Perkütan Epididimal Spermatozoa Aspirasyonu ve İşlenmesi için Bir Teknik

Özet

Bu video, menide spermatozoa yokluğu ile karakterize bir durum olan azospermili bir hastadan epididimal spermatozoanın perkütan aspirasyonunu göstermektedir. Prosedür, skrotal alanın dezenfekte edilmesini, epididimal sıvının özel bir kültür solüsyonu ile bir şırınga kullanılarak aspire edilmesini ve canlı spermatozoayı izole etmek için toplanan numunenin işlenmesini içerir. Hazırlanan spermler daha sonra ileri kısırlık tedavi prosedürlerinde kullanıma hazır hale gelir.

Protokol

İnsan katılımcıları içeren tüm prosedürler, insan refahı için kurumsal, ulusal ve uluslararası yönergelere uygun olarak gerçekleştirilmiş ve yerel kurumsal inceleme kurulu tarafından gözden geçirilmiştir.

1. Ameliyat öncesi hazırlık

1. 1. Bir cerrahi alet paketi, 0,7 mm iğne (0,7 x 32 İnce Duvar Uzun Eğim (TWLB)) ile donatılmış iki adet 5 mL şırınga dahil olmak üzere cerrahi prosedür için gerekli malzemeleri hazırlayın, 60 mL dezenfektan solüsyonu, iki çift steril lastik eldiven ve bir parça steril yapışkan pansuman.
   2. Hemşirelerden, yüksek basınçlı buharlı sterilizasyona tabi tutulan cerrahi alet paketini herhangi bir hasar veya son kullanma tarihi açısından incelemelerini isteyin. Herhangi bir sorun olmadığı onaylandıktan sonra, alet tablasına yerleştirin ve dış katmanı açın.
   3. Androloglar için: steril lastik eldivenler giyin, ardından sterilizasyon gösterge bandının nitelikli olup olmadığını kontrol etmek ve içindeki tüm aletlerin eksiksiz olduğundan emin olmak için cerrahi alet paketinin iç katmanını açın.
   4. Anestezi ve ameliyat için 0,7 mm iğnelerle (0,7 x 32 TWLB) donatılmış iki adet 5 mL şırınga hazırlayın ve ardından lidokain enjeksiyonu içeren ampulü açın.
   5. Lidokain enjeksiyonunu aspire etmek için 5 mL'lik steril bir şırınga kullanın, ardından şırıngadaki hava kabarcıklarını ortadan kaldırın.
2. Ameliyat olan hastanın hazırlanması
   1. Hasta için cilt hazırlığını düzenleyin. Tek kullanımlık bir tıraş bıçağı kullanarak perine publarını tıraş edin ve fazla pub veya leke olmadığından emin olmak için perine ve çevresindeki cildi sabunlu suyla yıkayın.
   2. Hastayı litotomi pozisyonunda ameliyat masasına yatırın, pantolonu çıkarın ve perine ve göbeğin altındaki alt karın bölgesini tamamen ortaya çıkarmak için üst giysiyi göbeğin üzerine sabitleyin.
   3. Hastanın testis torbasını aydınlatmak için gölgesiz lambanın açısını ayarlayın.
   4. Steril bir gazlı bez topunu kavramak için oval forseps kullanın, bu daha sonra dezenfeksiyon işlemini başlatmak için dezenfektan çözeltisine tamamen daldırılır. Çevreden skrotuma kadar cilt dezenfeksiyonunu şu sırayla gerçekleştirin: alt karın, uylukların önü ve içi, perineal bölge, penis ve skrotum.
   5. İlk dezenfeksiyondan sonra steril gazlı bez topunu değiştirin ve dezenfeksiyon işlemini tekrarlayın. Üç tur dezenfeksiyondan sonra ameliyat öncesi dezenfeksiyon işlemi tamamlanır.
   6. Dezenfeksiyon tamamlandıktan sonra steril havlu serme işlemine başlayın. İlk olarak, hastanın kalçasının altına steril bir kare havlu yerleştirin, daha sonra cerrahi alanın ve çevresinin etrafına steril delikli bir havlu yayın ve delik alanındaki skrotum tamamen açığa çıkarın.
3. G-MOPS-PLUS kültür çözeltisinin hazırlanması
   1. Embriyonik kültür odasının teknisyenlerinden steril bir Pasteur pipeti kullanarak yaklaşık 2 mL G-MOPS-PLUS kültür solüsyonunu kültür kabına aktarmalarını isteyin. Kapağı uygun şekilde kapatın ve ardından transfer penceresinden ameliyathanedeki hemşireye teslim edin.
   2. Kültür kabını alet masasındaki steril havlunun üzerine yerleştirin ve kapağı açın.
   3. Başka bir 5 mL şırınga kullanarak, yaklaşık 0.2 mL G-MOPS-PLUS kültür solüsyonunu aspire edin ve ardından ileride kullanmak üzere hava kabarcıklarını çıkarın.

