Omurilik Yaralanması Koaksiyel Platform Kullanılarak Bir Fare Modelinde Omurilik Kontüzyonunun İndüklenmesi

Özet

Kaynak: Elzat, E. Y. Y., et al., Minimal İnvaziv Tekniğe Dayalı Bir Fare Kontüzyonu Omurilik Yaralanması Modelinin Oluşturulması. J. Vis. Uzm. (2022).

Bu video, bir omurilik yaralanması koaksiyel platformu kullanılarak bir fare modelinde T9 seviyesi omurilikte bir kontüzyon yaralanmasını indükleme yöntemini göstermektedir. T9 seviyesindeki omuriliğe bir ağırlık düşer ve bu da hemen doku renk değişikliğine ve şişmeye neden olan bir kontüzyon oluşturur.

Protokol

Hayvan modellerini içeren tüm prosedürler, yerel kurumsal hayvan bakım komitesi ve JoVE veteriner inceleme kurulu tarafından gözden geçirilmiştir.

1. 9^th torasik vertebra (T9)

NOT: 9-10 haftalık dişi C57BL/6J fareleri Jinan Pengyue Deneysel Hayvan Şirketi'nden (Jinan, Çin) satın alındı.

1. Deney için bir dizi cerrahi aleti otoklavlayın ve ameliyattan önce ameliyat masasını %75 alkolle sterilize edin.
2. Yaralanma ameliyatları için anesteziden 30 dakika önce analjezi için buprenorfin (0.05-2.0 mg / kg, deri altında) enjekte edin. Ardından, fareyi izofluran ile uyuşturun (indüksiyon: ~% 3-5, bakım: ~% 1.5-2). Hayvanın kuyruk veya ayak parmağı tutamının refleksleri tarafından tamamen uyuşturulup uyuşturulmadığını kontrol edin. Anestezi yürürlüğe girdikten sonra, fareyi ameliyat masasının belirlenmiş bir bölümüne yüzüstü pozisyonda yatırın ve korneayı oftalmik merhem ile kaplayın (ameliyat sırasında gözlerin kurumasını önlemek için kornealara oftalmik merhem sürün).
   1. Torakolomber omurga üzerinde elektrikli bir tıraş makinesi ile kaudaldan rostral'a kadar saçları tıraş edin. Cildi 30 saniye boyunca iyodofor ile dairesel hareketlerle birkaç kez sterilize edin, ardından %75 alkol ekleyin. Steril bir cerrahi örtü uygulayın ve yaklaşık 6^th torasik omurdan (T6) 13^th torasik omura (T13) kadar cilt üzerinde yaklaşık 1,5 cm'lik uzunlamasına bir kesi yapın neşter ve bıçak ile.
      NOT: 12^th torasik vertebra (T12) - T13 interspinöz boşluğunun bulunduğu orta hatta kadar palpe edin. Rostral için 1,5 cm'lik bir kesi yapın ve kesi yaklaşık olarak T6-T13 omurları ile aynı hizadadır.
3. Ameliyat mikroskobu altında kemikli kısımdan bir taraftaki 13^th kaburgayı keşfedin. T12-T13'ün interspinöz boşluğunu bulmak için kostovertebral açı alanına hafifçe dokunarak ve ardından rostral doğru orta hattaki spinöz süreci keşfedin. T9 - 10^th torasik omurun (T10) T12-T13 boşluğundan rostral tarafa kadar olan interspinöz boşluğunu keşfedin. (Şekil 1A, 2A)
4. T9'un spinöz süreci boyunca paraspinal kası mikro makasla her iki tarafın ön ve arka faset eklemlerine diseke edin (Şekil 2B). Paraspinal kasları mikro ekartörlerle geri çekin ve lamina üzerindeki ve 8^th torasik vertebra (T8) - T9 ve T9-T10'un interspinöz boşluğundaki yumuşak dokuyu mikro makasla temizleyin.
5. T9 laminektomi yapın, T9'un spinöz işlemini mikrocerrahi forseps ile kelepçeleyin, hafifçe yukarı kaldırın, mikro makası laminanın sağ dorsolateral tarafı boyunca paralel olarak yerleştirin, omuriliğe zarar vermeyin ve laminayı mikro makasla kesin. Sol tarafta tekrarlayın ve omurilik açığa çıkabilir (Şekil 1B, 2C).
6. Omuğu sabitlemeden önce, üniversal kolu gevşetin ve omurun her iki tarafındaki 9^th ila 10^th faset eklemlerini vertebral stabilizatörün mikro sivrisinek forsepsi ile yavaşça sıkıştırın. Mikro sivrisinek forsepsindeki vidaları sıkın ve omur böylece stabilize edilir. Omuriliği yatay düzleme ayarlayın, evrensel kolu sıkın ve omuru sabitleyin (Şekil 2D).

