Hayvan örneklerini içeren tüm prosedürler, uygun hayvan etik inceleme komitesi tarafından gözden geçirilmiş ve onaylanmıştır. 1. Doku temizleme<ol><li>Numuneyi oda sıcaklığında (RT) 1 saat boyunca %20 metanol/%80 deiyonize su çözeltisinde inkübe edin. </li><li>Numuneyi RT'de 1 saat boyunca %40 metanol / %60 deiyonize su çözeltisinde inkübe edin.</li><li>Numuneyi RT'de 1 saat boyunca %60 metanol/ %40 deiyonize su çözeltisinde inkübe edin.</li><li>Numuneyi RT'de 1 saat boyunca %80 metanol/ %20 deiyonize su çözeltisinde inkübe edin.</li><li>Numuneyi RT'de 1 saat boyunca %100 metanol içinde inkübe edin.</li><li>RT'de gece boyunca taze %100 metanol içinde inkübe edin.</li><li>%66 diklorometan (DCM)/%33 metanol içinde 3 saat boyunca çalkalanarak, RT'de çalkalayın.</li><li>Dibenzil eter (DBE) içinde çalkalamadan inkübe edin. Numuneyi berraklaşana kadar DBE'de bırakın ve görüntülemeye kadar DBE'de saklayın. </li></ol>

<figure class='table' style='width:' 601pt;'><table class='ck-table-resized'><colgroup><col style='width:27.79%;'><col style='width:26.12%;'><col style='width:21.46%;'><col style='width:24.63%;'></colgroup><tbody><tr><td style='height:14.5pt;width:167pt;'>DBE</td><td style='width:157pt;'>Sigma-Aldrich</td><td style='width:129pt;'>108014-1KG</td><td style='width:148pt;'> </td></tr><tr><td style='height:14.5pt;width:167pt;'>DCM</td><td style='width:157pt;'>Sigma-Aldrich</td><td style='width:129pt;'>270997-100mL</td><td style='width:148pt;'> </td></tr><tr><td style='height:14.5pt;width:167pt;'>Methanol</td><td style='width:157pt;'>Sigma-Aldrich</td><td style='width:129pt;'>34860-1l-R</td><td style='width:148pt;'> </td></tr></tbody></table></figure>

sıçan beyin dokusu Örneği için hidrofobik bir doku temizleme yöntemi

<a href='https://app.jove.com/v/61821/a-hydrophobic-tissue-clearing-method-for-rat-brain-tissue'>Kaynak: Kirchner, K.N., et al., Sıçan Beyin Dokusu için Hidrofobik Doku Temizleme Yöntemi. J. Vis. Uzm. (2020). </a>Bu video, bir sıçan beyin dokusu örneğinin hidrofobik doku temizleme yöntemini göstermektedir. Numune metanol içinde sırayla dehidre edilir, lipitleri ve pigmentleri çözmek için bir diklorometan ve metanol karışımı ile muamele edilir ve tam doku temizliği için dibenzil etere aktarılır, bu da ince kesit almadan ayrıntılı görüntüleme sağlar.

Sıçan Beyin Dokusu Örneği için Hidrofobik Bir Doku Temizleme Yöntemi

Source: Kirchner, K.N., et al.,&#160;A Hydrophobic Tissue Clearing Method for Rat Brain Tissue. J. Vis. Exp.&#160;(2020).This video demonstrates the ...

Pigmentlerin ve lipitlerin varlığı nedeniyle saydam olmayan bir beyin dokusu örneğiyle başlayın. Bu bileşenler, floresan etiketli nöronlarda ışık saçılmasına neden olur.Dokuyu artan metanol konsantrasyonlarına sahip solüsyonlarda sırayla inkübe ederek ondan suyu çıkarın ve dokuyu kademeli olarak kurutun.Ardından, kalan suyu ortadan kaldırmak için bu dokuyu konsantre metanol ile tedavi edin ve tam dehidrasyonu sağlayın. Ardından, dokuyu diklorometan ve metanol içeren bir ilk temizleme çözücüsüne aktarın. Çözücünün dokuya derinlemesine nüfuz etmesini sağlamak için hafifçe çalkalayarak inkübe edin.Diklorometan, dokudaki pigmentleri ve lipitleri uzaklaştırarak ışık saçılımını azaltır ve saydamlığı artırır.Son olarak, dokuyu hidrofobik bir çözücü olan dibenzil etere aktarın ve çalkalamadan inkübe edin. Çözücü, doku şeffaflığını daha da artıran son temizleme maddesi olarak işlev görür. Bu işlem, etiketli nöronların ve beyin dokusundaki bağlantılarının daha net görselleştirilmesini sağlayarak ışık penetrasyonunu iyileştirir örnek.

 Numuneyi oda sıcaklığında her biri bir saat boyunca %20, %40, %60, %80 ve %100 metanol içinde seri olarak inkübe edin. Ardından, gece boyunca taze %100 metanol içinde inkübe edin. Ertesi gün, numuneyi taze hazırlanmış% 66 DCM'de% 33 metanol içinde% 3 boyunca oda sıcaklığında çalkalayarak üç saat inkübe edin. Üç saat sonra, numuneyi berrak olana kadar çalkalamadan dibenzil eter içinde inkübe edin. Ardından, görüntülemeye kadar dibenzil eter içinde saklayın.

a-hydrophobic-tissue-clearing-method-for-a-rat-brain-tissue-sample

Research

JoVE Encyclopedia of Experiments

Neuroscience

Sinirbilim

Neuropathology

Nöropatoloji

Neurodegenerative Diseases

Nörodejeneratif Hastalıklar

A Hydrophobic Tissue Clearing Method for a Rat Brain Tissue Sample

692 Görüntüleme. Pigmentlerin ve lipitlerin varlığı nedeniyle saydam olmayan bir beyin dokusu örneğiyle başlayın. Bu bileşenler, floresan etiketli nöronlarda ışık saçılmasına neden olur.Dokuyu artan metanol konsantrasyonlarına sahip solüsyonlarda sırayla inkübe ederek ondan suyu çıkarın ve dokuyu kademeli olarak kurutun.Ardından, kalan suyu...

Sıçan Beyin Dokusu Örneği için Hidrofobik Bir Doku Temizleme Yöntemi

Bu makalede

Özet

Protokol

Malzemeler

Yeniden basım ve izinler

Etiketler

İlgili makaleler

Ad	Şirket	Katalog numarası
DBE	Sigma-Aldrich	108014-1KG
DCM	Sigma-Aldrich	270997-100mL
Methanol	Sigma-Aldrich	34860-1l-R