Yöntem makalesi

Prenatal Sıçanlarda Ensefalopatiyi Modellemek için Hipoksik-İskemik ve İnflamatuar Durumların İndüklenmesi

28 Nisan 2025

Bu makalede

Özet

Loading...
$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Kaynak: Jantzie, L. L., et. al. Sıçanlarda Prenatal Hipoksi-iskemi ile İntramniyotik Lipopolisakkarit Kullanılarak Prematüre Ensefalopatisinin Modellenmesi. J. Vis. Uzm. (2015)

Bu video, uterus kan akışını kısıtlayarak ve LPS enjekte ederek, erken doğum çalışmalarıyla ilgili nöroinflamasyonu ve bozulmuş beyin gelişimini modelleyerek fetal sıçanlarda hipoksik-iskemik ve inflamatuar durumları indüklemek için bir protokol göstermektedir.

Protokol

Loading...
$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Hayvan modellerini içeren tüm prosedürler, yerel kurumsal hayvan bakım komitesi ve JoVE veteriner inceleme kurulu tarafından gözden geçirilmiştir.

1. Anevrizma Klipslerinin Yerleştirilmesi

  1. Her uterin artere bir sıçan 30 G anevrizma klipsi yerleştirin. Proksimal ve distal nabızlar dahil olmak üzere kan akışının durmasını ve tek tek plasentalar da dahil olmak üzere uterus damarlarının koyulaşmasını sağlayın. Açıkta kalan boynuzları ve tüm cerrahi alanı gazlı bezle örtün ve steril tuzlu su ile yıkayın. Tarlayı nemli tutmak için yaklaşık 10 dakikada bir sulayın.
  2. 60 dakika sonra gazlı bezi çıkarın ve tarlayı sulayın. Başarılı bir klips çıkarılması için rahim boynuzlarının ve damarlarının yeterince nemlendirildiğinden emin olun. Forseps kullanarak her bir anevrizma klipsini nazikçe çıkarın. Damarda travmaya neden olmamaya özen gösterin ve çıkarma sırasında doku bütünlüğünü koruyun.
  3. Rahim boynuzlarını ve tarlasını iyice sulayın, amniyotik keselerden başıboş gazlı bez ipliklerini çıkarmaya özen gösterin.

2. Amniyotik Keseciklere

  1. {{}}Her bir amniyotik kesenin tabanında, plasental plakanın hemen önünde, 100 μl lipopolisakkarit (LPS) (4 μg/sac) seyreltilmiş Evan mavisi boyası ile amniyotik sıvıya enjekte edin. Her amniyotik kesesi enjeksiyon için en uygun konuma stabilize etmek ve döndürmek için künt forseps kullanın. Seyreltik Evan'ın mavi boyası, uygun şırınga yerleşimini ve enjeksiyonunu doğrulamada yardımcı olan bir kontrast maddedir.
    NOT: Amniyotik enjeksiyonlar için yalnızca 8 mm 31 G iğne takılı ultra ince 0.3 ml insülin şırıngası kullanın. Daha büyük ölçülü iğnelerin kullanılması kronik amniyotik sıvı kaybına, fetal ölüme ve gebeliğin yeniden emilmesine neden olacaktır. Şırınganın çıkarılması üzerine küçük miktarlarda amniyotik sıvı sızıntısı, amniyotik keseye doğrudan basınç uygulanarak hafifletilebilir. Bazı sıçan fetüsleri bir dereceye kadar oligohidramnios'u tolere edebilir. Bununla birlikte, büyük ölçü iğneleri ile yapılan bir delinmeden veya kronik sıvı sızıntısına neden olan kazara delinmeden kaynaklanan akut amniyotik sıvı kaybı, fetal kayba ve ciddi vakalarda komşu gebeliklerin kaybına neden olur.
  2. Rahim boynuzlarını 3 kez steril tuzlu su ile sulayın.

3. Laparotominin kapatılması

  1. Forseps kullanarak uterus boynuzlarını dikkatlice periton boşluğuna geri koyun. Amniyotik keseler ile orta hat insizyonu arasında yeterli boşluk sağlayarak, 3-0 ipek sütür kullanarak kas-ofasyal tabaka kenarlarını yeniden yaklaştırın. Kas kesisini kapatırken amniyotik keselerin yerleşimine dikkat edin. Bir kese içine veya içinden dikiş atmamaya dikkat edin.
  2. 3-0 ipek sütür kullanarak cilt tabakasını kapatın.
    NOT: Laparotomi, artan gebelikle birlikte cilt ve kas genişlemesine izin vermek için iki kat sürekli sütür halinde kapatılmalıdır. Sürekli dikişler, yara gerginliğinin eşit olarak dağılmasına izin verir. Birden fazla düğüm tahriş edici olduğundan ve anesteziden sonra iyileştikten sonra sıçan tarafından kolayca çiğnenebildiğinden, kesintiye uğramış dikişler daha az arzu edilir. Cerrahi zımbalar istenmez. Cerrahi düğümlerin kuyrukları çok kısa (<3 mm) kesilmelidir.
  3. 26 G'lik bir iğne kullanarak yara kenarlarına deri altına 1 ml %0.125 bupivakain enjekte edin. Boynun ensesinde deri altına bir doz 0.1 mg / kg buprenorfin uygulayın.
  4. İzofluranı kapatın ve fareyi gerektiği gibi havluyla kurulayın. Fareyi temiz bir ev kafesine yerleştirin ve anesteziden iyileşmesini izleyin. Farenin hipotermik hale gelmediğinden emin olun.

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Malzemeler

Bu makalede kullanılan malzemelerin listesi
AdŞirketKatalog numarasıYorumlar
Saline Solution, 0.9SigmaS8776
LPS 011B4SigmaL2630
Evan's Blue DyeSigmaE2129
Surgical glovesBiogel40870
OR TowelsCardinal Health287000-008Sterile
PDI Alkol Hazırlama PedleriFisherbrand06-669-62
Mini Arco Şarj Edilebilir Tıraş MakineleriKent Scientific Corp.CL8787
Blunt ForcepsRobozRS-8100
ScissorsRobozRS-6808
Cerrahi MakasRobozRS-5880
Cerrahi MakasF.S.T.14002-16
SyringeBD3096281 ml
NeedleBD30512225G 5/8
NeedleBD30512830G 1
Pamuk Uçlu AplikatörlerFisherbrand23-400-114Küçük, 6 inç sterile
Pamuk Gazlı Bez SüngerFisherbrand22-362-178
Needle HoldersKent Scientific Corp.INS60010912.5 CM STR
Vessel ClipsKent Scientific Corp.INS60012030G Pressure
3-0 Perma Hand Silk SuturesEthicon1684GSiyah örgülü, 3-0 (2 metrik), 18", emilemez, PS-1 24mm iğne, 3/8 daire
İnsülin ŞırıngalarıBD3284380.3cc 3mm 31G
%

Yeniden basım ve izinler

Bu JoVE makalesinin metnini veya şekillerini yeniden kullanmak için izin iste

İzin iste

Etiketler

Hipoksik skemik Ko ullarUterin Arter Okl zyonuAnevrizma KlipleriLipopolisakkarit EnjeksiyonuAmniyotik S vN roinflamasyon ModeliBeyin Geli imiFetal Ensefalopati

İlgili makaleler