Sıçan Beyin Dokusu Örneği için Hidrofobik Bir Doku Temizleme Yöntemi

Özet

Kaynak: Kirchner, K.N., et al., Sıçan Beyin Dokusu için Hidrofobik Doku Temizleme Yöntemi. J. Vis. Uzm. (2020).

Bu video, bir sıçan beyin dokusu örneğinin hidrofobik doku temizleme yöntemini göstermektedir. Numune metanol içinde sırayla dehidre edilir, lipitleri ve pigmentleri çözmek için bir diklorometan ve metanol karışımı ile muamele edilir ve tam doku temizliği için dibenzil etere aktarılır, bu da ince kesit almadan ayrıntılı görüntüleme sağlar.

Protokol

Hayvan örneklerini içeren tüm prosedürler, uygun hayvan etik inceleme komitesi tarafından gözden geçirilmiş ve onaylanmıştır.

1. Doku temizleme

1. Numuneyi oda sıcaklığında (RT) 1 saat boyunca %20 metanol/%80 deiyonize su çözeltisinde inkübe edin.
2. Numuneyi RT'de 1 saat boyunca %40 metanol / %60 deiyonize su çözeltisinde inkübe edin.
3. Numuneyi RT'de 1 saat boyunca %60 metanol/ %40 deiyonize su çözeltisinde inkübe edin.
4. Numuneyi RT'de 1 saat boyunca %80 metanol/ %20 deiyonize su çözeltisinde inkübe edin.
5. Numuneyi RT'de 1 saat boyunca %100 metanol içinde inkübe edin.
6. RT'de gece boyunca taze %100 metanol içinde inkübe edin.
7. %66 diklorometan (DCM)/%33 metanol içinde 3 saat boyunca çalkalanarak, RT'de çalkalayın.
8. Dibenzil eter (DBE) içinde çalkalamadan inkübe edin. Numuneyi berraklaşana kadar DBE'de bırakın ve görüntülemeye kadar DBE'de saklayın.

Malzemeler

Bu makalede kullanılan malzemelerin listesi

Ad	Şirket	Katalog numarası	Yorumlar
DBE	Sigma-Aldrich	108014-1KG
DCM	Sigma-Aldrich	270997-100mL
Methanol	Sigma-Aldrich	34860-1l-R