Bu videoda, bir sıçan tibial nöroma transpozisyonu (TNT) modeli oluşturmak için bir prosedür gösterilmektedir. Anestezi uygulanmış bir sıçanın arka bacağındaki tibial siniri açığa çıkardıktan sonra, siniri kesin. Daha sonra, deri altı bir tünel oluşturun, kopan siniri tünelden geçirin ve yerine dikin. Reinnervasyon için bir hedefin yokluğunda, kopmuş sinirden düzensiz aksonal çıkıntılar, nosiseptörleri uyararak nöropatik ağrıyı tetikleyen bir nöroma oluşturur.
Bu içeriği görüntülemek için JoVE aboneliğiniz gereklidir. Giriş yapın veya ücretsiz denemenizi bugün başlatın.
Yöntem makalesi
Tibial Nöroma Transpozisyonunun Sıçan Modelinin Oluşturulması
1.1K görüntülenme
⸱
28 Nisan 2025
Bu makalede
Özet
Protokol
Hayvan modellerini içeren tüm prosedürler, yerel kurumsal hayvan bakım komitesi ve JoVE veteriner inceleme kurulu tarafından gözden geçirilmiştir.
1. Anestezi ve preparatasyon
NOT: Bu çalışma, 12 haftalık 15 erkek Sprague Dawley sıçan üzerinde yapılmıştır.
- %5 izofluran ile indüksiyonla hayvanları uyuşturun ve anesteziyi %2-%3 izofluran ile koruyun.
NOT: %2 izofluran ile bakım genellikle trakeal entübasyon veya mekanik ventilasyona gerek kalmadan yeterli anestezi ve spontan solunum ile sonuçlanır. - Ayağı cımbızla sıkıştırarak hayvanların reflekslerini kontrol edin. Devam etmeden önce hayvanın tepkisiz olduğundan emin olun. Ameliyat alanını dizden ayak bileğine kadar elektrikli tıraş makinesi ile tıraş edin ve kuruluğu önlemek için gözlere oftalmik merhem sürün. Karın bölgesine deri altına 0.5 mg / kg analjezik karprofen enjekte edin.
- Anestezi uygulanan fareyi, başı sola veya sağa bakacak ve bacağı cerrahın yanına gelecek şekilde sırt üstü yatırın. Alt arka ekstremiteyi, medial malleol yukarı bakacak şekilde ekzodöndürün. Fareyi 6x büyütmeli bir stereo cerrahi mikroskop altına yerleştirin.
- Traş edilmiş alanı üç alternatif tur iyot bazlı ovma ve ardından alkolle dezenfekte edin. Bacağın üzerine ameliyat deliği olan steril bir tabaka yerleştirin, böylece sadece ameliyat alanı görünür. Ameliyat sırasında bu steril koşulların korunduğundan emin olun.
2. Surgery
- Ameliyat alanını yatay tutmak için ayak bileğinin altına küçük bir pamuklu çubuk yerleştirin. Dizini bulun ve arka pençenin medial tarafı üzerinde baldırın ortasından ayak bileğine kadar bir neşter kullanarak nazikçe 1-2 cm'lik uzunlamasına bir kesi yapın. Gerekirse, kas katmanları görünene kadar cildi ve deri altını mikro makasla daha fazla açın.
- Yüzeysel nörovasküler demeti iki veya üç beyaz ve daha kalın mor/kırmızı bir çizgi olarak tanımlayın, bazen kas katmanları üzerinde serbestçe hareket edebilen küçük dalları vardır. Bir elektrokoter kullanarak (Malzeme Tablosuna bakınız), ameliyat alanındaki herhangi bir aktif kanamayı veya sızıntıyı pıhtılaştırın. Nörovasküler demete zarar vermemeye dikkat edin.
