Omurilik Yaralanması Olan Bir Fare Modeli Oluşturma

Hayvan modellerini içeren tüm prosedürler, yerel kurumsal hayvan bakım komitesi ve JoVE veteriner inceleme kurulu tarafından gözden geçirilmiştir.

1. Cerrahi ve Cerrahi Olmayan Aletlerin Hazırlanması

1. Cerrahi ve cerrahi olmayan aletleri otoklavda sterilize edin.
2. Cerrahi ameliyat masasını %70 etanol ile temizleyin ve bir ısıtma pedini 37 °C'ye ısıtın.
3. Isıtma pedini ameliyat masasına yerleştirin ve steril cerrahi örtülerle örtün.
   NOT: Tüm hayatta kalma prosedürlerinde, steriliteyi korumak için burada "Dokunma" tekniği kullanılır.

2. Hayvanların Hazırlanması ve T9-T10 Spinal Laminektominin Gerçekleştirilmesi

1. Yetişkin (Balb/c) 10 haftalık erkek fareler tedarik edin. Prosedürlerin geri kalanında sedasyonu sürdürmek için% 5 izofluran ile başlayan ve daha sonra% 2-3'e düşen bir inhaler kullanarak her hayvanda anesteziyi indükleyin.
2. Kuyruk/pençe çimdiklemesinin neden olduğu nosisepsiyon stimülasyonuna yanıt vermeyerek tam anesteziyi onaylayın.
3. Elektrikli saç kesme makinesiyle tüyleri sırtın üzerinden (baştan kuyruğa) tıraş edin ve ardından kalan tüyleri almak için tüy dökücü kremi (3 dakika) uygulayın. Son olarak, sırtı akan su / ıslak ovma ile yıkayın ve hayvanları kafeslerine geri koyun.
   NOT: Bu, cilt yaralanması sırasında ciltte ek tahriş oluşmasını ve kimyasal kirlenmeyi önlemek için gereklidir
4. Ertesi gün, cerrahi işlem sırasında gözlerin kurumasını önlemek için kornealara oftalmik merhem sürün. Ardından, cildi 3 alternatif betadin ovma ve% 70 etanol preparatı ile ovalayın.
5. Bir neşter ile sırttaki orta hat boyunca T8-T12 omurları seviyesinde bir cilt kesisi (~1.0-1.5 cm) yapın.
   NOT: Omurların seviyesi, T13 omuruna karşılık gelen yüzen kaburgaların konumu kullanılarak omurun T13'ten geriye doğru sayılmasıyla tanımlanır.
6. Paraspinal kaslara erişmek için deri altı yağ dokusunu temizleyin ve ardından her iki taraftaki dikenli süreçleri ve laminaları ortaya çıkarmak için yavaşça inceleyin.
   NOT: Bu noktada aşırı kanama veya omurilikte herhangi bir yaralanmayı önlemek için bu işlemi çok dikkatli bir şekilde yapın.
7. Mikrodiseksiyon forsepsleri kullanarak spinal laminayı nazikçe soyarak omuriliği (T9-T10 omurları) ortaya çıkarmak için bir laminektomi gerçekleştirin.
   NOT: Laminektomiyi, yaralanmanın oluşturulmasını kolaylaştırmak için omuriliğin fazlalığı açığa çıkacak şekilde gerçekleştirin. Kontrol grubunda ise sadece laminektomi yapılır.

3. T9-T10 Tam Omurilik Yaralanması (SCI)

1. gerçekleştirmeForseps kullanarak, omurgayı T8'de sabitleyin ve omurga eğriliğini abartmak için kaldırın.
2. İnce makas kullanarak, tam transeksiyonu sağlamak için omuriliği T9 ve T10 omurları arasından vertebral kanalın tabanına kadar ayırın.
3. Cerrahi mikroskop altında tam transeksiyonu gözlemledikten sonra, cerrahi alan kapanmadan önce omuriliğe ek koruma sağlamak için laminektomi bölgesine bir parça deri altı yağ uygulayın.
4. Son olarak, yarayı kapatın ve sürekli dikişler kullanarak paravertebral kasları ve yüzeysel fasyayı dikin ve ardından dikiş klipsleri kullanarak cildi kapatın.
5. SCI sonrası, ertesi gün bağırsak hareketini gözlemleyin; ancak, manuel mesane tahliyesi ile idrar kesesini yönetin.
   NOT: Basso Mouse Scale (BMS), SCI sonrası arka bacak fonksiyonel iyileşmesinin ilerlemesini 2. günde ve ardından haftalık olarak izlemek için kullanılabilir.