İç Karotis Arterine İnfüzyon Yoluyla Fare Beynine Hedeflenen Madde Verilmesi

Özet

Kaynak: Leda, AR ve ark. İç Karotis Arter Yoluyla CNS'ye Hedefe Yönelik Madde İletimi için Fare Mikrocerrahi İnfüzyon Tekniği. J. Vis. Uzm. (2017)

Bu video, bir test maddesinin iç karotis arter (ICA) yoluyla beyne hedeflenen infüzyonunu kolaylaştırmak için tasarlanmış bir mikrocerrahi prosedürü göstermektedir. Prosedür, kan akışını geçici olarak kısıtlamak ve kontrollü teslimatı sağlamak için hassas dikiş ve vasküler manipülasyonu içerir. Dış karotis artere (ECA) bir kılcal tüp yerleştirilir ve bifurkasyona doğru ilerletilir. İnfüzyon üzerine, madde sistemik dolaşımı atlar, kan-beyin bariyerini geçer ve beyin parankimine hedeflenen iletimi sağlar.

Protokol

Hayvan modellerini içeren tüm prosedürler, yerel kurumsal hayvan bakım komitesi ve JoVE veteriner inceleme kurulu tarafından gözden geçirilmiştir.

Farelerin Ameliyat İçin Hazırlanması

1. Bir laboratuvar anestezi sistemi kullanarak fareyi oksijenle karıştırılmış izofluran ile uyuşturun. Ticari makinede %4-5 arasında ayarda izofluran ve 2 L/dk'da oksijen akışı kullanın (Malzeme Tablosuna Bakın). Hayvanı stereomikroskop altında ameliyat yüzeyine aktarın ve bir burun konisi kullanarak anesteziyi sürdürün (izofluran ayarı 1.5 - 2.5 ve 2 L / dk'da oksijen akışı kullanın).
   1. Fare solunum hızının nefes nefese kalmadan 1 - 2 solunum/sn civarında olduğundan emin olun. Ek olarak, hayvanın bıyık stimülasyon reaksiyonu ve pedal refleksi (ayak parmağı sıkışması) göstermediğinden emin olun. Ameliyat sırasında solunum hızını ve eforunu en az 5 dakikada bir izleyin. Kemirgen anestezisinin izlenmesi için özel Kurumsal Hayvan Bakımı ve Kullanımı Komitesi ve veterinerlik yönergelerini izleyin.
2. Kuruluğu önlemek için steril bir bez kullanarak her göze bir damla oftalmik kayganlaştırıcı uygulayın. Rahatsızlığı hafifletmek için antienflamatuar ve analjezik uygulanması önerilir.
3. Hayvan sırt üstü yatarken, bir burun konisi kullanarak anesteziyi sürdürün.
4. Hayvanın boyun bölgesini, bölgeyi etanol% 70 ve klorheksidin ile üç kez silerek temizleyin. Hayvanın ameliyat bölgesini bir tıraş bıçağı kullanarak tıraş edin (aşağıda ayrıntılı olarak açıklanmıştır).

2. Ortak Karotis Arterin Diseksiyonu (CCA)

1. Tüm mikrocerrahi prosedürünü stereomikroskop altında gerçekleştirin. Cerrahi makas ve forseps kullanarak, boyunda, göğüs kemiğinin üstünden çenenin altına (yaklaşık 3 ila 4 cm) kadar sığ bir orta hat kesisi yapın.
2. Forseps kullanarak, trakeayı ortaya çıkarmak için yağ ve bağ dokusunu dikkatlice ayırın.
3. Boynu uzatmak ve alanı daha da açığa çıkarmak için farenin boynunun arkasına bir yastık (yaklaşık 0,5 cm çapında yuvarlak nesne) yerleştirin.
4. Bir doku ekartörü veya kanca kullanarak dokuyu ayırın.
5. Hayvanın trakeanın sol tarafında, sol CCA'yı ortaya çıkarmak için bağ dokusunu dikkatlice cımbızlayın.
6. Forseps kullanarak, CCA bifurkasyonunu ve hem dış hem de iç karotis arterlerin başlangıcını ortaya çıkarmak için tüm bağ dokusunu dikkatlice çıkarın.

