Video, kalbin aritmiye duyarlılığını değerlendirmek için intrakardiyak sinir sistemini uyarmak için ex vivo bir tekniği göstermektedir. Bir perfüzyon aparatı kullanılarak, izole edilmiş bir fare kalbi oksijenli bir tampon ile perfüze edilir. İntrakardiyak sinir sistemi daha sonra aritmileri indüklemek için yüksek bir frekansta uyarılır.
Bu içeriği görüntülemek için JoVE aboneliğiniz gereklidir. Giriş yapın veya ücretsiz denemenizi bugün başlatın.
Yöntem makalesi
Aritmiye duyarlılığı değerlendirmek için intrakardiyak sinir sisteminin uyarılması
794 görüntülenme
⸱
28 Nisan 2025
Bu makalede
Özet
Protokol
Hayvan örneklerini içeren tüm prosedürler, uygun hayvan etik inceleme komitesi tarafından gözden geçirilmiş ve onaylanmıştır.
1. Langendorff Aparatının Hazırlanması
NOT: Piyasada bulunan bir Langendorff perfüzyon sistemi kullanılmaktadır.
- Modifiye edilmiş bir Krebs-Henseleit çözeltisi hazırlayın (119 mM sodyum klorür, 25 mM sodyum bikarbonat, 4.6 mM potasyum klorür, 1.2 mM potasyum fosfat monobazik, 1.1 mM magnezyum sülfat, 2.5 mM kalsiyum klorür, 8.3 mM glikoz ve 2 mM sodyum piruvat). Kalsiyum çökelmesini önlemek için, perfüzyon çözeltisine %95 oksijen/%5 karbondioksit karışımı ekleyin. Tamponu 0.22 μm'lik bir gözenek boyutuyla filtreleyin.
- } Gerektiğinde kardiyak elektrofizyoloji ve aritmogenez üzerindeki etkisini araştırmak için tampona bir farmakolojik ajan ekleyin.
- Su banyosunu başlatın ve içine %95 oksijen/%5 karbondioksit karışımı içeren perfüzyon solüsyonunu yerleştirin. Su banyosunun sıcaklığını, kanülden hemen önceki perfüzyon solüsyonu sıcaklığı ~ 37 ° C olacak şekilde ayarlayın.
- Doğru sıcaklığa ulaşılır ulaşılmaz, silindir pompasını çalıştırın ve cihazı perfüzyon solüsyonu ile doldurun.
- Kalbi takmadan önce pompalama hızını ayarlayın, böylece cihaza monte edilirken kanülde hava kabarcığı kalmaz.
2. Donanım ve Yazılım Hazırlama
- Perfüzyon basıncının, akış hızının ve kalp atış hızının sürekli olarak kaydedilmesi için bir dijital veri toplama sistemini ve ilgili yazılımını Langendorff cihazına bağlayın.
- Genel ayarlarda hedeflenen perfüzyon basıncını 80 mmHg olarak ayarlayın.
- Kayda başla.
- Belirlenmiş bir dijital uyaran üreteci ile veri kaydı ve stimülasyon için, platin elektrotlu bir elektrofizyoloji kateteri, 0,5 x 0,5 mm'lik bir elektrot yüzeyi ve 0,5 mm'lik bir elektrot aralığı kullanın.
- Cihaza takıldıktan sonra kateteri kalbin konumlandırılacağı bölgeye yakın bir yere yerleştirin.
- Kateterden 2 elektrot seçerek stimülasyonu hazırlayın ve 100 ms'lik bir döngü uzunluğu kullanın.
3. Kalbin Hazırlanışı
- Soğuk (~2 - 4 °C) perfüzyon tamponunu (10 - 20 mL ve 40 - 50 mL, böylece tüm tabak kaplanır) 2 Petri kabına (6 cm ve 10 cm çaplarında) ve kanüllü tabağa ekleyin, ve bunları doğrudan mikroskobun yanına ve altına buzun üzerine yerleştirin. Kanülün etrafına çift düğüm hazırlayın.
- Servikal çıkıktan sonra Mayo makası ve dar desenli forseps kullanarak toraksı açarak kalbi hızla çıkarın. Daha sonra London forsepsini kullanarak diyaframın üzerindeki aort ve vena kava'yı kavrayın ve Şaşılık makası ile omurgaya yakın tüm damarları ve bağ dokusunu keserek kalp-akciğer bloğunu eksize edin.
- Kalp-akciğer bloğunu buz gibi tamponla doldurulmuş ilk kabın (6 cm çapında) içine aktarın ve Şaşılık makası ve London forseps kullanarak kalbe zarar vermeden akciğerleri dikkatlice çıkarın. Ardından, kalbi mikroskobun altına yerleştirin ve Yaylı makas ve Dumont SS forseps kullanarak timus, yemek borusu ve trakeayı dikkatlice çıkarın.