2. T9 kontüzyon yaralanması

1. T9 seviyesindeki omurilik açığa çıktığında ve omur sabitlendiğinde, ameliyat mikroskobik altındaki manşonun içindeki uçtan omuriliğe nişan alın (Şekil 2E).
2. Mikroskop altında omurilik ile uç arasındaki ilişkiyi gözlemlemek kolay olduğundan ve ameliyat masasının kolayca döndürülebildiğinden, omuriliğin arka ve yan yönlerinden uç yüzeyinin omuriliğe paralel olup olmadığını kontrol edin.
3. Omuriliğe paralel doğal bir referans düzlemi olduğundan, laminektomi sonrası uç omurilik ile temas etmeden önce ucun yüzeyinin, korunmuş laminanın iki taraflı sınırlarına paralel olup olmadığını kontrol edin.
4. T12-T13'ün interspinöz boşluğunu bulduktan sonra, çarpma tertibatının ucu gözlem penceresindeki işaretle tutarlı olana ve belirtilen 22 mm yüksekliğe ulaşılana kadar manşonu indirin. Ağırlığı serbest bırakmak için çekme pimini dışarı çekin (gruba göre 1,3 g, 2,0 g veya 2,7 g, her grupta 3 fare bulunur ve her grupta her zaman noktası için bir fare bulunur).
   NOT: Omurilik yere paralel ve uca dik olmalıdır; Masa çok kompakt olduğu için mikroskobik görme alanını sağlamak için ameliyat masasını hareket ettirin.
5. Kontüzyon bittiğinde çarpma tertibatını çıkarın ve ameliyat mikroskobu altında omurilik yaralanmasının (SCI) derecesini gözlemleyin. Hafif grupta açık kırmızı renkte bir renk değişikliği görülebilirken, orta grupta 3-4 saniye içinde yaralanma bölgesinde koyu kırmızı renk görülür ve muhtemelen üstünlük gözlenebilir. Şiddetli grupta, koyu kırmızı belirtiler hemen ortaya çıkabilir ve dura'da belirgin üstünlük ortaya çıkar, ancak dura hala tutarlı bir şekildedir (Şekil 2F).

Sonuçlar

Şekil 1. T13 kostovertebral vertebra lokalize yönteminin bir görüntüleme grafiği. (A) 13^th kaburga ve T13 nispeten sabit anatomik yapılardır. T13 kostovertebral açısı, operatörün dikenli prosese doğru araştırma yapabileceği ve T12-T13 interspinöz boşluğunu bulabileceği mikroskop altında kolayca tespit edilebilir. Ard...

Malzemeler

Bu makalede kullanılan malzemelerin listesi

Ad	Şirket	Katalog numarası	Yorumlar
Etanol	Fuyu Reaktifi	64-17-5
Floresan mikroskobu	KEYENCE	BZ-X800
Fareler	Jinan Pengyue Deneysel Hayvan Şirketi	C57BL/6J
Mikrocerrahi cihazları	Shandong ULT Biotechnology Co., Ltd	Tüm cerrahi aletler ısmarlamadır	Oftalmik makas, mikro sivrisinek forsepsleri, mikrocerrahi forsepsleri, mikro makaslar
RWD Laboratuvar inhalasyon anestezik istasyonu	RWD Yaşam Bilimleri A.Ş., Ltd	R550
{{}}Küçük hayvan in vivo mikroBT görüntüleme sistemi	PerkinElmer	Quantum GX2
Omurilik yaralanması koaksiyel platform	Shandong ULT Biyoteknoloji A.Ş., Ltd	Ismarlama (Feng'in standardı)	(https://shop43957633.m.youzan.com/wscgoods/detail/367x5ovgn69q18g?banner_id=f.81386274~goods.7~1~ b0yRFKOq&alg_id=0&slg=tagGood List-default%2COpBottom%2Cuuid %2CabTraceId&components_style_ layout=1&reft=1659409105184&sp m=g.930111970_f.81386274&alias =367x5ovgn69q18g&from_uuid=136 2cc46-ffe0-6886-2c65-01903dbacbb a&sf=qq_sm&is_share=1&shopAuto Enter=1&share_cmpt=native_ wechat&is_silence_auth=1)

{{TAG_ 39}}