3. Madde İnfüzyonu için CCA'nın Hazırlanması

1. Forseps kullanarak dış karotis arterin (ECA) altına iki segment naylon sütür (her biri yaklaşık 1 cm) yerleştirin.
2. ECA'nın mümkün olan en yüksek noktasına kalıcı bir düğüm yerleştirin.
3. ECA'nın mümkün olan en düşük noktasına, CCA çatallanmasının hemen üzerine çıkarılabilir bir düğüm yerleştirin. Bu düğüm üst düğüme göre gevşek olmalıdır.
4. CCA'yı mümkün olan en düşük noktada bir damar klipsi kullanarak kapatın.
5. Bir damar klipsi kullanarak iç karotis arteri (ICA) kapatın.
6. Mikrodiseksiyon yaylı makas kullanarak ECA'da iki düğüm arasında (yaklaşık 2 mm) küçük bir kesim yapın.

4. ICA ile Madde İnfüzyonu

:

1. Bir infüzyon sistemi oluşturun. 6 inç kılcal boruyu (ideal boyutlar: 2,5 mm x 1,2 mm) infüze edilecek maddenin 250 μl'sini (diğerlerinin yanı sıra ilaçlar, patojenler, hücre dışı veziküller) içeren bir tüberkülin şırıngasına takın ve kılcal ucu adım 3.6'da gerçekleştirilen kesiye nazikçe yerleştirin.
2. Çatallanma ile CCA'yı kapatan klips arasında bir orta noktaya ulaşana kadar kılcal damarı aşağı kaydırmaya devam edin.
3. Alt ECA düğümünü bağlayın. Düğümün kılcal akışkanlığa izin verecek kadar gevşek ve sızıntıyı önleyecek kadar sıkı olduğunu doğrulayın.
4. Klibi ICA'dan çıkarın.
5. Şırınga pistonuna hafifçe basınç uygulayın ve saniyede yaklaşık 10 μl madde infüzyonuna izin verin.

5. İnfüzyon Sonrası Prosedürler Klipsi

1. tekrar ICA'ya yerleştirin.
2. Kılcal boruyu yavaşça çıkarın.
3. Alt ECA düğümünü tamamen bağlayın.
4. ICA ve CCA'dan klipleri çıkarın.

6. Kesi Kapatma ve Ameliyat Sonrası Bakım

1. Ekartörü veya doku kancalarını ve yastığı çıkarın.
2. Steril tuzlu su kullanarak dikiş alanını temizleyin.
3. Naylon dikiş/iğne ve forseps kullanarak kesiyi kapatın.
4. Ameliyat sonrası rahatsızlığı hafifletmek için antienflamatuar ve analjezik uygulayın.
5. Hayvanı en az 1 saat boyunca ısıtma yastığına yerleştirilmiş kafese koyun ve iyileşmeyi izleyin.

Malzemeler

Bu makalede kullanılan malzemelerin listesi

Ad	Şirket	Katalog numarası	Yorumlar
Anestezi aleti	Vetequip	901806
Cerrahi makas	Güzel Bilim Aracı	14558-09
Cerrahi forseps düz uçlu	Güzel Bilim Aracı	00108-11
Cerrahi forseps, açılı uç	Güzel Bilim Aracı	00109-11
Yaylı makas	Güzel Bilim Aracı	15000-08
Naylon sütür	Braintree Scientific	SUT-S, 104
Kılcal boru (Mikro Renatan, ft başına 0,010 "x 0,005")	Braintree Scientific	MRE01050
Kapanış sütürü	VWR	95057-036
İzofluran	Piramal
2,3,5-Trifeniltetrazolyum klorür	FisherScientific	50-121-8005

, , , , ,