- 2.2'lik yüzeysel nörovasküler demetin hemen arkasında, gastroknemius kasları arasındaki fasyayı açmak için künt bir şekilde diseksiyon yapın. Kasların fasyası arasında tibial sinir bulunabilir. Tibial sinir, nörovasküler demetteki yüzeysel sinirin yaklaşık üç katı büyüklüğündedir. Tibial kemiği ek bir dönüm noktası olarak kullanın (tibial sinir, tibial kemiğin hemen arkasında yer alır).
- Tibial siniri ve çatallanmasını tanımlayın.
NOT: Çatallanma genellikle sinirin üzerinde uzunlamasına daha hafif bir çizgi ile görülebilir. - Tibial siniri çevredeki vasküler demetlerden dikkatlice diseke edin. Tibial siniri künt bir şekilde hareket ettirerek ve tibial siniri hareket ettirirken bir miktar gerilme gösteren açıkta kalan dokuyu keserek diseksiyonu gerçekleştirin.
NOT: Diseksiyon sonrası tibial sinir çapraz venlere bağlanırsa, bu venler tüm tibial siniri açığa çıkarmak için pıhtılaştırılabilir. Tibial demetin kendisini pıhtılaştırmamaya dikkat edin. - Tibial siniri, çapraz kas tabakasının altında kaybolana kadar proksimal olarak açığa çıkarın. Bu noktada, tibial sinir, arka pençenin dize doğru daha derinlerine dalıyor gibi görünüyor. Tibial siniri ayak bileğine kadar distal olarak açığa çıkarın.
NOT: Tibial sinir daha distal olarak maruz kaldığında, çapraz kollajen liflerinin (yani sinir liflerinin yönüne dik olan liflerin) miktarı artacaktır. Bu kollajen liflerinin, tibial sinirin transpoze edilmesi için yeterli uzunluğu sağlamak için kesilmesi gerekir.- Tüm tibial sinir açığa çıktığında, sinirin dehidrasyonunu önlemek için kas katmanlarını geri yerleştirin. Sinir susuz kalırsa (yani daha sert, donuk ve kırışık hale gelir) ve kas katmanlarıyla kaplamak yeterli olmazsa, nemlendirmek için salin damlaları ekleyin.
- Künt bir mikrocerrahi aleti, tercihen bir mikro iğne tutucu kullanarak, deri altı bir tünel yapmak için pretibial cildi subkutan kas tabakasından diseksiyon yapın. Bunu yapmak için cildi yukarıda tutun ve künt ucu cilde paralel olarak dokuya doğru itin. Nöromayı test etmek için alanın kolay erişilebilirliğini sağlamak için tünelin ucunun pretibikal veya daha lateral olarak yerleştirildiğinden emin olun.
- İzofluranı %5'e yükseltin. Tibial sinire geri dönün ve onu açığa çıkarın (yani, adım 2.6'da açıklanan yere geri dönün). Tibial siniri (yani her iki plantar dalı) ayak bileğine yakın en distal seviyede kesin. İzofluranı normal% 2 -% 3 seviyesine düşürün.
- Mikroskop büyütmesini 10x veya 16x olarak değiştirin. Adım 2.8'de yapılan kesiğe proksimalde tibial sinirin epinöryumunu tanımlayın veya tibial sinirin daha proksimal bir bifurkasyonu durumunda, adım 2.8'deki kesiğe proksimalde hem medial hem de lateral plantar dalların epinöryumunu tanımlayın.
NOT: Epinöryum, daha sarı ve yumuşak olan içindeki sinir liflerine kıyasla daha beyaz ve daha sıkıdır. - Dikkatlice 8-0 naylon sütür (bkz. Malzeme Tablosu) proksimal sinir ucunun epineuriumundan epineurium cımbızla dikkatlice tutularak ve iğneyi sinir ile epinöryum arasına yaklaşık 0.5 mm'lik bir ısırık ile koyarak. Sütürü çekin ve adım 2.7'de yapılan deri altı tünelin sonunda iğne ile deri altından bir ısırık alın. Siniri lateral olarak deri altı tüneline aktaracak bir düğüm yapın.
