Bir Sıçan Modelinde Rekombinant Adeno İlişkili Virüs Vektörlerinin İntravenöz Uygulaması

Özet

Kaynak: Grames, M. S., et al. Adeno İlişkili Virüsün Sıçanlara İntravenöz Uygulanması ve Merkezi Sinir Sistemi Transdüksiyonunun Değerlendirilmesi için Yöntemler ve İpuçları. J. Vis. Uzm. (2017)

Bu video, sıçanlarda rekombinant adeno-ilişkili virüsün (AAV) kuyruk veni enjeksiyonunu göstermektedir. Lateral kuyruk venine enjeksiyondan sonra, virüs kan dolaşımına girer, kalpte dolaşır ve beyne ulaşır, burada nöronlara girer ve nöroterapötik uygulamalar için hedef protein üretimini kolaylaştırır.

Protokol

Hayvan modellerini içeren tüm prosedürler, yerel kurumsal hayvan bakım komitesi ve JoVE veteriner inceleme kurulu tarafından gözden geçirilmiştir.

1. Rat

1. Oksijeni 1 L/dk'ya kadar çevirin ve izofluran anestezisini %5'e ayarlayın. Tüm bağlantı hortumlarını ve vana yönlerini kontrol ederek gaz anestezisinin indüksiyon odasına aktığından emin olun.
2. Sıçan yanıt vermeyene kadar yaklaşık 3 dakika boyunca sıçan anestezi indüksiyon odasına yerleştirin.
3. Ayak parmağını sıkıştırarak yeterli anestezi derinliğini sağlayın. Ayak parmağı sıkışmasından sonra ayakta veya bacakta herhangi bir hareket olmamalıdır.
4. Bakım için izofluran anestezisini% 2'ye düşürün ve vanayı, anestezi anestezi maskesine akacak şekilde ayarlayın.
5. Farenin burnunu anestezi maskesine yerleştirin ve fareyi yan yatacak şekilde ayarlayın.
6. Yanal kuyruk damarını tanımlayın.
   NOT: Yan kuyruk damarları yaklaşık olarak saat 10 ve 2 pozisyonlarında, kuyruğun dorsal üst kısmı ise saat 12 pozisyonunda yer alır. Sıçan yan yatarken, yan kuyruk damarı yukarı bakmalıdır.
7. Enjeksiyon bölgesini alkol hazırlama pedi ile silin. Enjeksiyon bölgesi kuyruğun uzunluğunun üçte ikisi kadardır.

2. vector

1. Kuyruğu enjeksiyon alanının biraz üzerinde, bir parmağınızla doğrudan yanal kuyruk damarının üzerine sıkıca tutun; bu damarı genişletecektir.
2. Eğim yukarı bakacak şekilde, iğneyi görünür kuyruk damarı ile aynı yönde hizalayın.
3. Diğer elin kuyruğu tutmasını ve kuyruk damarına bastırmasını önlemek için büyük özen göstererek cildi kuyruk damarının üzerinden delin.
4. Normal kan akışına izin vermek için kuyruk damarındaki basıncı boşaltın.
5. İğneyi damarın içine doğru hareket ettirin. İğnenin kuyruk damarını deldiğinden emin olmak için pistonu hafifçe geri çekin. İğne damar içindeyse, kan iğneye akacaktır.
   1. İğneyi gerektiği gibi yeniden konumlandırın. Ardından, iğneyi stabilize etmek için elinizi enjeksiyon bölgesinin üstünden enjeksiyon bölgesinin altına doğru hareket ettirin ve şırınganın ucunu kuyruğa doğru tutun.
6. Vektörü yavaşça kuyruğa enjekte edin (yaklaşık 20 μL/s).
   NOT: Vektör içinden akarken damar rengini kaybedebilir. Solüsyonun damarın dışına enjekte edildiğine dair işaretler arasında kanama, cildin ağarması veya vektör enjekte edilirken direnç yer alır. Uygulama ile ekstra vasküler maruziyet en aza indirilebilir.
7. Vektör uygulandıktan sonra, iğneyi fareden çıkarın ve kanamayı 30-60 saniye boyunca durdurmaya yardımcı olmak için enjeksiyon bölgesine bir gazlı bez bastırın.

3. Temizleme:

1. İzofluran, anestezi ve oksijeni kapatın. Sıçanı bilincini geri kazanana kadar izleyin, ardından kafesine geri koyun.

Malzemeler

Bu makalede kullanılan malzemelerin listesi

Ad	Şirket	Katalog numarası	Yorumlar
1 mL şırınga	BD	309626	25g iğne takılı olarak gelir. Enjeksiyon için 27-30g iğne ile değiştirin
30g iğne	BD	305106
Isofluran	Piramal Healthcare	66794-013-25	Isofluran USP 250 mL
Anestezi maskesi	Kopf Instruments	906
Gazlı Bez	Henry Schein	100-2524	2" x 2" (5 cm x 5 cm)
Gaz anestezi buharlaştırıcı	SurgiVet	4214322	Klasik T3
Gaz anestezi çöpçü	SurgiVet	32373B10	Enviro-PURE
Isıtma yastığı	Sears	17280
%70 Etanol	Decon Laboratories, Inc.	2401	140 kanıt
%70 İzopropanol	VWR	89108-160