$$\rightleftharpoonup{xx}$$
$$\longleftharp{xx}$$,
$$\longrightharp{xx}$$,
Hayvan modellerini içeren tüm prosedürler, yerel kurumsal hayvan bakım komitesi ve JoVE veteriner inceleme kurulu tarafından gözden geçirilmiştir.
1. Fareler için Gözlüklerin Montajı
- Gözlüklerin montajı için gerekli parçaları hazırlayın (Şekil 1a). Her fare için aşağıdakileri hazırlayın: bir başa takılan naylon çubuk, bir yüksek ve bir alt titanyum çerçeve, deneyin amacına göre uygun güçlere sahip iki lens, 10 mm uzunluğunda bir M1.4 boyutunda vida, M1.4 boyutunda vida için bir somun, M1.4 boyutunda vida için bir somun, 0.3 mm kalınlığında M1.4 boyutunda vida için bir düz rondela, ve iki yapay tırnak ucu. NOT: Farklı yüksekliklerde iki tür çerçeve mevcuttur. Bir fare için, bir yüksek çerçeve ve bir alt çerçeve set olarak kullanılır. Görüş alanlarını simetrik hale getirmek için daha yüksek çerçeveler daha düşük olanların üzerine yerleştirilmelidir. Çerçeveler ve lensler, yazarların araştırma grubu tarafından özel olarak tasarlanmış ve üretilmiştir. Bunlar, bu makalenin ilgili yazarlarıyla iletişime geçilerek edinilebilir. Diğer parçalar perakende alet mağazalarında bulunabilir.
- Çerçeveyi sağ ve sol göz için ayrı ayrı birleştirin.
- En iyi koruyucu etkiyi elde etmek için tırnak ucunu dış yöne bakacak şekilde düzenleyin. Fare görüş alanının maskelenmesini önlemek için tırnak ucu ile çerçeve arasındaki açıyı yaklaşık 130° olacak şekilde ayarlayın (Şekil 1b). Yapay tırnak uçlarını siyanoakrilat yapıştırıcı kullanarak çerçeveye yapıştırın.
NOT: Tırnak uçları, merceğin fare tarafından çizilmesini önlemeye yardımcı olabilir. Tırnak uçlarının yönü zıt olmalıdır çünkü üst çerçeve ve alt çerçeve sırasıyla sağ göz ve sol göz için kullanılır. - Yapıştırıcının tamamen kuruması için en az 12 saat bekleyin, ardından tırnak uçlarının şeklini keserek ve düzelterek yaklaşık 1 cm × 1 cm olacak şekilde ayarlamak için bir tırnak makası kullanın.
- Siyanoakrilat yapıştırıcı kullanarak lensi çerçeveye yapıştırın. Lensi elinizle çerçeveye yerleştirin ve çerçeveyi yatay olarak tutun. Siyanoakrilat yapıştırıcıyı lensin kenarından enjekte edin ve yapıştırıcının yüzey gerilimi ile yayılmasına izin verin.
NOT: Yapıştırıcı lensi aşındırır ve saydamlığını etkiler, bu nedenle yapışkanın yalnızca lensin çevresel kısmına temas ettiğinden emin olun. Kontrol olarak 0 diyoptri (D) Plano lensi ve miyopiyi indüklemek için eksi lensi kullanın. Eksi merceklerin farklı kuvvetlerinin (–10 D ila –50 D) etkisi başka bir yerde açıklanmıştır4. Miyopi indüksiyonunu en üst düzeye çıkarmak için, miyopiyi indüklemek için –30 D lens önerilir. FDM, lensi difüzör olarak 1,5 mL mikrotüpün kapağına değiştirerek aynı cihazla da indüklenebilir.
- Çubuğun düz tarafından rondela ile birlikte naylon çubuğa vidayı sıkın. Deneyden önce gözlükleri ve çubukları sırasıyla hazırlayın ve daha sonraki kullanımlar için saklayın (Şekil 1c).
NOT: Protokol burada duraklatılabilir.
2. Çerçevenin Fare Kafatasına Sabitlenmesi.
- Her gözde kuruluğu önlemek için bir damla %0,1 saflaştırılmış sodyum hyaluronat göz damlası uygulayın.
NOT: Göz yüzeyindeki göz damlaları, kırılma ve eksenel uzunluk ölçümlerinin değerlerini etkileyecektir. Anesteziden sonra tüm ölçümler yapılana kadar göz damlasını kullanmayın. - Anestezi uygulanmış farenin çenesini, kafatasının ön düzlemini yatay hale getirmek için kilden veya yastık olarak kullanılabilecek herhangi bir şeyden yapılmış bir eğime koyun.
- %70 etanol içeren bir pamuklu çubuk kullanarak kulaklar ve gözler arasındaki saç ve saç derisini sterilize edin.
