Floresan In Situ Hibridizasyonun Ardından Fare Beyin Dilimlerinde Nöronların İmmün Boyanması

Özet

Kaynak: Baleriola, J., et. al., Yüksek Çözünürlüklü In Situ Hibridizasyon Kullanılarak Beyin Bölümlerinde Aksonal Lokalize mRNA'ların Tespiti. J. Vis. Uzm. (2015)

Bu video, floresan in situ hibridizasyon ve antikor boyama kullanılarak sabit fare hipokampal dilimlerinde kolinerjik aksonlar içinde mRNA'nın tespitini göstermektedir. Floresan mikroskobu, kolinerjik nöronlarda prob etiketli mRNA'ların ve kolin asetiltransferazın mekansal lokalizasyonunu ortaya çıkarır.

Protokol

Hayvan örneklerini içeren tüm prosedürler, uygun hayvan etik inceleme komitesi tarafından gözden geçirilmiş ve onaylanmıştır.

1. FISH testi ve ardından ısıya bağlı antijen/RNA maskelemesi kullanılarak immünohistokimya
   1. Başlamadan önce gerekli tüm malzemeleri hazırlayın:
      1. {{}} Hibridizasyon fırınını 40 °C'ye ısıtın ve nemlendirilmiş bir or....

Malzemeler

Bu makalede kullanılan malzemelerin listesi

Ad	Şirket	Katalog numarası	Yorumlar
Farenin 20-1381 kalıntısı Atf4 mRNA (NM_009716)	Advanced Cell Diagnostics	-	Probe
Human ATF4 mRNA'nın (NM_001675.2<) 15-1256 kalıntılarını hedefleyen özel prob	-	Probe
Negative control probe-DapB	Advanced Cell Diagnostics	310043	Prob
Positive control probe-mouse Polr2A (isteğe bağlı)	Advanced Cell Diagnostics	312471	Probe
Keçi poliklonal anti-ChAT antikoru	Millipore	AB144P
DAPI	Life Technologies	P36935
RNAscope Floresan Multipleks Reaktif Kiti (floresan tespiti için)	Advanced Cell Diagnostics	320850	In situ hibridizasyon kiti

=td style='width:139pt;'>Advanced Cell Diagnostics