NOT: Her iki plantar dal da ortak bir epineurium'u paylaşıyorsa, bir sütür yeterli olacaktır. Her iki plantar dalın da kendi epinuriumu varsa, her epineurium ayrı ayrı sabitlenmelidir. Dikişi deriden geçirmekten kaçının; sadece deri altından düzeltin. - Koyu renkli (tercihen mavi veya siyah 4-0 sütür) daha kalın bir sütürü, cilde nüfuz etmeyecek şekilde fiksasyonlu sinir ucuna aynı hizada yerleştirin. Dikişin cildin dışından göründüğünden emin olun. Pençe ve kasları hareket ettirdikten sonra sinirin yerinde kalıp kalmadığını kontrol edin. 4-0'da 8-0'a göre biraz daha uzun bir dikiş ucu ile dikiş uçlarını kesin Dikiş.
- Mikroskobun büyütme oranını tekrar 6x olarak değiştirin. 8-0 kullanarak cildi intraepidermal dikişlerle kapatın Cildi dikin ve pamuklu bir bez kullanarak cildi% 0.9 NaCl ile nazikçe temizleyin.
3. Cerrahi sonrası tedavi
- Fareyi rahat bir pozisyonda bir kağıt havlunun altına temiz bir kafese koyun. Oda soğuksa, kafesin bir kısmının altına bir ısı yastığı yerleştirin (hayvanın gerektiğinde ısıdan kaçabilmesi gerektiğinden, kafesin sadece bir kısmının altına). Yiyecek ve suya kolay erişim sağlayın.
- Sternal yaslanmayı sürdürmek için yeterli bilinci yeniden kazanana kadar ameliyat sonrası fareyi gözetimsiz bırakmayın. Sıçan, ameliyattan sonra anesteziden tamamen iyileştiğinde diğer hayvanların şirketine geri dönebilir. Bu genellikle 1 saat sonra ve sıçan normal yürüme düzenini ve davranışını sergilediğinde olur.
- Ameliyattan 24 saat ve 48 saat sonra, ameliyat sonrası ağrıyı tedavi etmek için deri altına (karın bölgesi) 0,5 mg / kg carprofen dozu uygulayın.
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Malzemeler
| Ad | Şirket | Katalog numarası | Yorumlar |
|---|---|---|---|
| Carprofen | Local Veterinary Pharmacy< | Yerel veteriner eczanesi kaprofen seyreltmesi | |
| Cotton swabs | Nobamed | 974255 | |
| Elektrokoter | Fine Science Tools | 18010-00 | |
| Ethanol 70% | Interchema BV | 400406 | |
| Ethilon 4.0 | Johnson & Johnson | 1854G | ÖNEMLİ: renk mavi veya siyah |
| Ethilon 8.0 | Johnson & Johnson | BV130-5 | |
| Isoflo, isoflurane Zoetis | Dechra Veteriner Ürünleri | B506 | |
| Mesh bottom cages | StoeltingCo | 57816 and 57824 | |
| Micro forseps | Fine Science Tools | 11251-35< | |
| Micro needle holder | Fine Science Tools | 12076-12 | |
| Micro scissors | Fine Science Tools | 15019-10< | |
| Mikro cımbız | Fine Science Tools | 11254-20 | |
| NaCl 0.9 | Trademed | H7 1000-FRE | |
| Needle holder | Fine Science Tools | 12004-16< | |
| Oftalmik merhem | Yerel Veteriner Pharmacy | n/a< | |
| Scalpel | Fine Science Tools | 10003-12 | |
| Scissors | Fine Science Tools | 14001-12 | |
| Stereo cerrahi mikroskop | Leica | A60 F | |
| Steril sheet with hole | Evercare OneMed | 1555-01 | |
| Cerrahi bıçak nr.15 | Fine Science Tools | 10015-00 | |
| Tweezers | Güzel Bilim Araçları | 11617-12< |