2. Anestezi ve cerrahi

1. Androloglar için: Lidokain enjeksiyonu ile doldurulmuş şırıngayı sağ elinizle tutun ve sol elinizle hastanın spermatik kordonunu sabitleyin. Deri altından delin ve bir kabarıklık oluşturmak için az miktarda lidokain enjekte edin. Daha sonra, deri altından delin ve spermatik kordun dokusuna derinleşin, kan dönüşü olmadığını doğruladıktan sonra yaklaşık 0.5 mL lidokain enjekte etmeye başlayın. Spermatik kord bloğu anestezisinin daha iyi bir etkisini elde etmek için, enjeksiyon iğnesinin yönünü aynı delinme noktasında 2 ila 3 kez değiştirin ve spermatik kordorduna lidokain enjekte etme işlemini tekrarlayın.
2. Hastanın testis torbasını sol elinizle tutun ve delinme gerektiren epididimi sabitleyin. Palpe ederek, sağ elinizi kullanarak cerrahi ponksiyonun gerekli olduğu epididimin yerini onaylayın. Daha sonra, yukarıda belirtilen lidokain içeren şırıngayı tutun ve lokal infiltrasyon anestezisi elde etmek için delinme bölgesinde cilt altına enjekte edin.
3. Hastanın testis torbasını sol elinizle tutun ve delinme gerektiren epididimi sabitleyin. Ardından, G-MOPS-PLUS kültür solüsyonu (0.2 mL) içeren 5 mL'lik şırıngayı sağ elinizde tutun ve epididimal dokuya nüfuz ederek cilde dik olarak delin. Şırıngadaki negatif basıncı koruyun ve epididimal dokuyu tekrar tekrar delin, böylece epididimal sıvı negatif basıncın etkisi altında iğneden girer.
4. Negatif basıncı korumaya devam edin ve delme iğnesini yavaşça geri çekin. Ekstrakte edilen epididimal sıvıyı kültür kabına enjekte edin. Enjeksiyonu tamamladıktan sonra, kültür kabına enjekte edilen toplanan epididimal sıvı miktarını en üst düzeye çıkarmak için şırıngayı durulamak için yakındaki G-MOPS-PLUS kültür solüsyonunu aspire edin.

