$$\rightleftharpoonup{xx}$$
$$\longleftharp{xx}$$,
$$\longrightharp{xx}$$,
Hayvan modellerini içeren tüm prosedürler, yerel kurumsal hayvan bakım komitesi ve JoVE veteriner inceleme kurulu tarafından gözden geçirilmiştir.
1. Cerrahi ve Cerrahi Olmayan Aletlerin Hazırlanması
- Cerrahi ve cerrahi olmayan aletleri otoklavda sterilize edin.
- Cerrahi ameliyat masasını %70 etanol ile temizleyin ve bir ısıtma pedini 37 °C'ye ısıtın.
- Isıtma pedini ameliyat masasına yerleştirin ve steril cerrahi örtülerle örtün.
NOT: Tüm hayatta kalma prosedürlerinde, steriliteyi korumak için burada "Dokunma" tekniği kullanılır.
2. Hayvanların Hazırlanması ve T9-T10 Spinal Laminektominin Gerçekleştirilmesi
- Yetişkin (Balb/c) 10 haftalık erkek fareler tedarik edin. Prosedürlerin geri kalanında sedasyonu sürdürmek için% 5 izofluran ile başlayan ve daha sonra% 2-3'e düşen bir inhaler kullanarak her hayvanda anesteziyi indükleyin.
- Kuyruk/pençe çimdiklemesinin neden olduğu nosisepsiyon stimülasyonuna yanıt vermeyerek tam anesteziyi onaylayın.
- Elektrikli saç kesme makinesiyle tüyleri sırtın üzerinden (baştan kuyruğa) tıraş edin ve ardından kalan tüyleri almak için tüy dökücü kremi (3 dakika) uygulayın. Son olarak, sırtı akan su / ıslak ovma ile yıkayın ve hayvanları kafeslerine geri koyun.
NOT: Bu, cilt yaralanması sırasında ciltte ek tahriş oluşmasını ve kimyasal kirlenmeyi önlemek için gereklidir - Ertesi gün, cerrahi işlem sırasında gözlerin kurumasını önlemek için kornealara oftalmik merhem sürün. Ardından, cildi 3 alternatif betadin ovma ve% 70 etanol preparatı ile ovalayın.
- Bir neşter ile sırttaki orta hat boyunca T8-T12 omurları seviyesinde bir cilt kesisi (~1.0-1.5 cm) yapın.
NOT: Omurların seviyesi, T13 omuruna karşılık gelen yüzen kaburgaların konumu kullanılarak omurun T13'ten geriye doğru sayılmasıyla tanımlanır. - Paraspinal kaslara erişmek için deri altı yağ dokusunu temizleyin ve ardından her iki taraftaki dikenli süreçleri ve laminaları ortaya çıkarmak için yavaşça inceleyin.
NOT: Bu noktada aşırı kanama veya omurilikte herhangi bir yaralanmayı önlemek için bu işlemi çok dikkatli bir şekilde yapın. - Mikrodiseksiyon forsepsleri kullanarak spinal laminayı nazikçe soyarak omuriliği (T9-T10 omurları) ortaya çıkarmak için bir laminektomi gerçekleştirin.
NOT: Laminektomiyi, yaralanmanın oluşturulmasını kolaylaştırmak için omuriliğin fazlalığı açığa çıkacak şekilde gerçekleştirin. Kontrol grubunda ise sadece laminektomi yapılır.
3. T9-T10 Tam Omurilik Yaralanması (SCI)
- gerçekleştirmeForseps kullanarak, omurgayı T8'de sabitleyin ve omurga eğriliğini abartmak için kaldırın.
- İnce makas kullanarak, tam transeksiyonu sağlamak için omuriliği T9 ve T10 omurları arasından vertebral kanalın tabanına kadar ayırın.
- Cerrahi mikroskop altında tam transeksiyonu gözlemledikten sonra, cerrahi alan kapanmadan önce omuriliğe ek koruma sağlamak için laminektomi bölgesine bir parça deri altı yağ uygulayın.
- Son olarak, yarayı kapatın ve sürekli dikişler kullanarak paravertebral kasları ve yüzeysel fasyayı dikin ve ardından dikiş klipsleri kullanarak cildi kapatın.
- SCI sonrası, ertesi gün bağırsak hareketini gözlemleyin; ancak, manuel mesane tahliyesi ile idrar kesesini yönetin.
NOT: Basso Mouse Scale (BMS), SCI sonrası arka bacak fonksiyonel iyileşmesinin ilerlemesini 2. günde ve ardından haftalık olarak izlemek için kullanılabilir.