Akut Fare Beyin Dilimlerinde Oksijen Tüketim Hızının Ölçülmesi

Özet

Kaynak: Zhi, L. ve ark., Yetişkin Farelerden Alınan Akut Striatal Dilimlerde Oksijen Tüketim Oranının Ölçümü. J. Vis. Uzm. (2022).

Bu video, fare striatal beyin dilimlerinde mitokondriyal oksijen tüketim oranının (OCR) nasıl ölçüleceğini göstermektedir. Doku plakasını ve sensör kartuşunu hazırlama, bunları akı analizörüne yükleme adımlarını detaylandırır ve OCR modellerinin altında yatan hücresel süreçleri açıklar.

Protokol

Hayvan örneklerini içeren tüm prosedürler, uygun hayvan etik inceleme komitesi tarafından gözden geçirilmiş ve onaylanmıştır.

1. Hidrat kartuş sensörleri (testten 1 gün önce)

1. Hücre dışı akı test kitini açın (bkz. Malzeme Tablosu) ve hem sensör kartuşunu (yeşil) hem de yardımcı plakayı (şeffaf; Şekil 1A). Sensör kartuşunu bir kenara koyun (sensörler yukarı) ve sensörlere dokunmayın.

Sonuçlar

Şekil 1: Hücre dışı akı analizörünü, hidrat kartuşunu, sensörleri ve plakayı gösteren görüntüler. (A) Bir kalibrasyon plakasının (yardımcı plaka) üzerinde oturan sensör kartuşu. (B) Yardımcı plakanın ve sensör kartuş pla.......

Malzemeler

Bu makalede kullanılan malzemelerin listesi

Ad	Şirket	Katalog numarası	Yorumlar
Accumet AB150 pH tezgah üstü ölçüm cihazı	Thermo Fisher Scientific	13-636-AB150	To measure pH
Antimisin A'dan Streptomyces sp.	SIGMA	A8674	Mitokondrinin kompleks III'ünü inhibe etmek<
Sığır Serumu Albümini (BSA)	SIGMA	A6003	Modifiye yapay beyin omurilik sıvısı yapmak için (BSA-ACSF)
Karbonil siyanür 4-( triflorometoksi) fenilhidrazon (FCCP)	SIGMA	C2920	To uncouple mitokondrial solunum
D-Glucose<	G8270	To make artificial beyin omurilik sıvısı (ACSF)
DMSO	SIGMA	D8418	To dissovle compounds
HEPES	SIGMA	H3375	To make artificial beyin omurilik sıvısı (ACSF)
Nemlendirilmiş karbondioksit olmayan inkübator	Fisher Scientific	11-683-230D	Plakaları 37 °C'de nemlendirmek
Streptomyces diastatochromogenes'ten oligomisin	SIGMA	O4876	Mitokondriyal ATP sentazı inhibe etmek
Parafilm	SIGMA-ALDRICH		sealing film
Seahorse XF Calibrant Solution 500 mL	Denizatı Biyobilimi	103681-100<
Seahorse XF Hücre Dışı Akı Analizörü	Seahorse Bioscience		Oksijen tüketim oranını analiz etmek için kullanılan ekipman, old generation
Denizatı XFe24 Hücre Dışı Akı Analizörü	Seahorse Bioscience		Oksijen tüketim oranını analiz etmek için kullanılan ekipman, new generation
Denizatı XF24 FluxPaks	Seahorse Bioscience	101174-100	Akı analizörü sensör kartuşları, doku kültürü plakaları, yakalama ekranları, kalibrant solüsyonu ve kalibrasyon plakaları paketi; tahlil kiti.
Sodyum piruvat	SIGMA	P2256	To prevent any substrate-limite-constraints of substrate supply
Paslanmaz çelik biyopsi punches	Miltex		Dilimleri delmek için kullanılan cihaz
Steril hücre kültürü kabı, 35 x 10 mm	Eppendrof	30700102	Used for slice punch
Vibratom	Leica	VT1200	To slice brain tissue
Water bath	Thermo Scientific Precision	282-115	To heat buffer and solutions

tr style='height:19px;'>td style='overflow:hidden;padding:0px 3px;vertical-align:top;'>SIGMA içintd style='overflow:hidden;padding:0px 3px;vertical-align:top;white-space:normal;word-wrap:break-word;wrap-strategy:4;'>Denizatı kalibrasyonu için çözüm