Bir Sıçan Modelinde Yüksek Göz İçi Basıncının İndüksiyonu

Özet

Kaynak: Lani-Louzada, R., ve ark., Kemirgenlerde Cerrahi Olarak İndüklenen Glokom için Limbal Vasküler Pleksusun Tam Daire Koterizasyonu. J. Vis. Uzm. (2022)

Bu video, bir sıçan modelinde yüksek göz içi basıncının (GİB) indüksiyonunu ve izlenmesini göstermektedir. İşlem, limbal kan damarlarının koterize edilmesini içerir, bu da damar tıkanıklığı ve yüksek GİB ile sonuçlanır. Daha sonra sıçanın iyileşmesine izin verilir ve GİB, karşılaştırma için hem deneysel hem de kontrol gözlerinde düzenli olarak izlenir.

Protokol

Hayvan modellerini içeren tüm prosedürler, yerel kurumsal hayvan bakım komitesi ve JoVE veteriner inceleme kurulu tarafından gözden geçirilmiştir.

Bu çalışmada, her iki cinsiyetten 2-3 aylık ve 180-320 g ağırlığında Lister Hooded sıçanlar kullanıldı. Bununla birlikte, prosedür çeşitli yaş aralıklarındaki farklı sıçan suşlarına uyarlanabilir.

Oküler hipertansiyon cerrahisi ve klinik takip

1. {{}}Standart peletlenmiş gama ışınlanmış gıda (Nuvilab CR-1, Quimtia S/A, Brezilya) ve su (üçlü filtre, toksik olmayan aktif kömürlü) ile kontrollü bir sıcaklık ortamında ve 12 saatlik aydınlık/karanlık döngüsünde ev hayvanları (Nuvilab® CR-1, Quimtia S/A, Brezilya) ve su (üçlü filtre, toksik olmayan aktif kömürlü) ad libitum.
2. Üç kısım %10 ketamin hidroklorür ve bir kısım %2 ksilazin hidroklorürden (seyreltici: steril su) oluşan bir stok anestezik kokteyl karışımı hazırlayın.
3. Sırt derisini tutarak hayvanı nazikçe kısıtlayın ve karışımın vücut ağırlığının 1 μL/g'sinin intraperitoneal uygulamasıyla anesteziyi indükleyin (ketamin: 75 mg / kg; ksilazin: 5 mg / kg). Yaklaşık 5 dakika sonra ayak parmağınızı kıstırma tepkisi vererek uygun anesteziyi kontrol edin.
4. % 0.5 göz damlası proxymetakain hidroklorür damlatarak her iki göz yüzeyini topikal olarak uyuşturun. 30-60 saniye bekleyin ve kalan solüsyonu, nazal veya lateral bulber konjonktivaya küçük bir steril pamuklu çubukla hafifçe dokunarak dünyanın ön yönünden çıkarın.
5. Hayvanı, kornea yüzeyine tonometrenin ucuna kolayca erişilebilecek şekilde tezgah üzerinde ventral dekübit pozisyonuna yerleştirerek hem deneysel hem de kontralateral kontrol gözlerinin temel GİB'sini ölçün.
6. Aplanasyon veya geri tepme el tonometresi kullanın (Şekil 1A). Tonometre ucunu, merkezi kornea bölgesine dik olarak hafifçe dokunacak şekilde konumlandırın. Makine tarafından oluşturulan 3-5 güvenilir ortalamayı elde edin ve ortalamasını alın. Her ortalama, altı başarılı bireysel ölçümden sonra cihaz tarafından otomatik olarak hesaplanır.
   1. Geri tepme tonometresini bir prob ile yükleyin ve probun düşmesini önlemek için cihazın ucunu yukarı doğru yerleştirirken açmak için ölçüm düğmesine bir kez basın. Açtıktan sonra, ekranda ekipmanın ölçüme hazır olduğunu gösteren 00 görüntülenecektir.
   2. Cihazı, probun ucu korneadan 1-4 mm uzakta olacak şekilde konumlandırın ve ekipmanı hareket ettirmeden ölçüm düğmesine hızlı ve dikkatli bir şekilde basarak ölçümler alın. Her başarılı ölçüm kısa bir bip sesiyle tanımlanır ve altı kez sonra ortalama cihazın ekranında görüntülenir.
      NOT: Aplanasyon tonometresi ile uzun bir deneyime rağmen, tüm prosedürü optimize etmek için yazarlar, güvenilir GİB ölçümünün daha kolay elde edilmesini sağlayan bir geri tepme tonometresinin kullanılmasını önermektedir.
7. Hayvanı stereo mikroskop altında hafif bir lateral dekübit pozisyonuna yerleştirin ve deney gözünü 40x büyütmede inceleyerek ameliyatı dikkatlice planlayın. İşlem sırasında bir damla karmeloz sodyum veya sodyum hyaluronat damlatarak kontralateral kontrol gözünü yağlamayı unutmayın.
8. Kavisli forsepslerin yardımıyla, limbusun 360°'sini çevreleyen damar sistemini ortaya çıkarmak için deneysel göz küresini nazikçe ileri doğru itin. Öte yandan, korneanın etrafındaki damarları düşük sıcaklıkta oftalmik koter (1.300 ° F; Bovie Medikal, ABD) (Şekil 1B-E).
   NOT: Bahsedilen koter, limbal damar sistemine uzunlamasına temas etmesi gereken yuvarlak bir uca sahiptir.
9. Kornea çevresini dağlamamaya dikkat edin, çünkü bu, retina fonksiyonunun in vivo değerlendirilmesini engelleyen ameliyat sonrası kornea opaklaşmasına neden olabilir.
10. Başarılı bir cerrahi prosedürün belirtileri olan skleral limbusta küçük dairesel koterizasyon izlerinin ortaya çıktığını, limbal vaskülatür obliterasyonunu ve ameliyat edilen gözde göz bebeği genişlemesini gözlemleyin.
    NOT: Sıçanların ve farelerin limbal damar sistemi anatomik olarak benzer olduğundan ve kullanılan koterin hafif küçük bir ucu olduğundan, bu protokol herhangi bir adaptasyon olmaksızın fare gözü için de işe yarayabilir.
11. Ameliyattan sonra, adım 1.5'te anlatıldığı gibi her iki gözde de ameliyat sonrası GİB'yi kontrol edin.
12. Bir damla oftalmik prednizolon asetat (1.2 mg / mL) uygulayın ve bunu deney gözünün ön yüzeyi ile yaklaşık 40 saniye temas halinde tutun, daha sonra oftalmik bir antibiyotik merhemi ile değiştirin (oksitetrasiklin hidroklorür 30 mg / g artı polimiksin B 10.000 U / g; veya siprofloksasin 3.5 mg / g). İşlemden sonra ağrıyı önlemek için intramüsküler tramadol hidroklorür enjeksiyonu (tek doz; 2 mg / kg) yapın.