- Cerrahi makas ve cımbız kullanarak kafatasını yaklaşık 0,8 sq.cm açığa çıkarmak için kulaklar ve gözler arasındaki cildi kesin. Periosteumu çıkarmak için diş aşındırma sıvısı ve pamuklu çubuk kullanın. Her farenin ameliyatından önce cerrahi makası ve cımbızı %70 etanol ile sterilize edin.
NOT: Saçların kesilmesi ve steril eldiven giyilmesi gerekebilir. Bu işlemden önce ilgili hayvan bakım komitesinin hükümlerini kontrol ediniz. Çoğu durumda, diş aşındırma sıvısı, kendi kendine kürlenen diş yapıştırıcı sistemindeki eklerden biridir. Diş aşındırma sıvısı mevcut değilse, bunun yerine %70 etanol kullanın. - Çubuğu doğru konuma sabitlemeye yardımcı olmak için lenssiz bir dizi çerçeve birleştirin. Çerçeveleri fare kafasına yerleştirin. Her iki gözün de boş çerçevenin ortasında olduğundan emin olmak için çerçevelerin konumunu dikkatlice ayarlayın.
- Çubuğu fare kafasına takmak için kendi kendine kürlenen bir diş yapıştırıcı sistemi kullanın. Yapıştırma sisteminin sıvısının fare gözüne akmasına izin vermemeye dikkat edin.
NOT: Kendi kendine kürlenen dental yapıştırıcı sistemini kullanma yöntemi ürünler arasında farklılık gösterir. Talimata dikkatlice bakın.
DİKKAT: Dental yapıştırıcı sistemindeki bazı reaktifler toksik olabilir. - Yaklaşık 5 dakika bekleyin ve çubuğun konumunu değiştirmeden çerçeveyi ve somunu dikkatlice çıkarın (Şekil 2a).
- Farenin anesteziden daha çabuk iyileşmesine yardımcı olmak için intraperitoneal olarak 0.75 mg/kg atipamezol hidroklorür enjekte edin. Tamamen iyileşene kadar fareyi ayrı bir kafese koyun. Sternal yaslanmayı sürdürmek için yeterli bilinci yeniden kazanana kadar fareyi gözetimsiz bırakmayın. Protokol buradan duraklatılabilir.
3. Miyopi İndüksiyonunun Başlatılması ve Sonrasında Bakım
- Farenin anesteziden tamamen iyileşmesi için ameliyattan sonra en az 24 saat bekleyin. Çubuğu kavrayın ve lenslerle çerçevelere takın. Teşvikler bu zaman noktasında başlar (Şekil 2b).
NOT: Anesteziden iyileşme sırasındaki rahatsızlığı en aza indirmek ve dental yapıştırıcı sisteminin pıhtılaşması için yeterli zaman vermek için, fareler anesteziden tamamen iyileştikten sonra çerçeveyi takmanız şiddetle tavsiye edilir. Yapıştırıcı sistemin reçine çimentosu, kafa derisinin kesimini tamamen kaplayacaktır. Bu nedenle, enfeksiyonu önlemek ve ameliyat sonrası ağrıyı iyileştirmek için özel bir ameliyat sonrası tedaviye gerek yoktur. Kadrajı ilk kez taktıktan hemen sonra, fareler lensin varlığının bilincinde olacak ve onu çok fazla çizecektir. Kaba davranış birkaç saat sonra normale dönecektir. Lensli fareler, normal farelerle aynı yoğunlukta tutulabilir. - Çerçeveyi çıkarın ve lensin şeffaflığını korumak için lensleri ve tırnak uçlarını haftada en az iki kez pamuklu çubuklarla temizleyin.
NOT: Çerçeveyi çıkarmak ve takmak için fareyi anestezi altına almak gerekli değildir. Farelerle çalışırken asılı kalmalarını sağlamak yerine, farelerin oturması için destek sağlamak, sıkıntıyı azaltabilir.- Ara bir ölçüm gerekiyorsa, fareyi anestezi altına alın ve fareyi daha önce açıklandığı gibi ölçün. Teşvik, fare anesteziden kurtulduktan sonra devam ettirilebilir.
- Kafesi haftada en az iki kez temizleyin.
NOT: Bu, lens netliğini korumaya yardımcı olur. Yiyecek artıklarını filtrelemek için fare ile kafes tabanı arasına bir ağ koymak da yardımcı olabilir. - Vücut ağırlığını ve kaba davranışı izleyin. Tüm deney süreci boyunca bunları aynı yaştaki el değmemiş farelerle karşılaştırın.
NOT: Bazı tırmalama davranışları dışında, tedavi edilmemiş farelerle deney fareleri arasında vücut ağırlığı da dahil olmak üzere önemli bir değişiklik bulunamamıştır.
