosedürü için, vücut, patlama dalgasının başın yan tarafına çarptığı şok tüpüne dik olarak yerleştirilir. Bu ayarda, kafanın serbest hareket etmesine izin verilir ve bu nedenle patlama dalgasına ve hızlı dönme kuvvetlerine maruz kalır, bu da darbe ve kontrecoup etkilerinin oluşmasına izin verir.
   5. Yazılımın grafik kullanıcı arayüzünü (GUI) kullanarak basınç sensörlerinden kaydı başlatın.

2. Kurulumda kemirgenlerin anestezisi ve konumlandırılması

1. Kemirgenleri bekleme odasından aktarın ve oksijende% 4 izofluran ile anestezi indükleyin ve sıkıntı ve ağrıyı azaltmak için oksijende% 2 izofluran ile koruyun.
   NOT: Devam etmeden önce hayvanın ayak parmağı veya kuyruk çimdiklenmesine tepki vermediğinden emin olun. Anestezi indüksiyonunun, sahte kontroller de dahil olmak üzere tüm deney hayvanları için tutarlı olduğundan emin olun. Bu işlem düşük seviyeli ve kısa süreli bir anestezi gerektirir.
2. Periferik organları patlama dalgasından korumak için tamamen uyuşturulmuş kemirgeni yastıklamalı polivinil klorür (PVC) boru kalkanına yerleştirin.
   NOT: Kontrol denekleri anestezi altına alınır ve kurulumun yakınına yerleştirilir, ancak doğrudan patlama dalgasına maruz kalmazlar. Kontrollerin şok tüpü tarafından üretilen gürültüye maruz kaldığından emin olun.
3. Kemirgenin başını baş yerleştirme alanına yerleştirin ve doğrudan koruma aparatına yerleştirilmiş destek veya bir gazlı bez pedi ile aşağıdan destekleyin. Oksipital kondil koruyucu kalkanın kenarı ile aynı hizada olacak şekilde her bir kemirgenin anatomisine göre baş hizalamasını belirleyin.
   NOT: Mortaliteyi azaltmak için basınç dalgasını doğrudan beyin sapına yönlendirmekten kaçının. Beyin sapının solunum merkezinin ve servikal omuriliğin yaralanmasının, TBH'nin kemirgen modellerinde solunum anormalliklerine ve hatta ölüme katkıda bulunduğu bilinmektedir.

3. Kemirgenlerin patlama dalgasına maruz kalması

1. {{}}Membranı parçalayan ve bir basınç dalgasının oluştuğunu doğrulayan yüksek bir patlama üreten bir basınç artışı oluşturmak için basınçlı gaz tankının ana valfini hızla açın. Zar, deneyden sonra çıkarıldığında görsel olarak yırtılacaktır.
   NOT: Daha fazla analiz için kemirgenin yaşadığı dönme ivmesinin darbe ve contrecoup etkilerini yakalamak için yüksek hızlı bir kamera kullanılabilir.
2. Patlamayı duyduktan hemen sonra gaz akışını kapatın.