Sonuçlar

Şekil 1: Limbal vasküler pleksusun termal koterizasyonu ve retina fonksiyonuna sonuçları in vivo. (A) Sıçanlarda GİB'yi ölçmek için alternatif yöntemler: ribaund tonometrisi (üstün) ve aplanasyon tonometrisi (düşük). (B-E) Cerrahi işlem; ok ucu: limbal vasküler pleksus; Ok: göz küresinin ön yüzeyini ortaya çıkarmak ve limbal dam...

Malzemeler

Bu makalede kullanılan malzemelerin listesi

Ad	Şirket	Katalog numarası	Yorumlar
Cautery Low Temp Fine Tip 10/bx	Bovie Medical Corporation	AA00	Düşük sıcaklıkta oftalmik koter
Cetamin	Syntec do Brasil Ltda	000200-3-000003	Ketamin hidroklorür %
Ecofilm	Cristália Produtos Químicos Farmacêuticos	Ltda MS-1.0298.0487	Karmeloz sodyum %
Hyabak	União Química Farmacêutica Nacional S/A	MS-8042140002	Sodyum hyaluronat %
Icare Tonolab	Icare Finlandiya Oy	TV02 (model numarası)	Ribaund el tipi tonometre
Maxiflox	Cristália Produtos Químicos Farmacêuticos Ltda	MS-1.0298.0489	Siprofloksasin 3.5 mg / g
Ster MD	União Química Farmacêutica Nacional S/A	MS-1.0497.1287	Prednizolon asetat %
Terolac	Cristália Produtos Químicos Farmacêuticos	Ltda MS-1.0497.1286	Ketorolac trometamol 0.5
Terramicina	Laboratórios Pfizer Ltda	MS-1.0216.0024	Oksitetrasiklin hidroklorür 30 mg/g + polimiksin B 10.000 U/g
Tono-Pen XL	Reichert Technologies	230635	Dijital aplanasyon el tipi tonometre
	Carl Zeiss-Cerrahi		ve retina diseksiyonu için stereo mikroskop

100.50.150.12%