Farelerde burundan beyine ilaç iletimi için pipet ve ters kanülasyon yoluyla intranazal ilaç uygulaması

Özet

Kaynak: Kanazawa, T., et al. Burundan beyine ilaç dağıtımını değerlendirmek için inhalasyon anestezisi altında intranazal uygulama için yeni yöntemler. J. Vis. Uzm. (2018)

Bu video, burundan beyine ilaç dağıtımını sağlamak için anestezi uygulanmış bir farede radyoaktif işaretli ilaçların intranazal uygulamasını göstermektedir. İlaçların nazal epitelden nasıl geçtiğini ve beyne ulaşmak için nöronal yollardan nasıl geçtiğini ve ayrıca siliyer hareketin ilaç tutulmasını ve klerensini nasıl etkilediğini açıklar. Ek olarak, video, siliyer harekete karşı ilaçlar vermek, retansiyonu artırmak ve taşıma verimliliğini artırmak için yemek borusundan bir kanül yerleştirmeyi içeren alternatif bir ters kanülasyon yöntemini açıklamaktadır.

Protokol

Hayvan modellerini içeren tüm prosedürler, yerel kurumsal hayvan bakım komitesi ve JoVE veteriner inceleme kurulu tarafından gözden geçirilmiştir.

1. İnhalasyon Anestezisi Altında İntranazal Uygulama İçin Kullanılan Hayvanlar

1. Deney farelerini 12 saatlik aydınlık / karanlık döngüsü altında (08:00 - 8:00 PM'de ışık), 23 ± 1 ° C'de tutulan kontrollü bir sıcaklık, %50 ± %10 nem ve yiyecek ve suya ad libitum erişimi ile paslanmaz çelik kafeslerde barındırın.
2. Deneyden önce,% 4'lük bir konsantrasyonda başlatmayı takiben,% 2 izofluran soluyarak fareleri uyuşturun. Yüzey düzeltmesinin kaybolup kaybolmadığını kontrol ederek gerekli anestezi seviyesini onaylayın.

2. Uygulama Çözeltisinin Hazırlanması

1. Fosfat tamponlu salin içinde seyrelterek [¹⁴C]-inülin (fare başına 50 μM, 0.5 μCi / mL) uygulama solüsyonu hazırlayın ve kullanıma kadar 4 ° C'de saklayın.

3. Fareler için Intranazal Uygulama

1. Geçici olarak açılabilir bir inhalasyon maskesi kullanarak mikropipet yöntemi (Şekil 1)
   1. Fareleri, inhalasyon anestezisi altında uzuvlarını %2 izofluran ile bantlayarak bir mantar pano üzerine sırtüstü pozisyonda sabitleyin (Şekil 1A).
   2. Fareler inhalasyon anestezisi altında sabitlenirken alternatif olarak sol ve sağ burun deliklerine uygulanan 1 ila 2 μL'lik dozlar aracılığıyla, her fareye 30 saniye aralıklarla toplam 25 μL uygulama solüsyonu uygulayın (Şekil 1B ve C).
   3. Not: Atık anestezik gaz, maske açıldığında aktif yollarla (çeker ocak, sert kanallı biyogüvenlik kabini, vakum vb.), kapatıldığında ise pasif yollarla (atık anestezik gaz kabı) uzaklaştırılır.
2. Hava yolu tarafından yemek borusu boyunca ters kanülasyon yöntemi (Şekil 2)
   1. Fareleri sırtüstü pozisyonda inhalasyon anestezisi altında uzuvlarını %2 izofluran ile bantlayarak bir mantar pano üzerine sabitleyin.
   2. Boyundaki saçlar traş edilir ve betadin veya klorheksidin uygulaması ile hazırlanır, ardından alkolle durulanır.
   3. Makasla küçük bir kesi (1,5 cm) yaptıktan sonra forseps ile boğaz altındaki cildi genişleterek soluk borusu ve yemek borusunu ortaya çıkarın.
   4. Makas kullanarak soluk borusunda bir kesi (1 mm) yapın.
   5. 1,2 cm uzunluğunda bir kanül (iç çap: 0,58 mm, dış çap: 0,965 mm) yerleştirin ve kanülün diğer ucunu inhalasyon maskesinin içine takın.
   6. Makas kullanarak yemek borusunda 1 mm'lik bir kesi (1 mm) yapın, burun boşluğunun arka kısmına doğru 1,4 cm uzunluğunda bir kanül (iç çap: 0.28 mm, dış çap: 0.61 mm) yerleştirin ve bağlayın (Görsel 2A ve B). Not: 3.2.2 ila 3.2.4 arasındaki prosedürler, ×10 büyütmede stereoskopik mikroskop altında gerçekleştirilmiştir.
   7. Bir uygulama solüsyonu ile doldurulmuş 27 mL'lik bir şırıngaya bir iğne (1/2 ×) takın ve programlanabilir bir mikro şırınga pompasına bağlayın.
   8. Yukarıdaki iğneyi 3.2.5'te yemek borusuna yerleştirilmiş olan kanüle bağlayın (Şekil 2C).
   9. Sabit bir oranda (5 μL / dak) toplam 25 μL [¹⁴C] -inülin çözeltisi uygulayın (Şekil 2C ve 2D).

