$$\rightleftharpoonup{xx}$$
$$\longleftharp{xx}$$,
$$\longrightharp{xx}$$,
Hayvan örneklerini içeren tüm prosedürler, uygun hayvan etik inceleme komitesi tarafından gözden geçirilmiş ve onaylanmıştır.
1. Metoksi-X04 Lekeli Plakların Varlığı için Bölüm Taraması
- {{}} Stereotaksik bir fare beyin atlasının yardımıyla, ilgilenilen bölgeyi içeren beyin bölümlerini seçin, örneğin, mevcut örnekte kullanıldığı gibi hipokampus CA1. Her bölümü, bölümlerin kurumasını önlemek için yeterli kriyoprotektan çözeltisi içeren 24 oyuklu bir kültür plakası içindeki bir kuyuya yerleştirin.
- Aşağıdaki prosedürü kullanarak bölümlerin kurumasını önlemek için her bölümü art arda inceleyin:
- Tek kullanımlık bir pipetle mikroskop lamına bir damla fosfat tamponlu salin (PBS) ekleyin ve bölümü damlacık üzerine yerleştirin.
- Metoksi-X04 etiketli Aβ plakları içeren bölgeleri belirlemek için bölümü floresan mikroskobu altında inceleyin.
Not: metoksi-X04, bir floresan ultraviyole (UV) filtresi (uyarma 340 - 380 nm) kullanılarak kolayca görselleştirilebilir.
- Mikroskop aşamasını hareket ettirmeden parlak alanda ve floresan modunda ilgilenilen bölgelerin (ROI) görüntülerini yakalayın, çünkü plakların varlığını doğrudan doku bölümünün yapısal bölgesiyle ilişkilendirmek için her görüntünün her iki alanda da aynı bölgeyi göstermesi gerekir.
- Çekilen görüntüleri hayvan numarasına göre kaydedin ve adlandırın. Ayrıca plakadaki kuyu numarasını ve çekilen resimlerin alanını kaydedin. Örneğin, Ör: 9978A1B; Hayvan sayısı: 9978; Kuyu numarası: A1; Alan: Parlak. Görüntüleme tamamlandıktan sonra bölümü belirlenen kuyuya geri yerleştirin.
Not: Sonunda incelenen her bölüm için biri parlak alanda diğeri UV alanında olmak üzere iki resim elde edilir. - Aynı ROI'ye sahip iki görüntüyü (biri parlak alanda ve diğeri UV alanında) Görüntü J'de açın ve MosaicJ eklentisini kullanarak iki görüntünün kenarlarını hizalayın ve hizalanmış ve birleştirilmiş görüntüyü geldiği kuyu numarasına göre kaydedin.
- Resmi, belirli bir hayvanın numarasıyla ayrı bir klasöre kaydedin. Doku bölümündeki plakları tanımlamak ve lokalize etmek için görüntüleri birleştirin ve iki farklı alanda (parlak ve UV) tüm bölümün tam bir görünümüne sahip olun.
- Tarama işlemi tamamlandıktan sonra, incelenen bölümleri -20 °C'de, immün boyama veya daha ileri işlemler gerçekleştirilene kadar kriyoprotektan içeren 24 oyuklu bir kültür plakasında saklayın.