- Kateterin yerleştirilmesi için sağ atriyumun üst kısmında 1,5 - 2 mm'lik bir delik açmak için Yaylı makası kullanın. Pulmoner arterde bir delik açın. Daha sonra aortu doğrudan supra-aortik dalların altından kesin ve düğümün kolayca takılabilmesi için dokuyu çıkarın.
- Sol atriyum etrafındaki majör atriyal yerleşimli ganglionlu pleksis de dahil olmak üzere atriyal yağ yastıkçıklarını sağlam tutun veya dikkatli bir diseksiyonla tamamen çıkarın.
- Kalbi kanül ile tabağa aktarın ve mikroskop altına yerleştirin. Dumont SS forseps ile aortu kanülün üzerinden çekin ve hazırlanan düğümü aortun etrafına sıkıca bağlayın. Aort kapağı ve koroner damarların serbest kalması için kanülün aortun çok derinine yerleştirilmediğinden emin olun.
- Kanülü hızlı bir şekilde Langendorff cihazına takın. Kanülde kabarcık kalmadığından emin olun.
- Perfüzyon basıncını 80 mmHg'ye getirin ve sabit bir basınç perfüzyonuna izin verin.
- Kateteri kalbe dokunmadan veya zarar vermeden sağ kulakçık ve sağ karıncığa dikkatlice yerleştirin ve bantla kanüle tutturun.
- İlk 20 dakikalık dengeleme periyodu için hazırlanan 100 ms'lik döngü uzunluğu ile stimülasyonu başlatın.
- Sabit bir sıcaklık sağlamak için hazneyi kapatın.
4. Elektrofizyolojik Parametreler ve Aritmiz
- Aşağıdaki adımlarda açıklandığı gibi elektrofizyolojik parametreleri değerlendirmek için kateterin distal veya proksimal elektrotları aracılığıyla atriyal veya ventriküler pacing eşiğinin iki katı hızda programlanmış stimülasyon uygulayın.
- 120 ms, 100 ms ve 80 ms'lik bir S1S1 döngü uzunluğunda 10 sn sabit hızlı pacing'den sonra sinüs düğümü kurtarma süresini maksimum dönüş döngüsü uzunluğu olarak belirleyin.
- Wenckebach noktasını en uzun S1S1 döngü uzunluğu (8 uyaran; S1S1: 100 ms; 2 ms kademeli azaltma) 11 AV düğüm iletimi kaybı ile. Atriyoventriküler nodal refrakter periyotları en uzun S1S2 (12 uyaran; S1S1: 120 ms, 110 ms ve 100 ms; 2 ms kademeli S1S2 redüksiyonu ile bir kısa bağlantılı ekstra uyaran) AV nodal iletim kaybı ile.
- Atriyal ve ventriküler refrakter dönemleri en uzun S1S2 (12 uyaran; S1S1: 120 ms, 110 ms ve 100 ms; 2 ms kademeli S1S2 redüksiyonu ile bir kısa birleştirilmiş ekstra uyaran) atriyal veya ventriküler yanıt yok.
- Ventriküler aritmogenezi değerlendirmek için Lambeth Konvansiyonlarına uygun olarak programlanmış bir ekstra stimülasyon (S1S1: 120 ms, 100 ms ve 80 ms, ardından 3 ekstra vuruş; 2 ms kademeli azaltma ile 60 - 20 ms) veya seri çekim hızı protokolleri (S1S1'de 5 sn: 10 ms kademeli azaltma ile 50 - 10 ms) gerçekleştirin.
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Malzemeler
| Ad | Şirket | Katalog numarası | Yorumlar |
|---|---|---|---|
| Sodium chloride | |||
| Sodium hydrogencarbonate | |||
| Potasyum klorür | Değiştirilmiş Krebs-Henleit solution | ||
| Potasyum fosfat monobazik | |||
| Magnezyum sülfat heptahidrat | |||
| Kalsiyum klorür dihidrat | |||
| Glucose | Değiştirilmiş Krebs-Henleit solution | ||
| Sodyum piruvat bioXtra | |||
| Carbogen (%95 oksijen / %5 karbon dioksit) | |||
| Steril filtre steritop-GP 0.22 | |||
| Perfusion system | |||
| Kateter ve fizyolojik parametre için veri toplama sistemi ve ilgili yazılım | |||
| Octapolar kateter | |||
| Stimulus generator | |||
| Stimulation software | |||
| Plastic Wrap | |||
| Spring scissors | |||
| Strabismus Scissors | |||
| Mayo Scissors | |||
| Dumont SS Forceps | |||
| London Forceps | |||
| Narrow Pattern Forceps |