Sonuçlar

Şekil 1: Geçici olarak açılabilir bir inhalasyon maskesi ile birlikte bir mikropipet kullanılarak intranazal uygulama. (A) uygulamadan önce kapalı bir maske ile sabit bir fareyi, (B) yakın çekimi ve (C) bir pipet kullanılarak intranazal uygul...

Malzemeler

Bu makalede kullanılan malzemelerin listesi

Ad	Şirket	Katalog numarası	Yorumlar
ddY mouse	Japan SLC, Inc.		Erkek, 4-6 hafta, 20-30 g
İzofluran	Pfizer	v002139
İzofluran kurulumu	SHINANO imalat LTD. ŞTİ.	SN-487-OTAir, SN-489-4
İzofluran maskesi	SHINANO imalat LTD. ŞTİ.		Küçük kemirgenler için
İzofluran maskesi (Opneable tip)	SHINANO manufacturing CO., LTD.		Özel siparişler
Anestezi Kutusu	SHINANO imalat LTD. ŞTİ.	SN-487-85-02
Hayvan deneyleri makası-1	NATSUME SEISAKUSHO CO., LTD.	B-27H
Hayvan deneyleri makası-2	NATSUME SEISAKUSHO CO., LTD.	B-13H
Cımbız-1	GÜZEL BİLİM ALETLERİ A.Ş.	11272-30	Dumont #7 Dumoxel
Cımbız-2	NATSUME SEISAKUSHO CO., LTD.	A-12-1
Kanül tüpü (PE-50)	Becton, Dickinson ve Şirketi.	5069773	İç Çap: 0.58 mm, Dış Çap: 0.965 mm
Kanül tüpü (SP-10)	NATSUME SEISAKUSHO CO., LTD.	KN-392	İç Çap: 0.28 mm, Dış Çap: 0.61 mm
Tıraş Makinesi	MARUKAN, LTD.	DC-381
Stereoskopik mikroskop	Olympus Corporation	SZ61
İğne 27G 1/2 inç 13 mm	TERUMO CORPORATION	NN-2738R
1 mL şırınga	TERUMO CORPORATION	SS-01T
Şırınga pompası	Nörobilim	NE-1000
Mikro spatula	Shimizu Akira Inc.	91-0088
Mikropipet (0,5-10 uL)	Eppendorf AG	Z368083
Pipet çipi	Eppendorf AG	0030 000.811
Bant	TimeMed Etiketleme Sistemi, Inc.	T-534-R Fare
[¹⁴C]-Inülin	Amerikan Radyoaktif İşaretli Kimyasallar A.Ş.'yi	ARC0124A	0.1 mCi / mL
EtOH	Wako Saf Kimya Endüstrileri, Ltd.	054-00461

sabitlemek için