3. Cerrahi örneklerin tedavisi

1. 1. G-MOPS-PLUS kültür sıvısı ve epididimal sıvı içeren kültür kabını transfer penceresinden embriyo laboratuvar teknisyenine aktarın.
   2. Embriyonik kültür odasının teknisyenleri, kültür çanağını devralır ve ters çevrilmiş bir optik mikroskop sahnesine yerleştirerek sabitler. Mikroskobun güç anahtarını AÇIN ve ışık ayar düğmesini uygun bir ışık yoğunluğuna çevirin.
   3. Ters çevrilmiş optik mikroskobun dönüştürücüsünü döndürün, 10x objektif lensi seçin, odak uzaklığını ayarlamak için sırayla kaba ve ince odak spirallerini döndürün. Odaklanma durumunu gözlemleyin ve mikroskop altında epididimal spermatozoa arayın.
   4. Ters çevrilmiş mikroskobun dönüştürücüsünü 40x objektif merceğe döndürmeye devam edin, odak uzaklığını ayarlamak için ince odak spiralini döndürün ve epididimal spermatozoayı alan alan gözlemleyin. Epididimal spermatozoanın sayısını ve kalitesini değerlendirin. Normal epididimal spermatozoanın olgunlaştığı ve hareket kabiliyeti kazandığı görülebilir.
2. Epididimal spermatozoanın tedavisi
   1. Yeterince aktif epididimal spermatozoa gözlemledikten sonra, kültür kabındaki sıvıyı steril bir Pasteur pipeti aracılığıyla 15 mL'lik bir santrifüj tüpüne aktarın.
   2. Yukarıdaki santrifüj tüpünü denge tepsisine yerleştirin ve düzleştirmek için steril su içeren aynı özelliklere sahip bir santrifüj tüpü kullanın.
   3. Santrifüj kapağını açın, santrifüj tüplerini kart yuvasına simetrik olarak yerleştirin ve ardından santrifüj kapağını kapatın. Kontrol panelinden merkezkaç kuvvetini 500 x g ve santrifüjleme süresini 5 dakikaya ayarlayın. Santrifüjleme işlemini başlatmak için kontrol panelindeki START düğmesine basın.
   4. Santrifüjleme işlemi tamamlandıktan sonra santrifüj kapağını açın ve epididimal sıvıyı içeren santrifüj tüpünü çıkarın. Kapağı sökün, süpernatanı steril bir Pasteur pipeti ile nazikçe aspire edin ve çizilen süpernatanı atın.
   5. Steril bir Pasteur pipeti kullanarak, yaklaşık 2 mL G-IVF-PLUS kültür solüsyonunu santrifüj tüpüne aktarın. Ardından, iyice yeniden askıya almak için çözeltiyi santrifüj tüpüne nazikçe pipetleyin.
   6. Dengeleme, santrifüjleme ve üst sıvı tabakasının çıkarılması işlemlerini tekrarlayın.
   7. İntra-sitoplazmik spermatozoa enjeksiyonunun (ICSI) ihtiyaçlarına göre, steril bir Pasteur pipeti kullanarak santrifüj tüpüne yaklaşık 0.5 mL G-IVF-PLUS kültür solüsyonu aktarın ve epididimal spermatozoayı santrifüj tüpünün dibine hafifçe üfleyin.
   8. ICSI işlemi için doğrudan tamamen askıya alınmış epididimal spermatozoayı kullanın.

Malzemeler

Bu makalede kullanılan malzemelerin listesi

Ad	Şirket	Katalog numarası	Yorumlar
Centrifuge	Origio MAXI	G123511110440	Max RPM: 4000; Maksimum RCF: 2826 x g
Santrifüj tüpü	Falcon	352095	15 mL
Kombinasyon test tüpü standı	Shenzhen Zhicheng Long Technology Co., LTD	None
Culture dish	Falcon	353001	35 mm x 10 mm
Dezenfektan solüsyonu	Shanghai Likang Disinfection high-tech Co., LTDD	20230801S	60 mL
G-IVF PLUS	Vitrolife İsveç AB	511574	epididimal sıvı tedavisi için kültür solüsyonu
G-MOPS PLUS	Vitrolife İsveç AB	511712	delme işlemi için kültür çözümü
Yüksek Güvenlikli Embriyo Pasteur Pipetleri	Darwin	D2208003	230 mm, Fire Polished
instrument table		DZ202012010
Ters optik mikroskop	OLYMPUS		IX71
Lidokain hidroklorür enjeksiyonu		H31021072	5 mL : 0.1 g
Medical balance	Shanghai Guangzheng Medical Instrument Co., LTD	201609-4854	JYT-2
Tıbbi cerrahi maskeler	Guangzhou Şehri Panyu bölgesi Haozheng sağlık malzemeleri fabrikası	161220328	17.5×9.5 cm(açılma boyutu 17.5×17 cm)
Motor tahrikli çalışma masası	Shandong Mingtai Medical Equipment Co., Ltd.	YZB0089-2011	operation table
kendinden yapışkanlı yara örtüsü	Guangzhou Ya Tian Biological Technology Co., LTD	20142140348	6 cm x 7 cm(3 cm x 4 cm)
Tek Kullanımlık Steril Hipodermik Şırıngalar	Shandong Weigao Group Medical polymer Products Co., LTD	20230921	5 mL, 0,7 mm (0,7 x 32TWLB) ile donatılmış
Steril pudrasız lateks cerrahi eldiven	Beijing Ruijing Lateks Ürünleri Co., Ltd	2023030322	71/2, 61/2
Cerrahi aletler paketi	Sun Yat-sen Üniversitesi Üçüncü Bağlı Hastanesi Tedarik Bölümü	10228376	otoklav sterilizasyonu
Surgical light	Shanghai Jishun Medical Device Manufacturing Co., LTD	JSL2009-160D
Vertical flow clean table	Suzhou Wanda Arıtma Technology Co., Ltd	DS-CZ-1311006	SH-CJ-2FD-1500