Hızlı tarama Cyclic Voltametri striatal Beyin Slices presinaptik dopamin Dinamiği

Özet

Striatal beyin dilimleri elektriksel olarak uyarılmış presinaptik dopamin dinamiklerini ölçmek için hızlı tarama döngüsel voltametri kullanma.

Özet

Kapsamlı araştırma kötüye ilaçlar (örneğin kokain ve amfetamin), oynadığı rol psikiyatrik hastalıklar (örneğin şizofreni ve Dikkat Eksikliği Hiperaktivite Bozukluğu) ve dejeneratif katılımının eylem mekanizması önemi nedeniyle nörotransmiter dopamin odaklandı Parkinson ve Huntington hastalığı gibi bozukluklar. Normal fizyolojik koşullar altında, dopamin lokomotor aktivite, biliş, öğrenme, duygusal etkiler, ve nöroendokrin hormonu salgılamasını düzenleyen bilinmektedir. Dopamin nöronları en büyük yoğunluklarının biri, striatum, nukleus accumbens ve kaudat-putamen olarak bilinen iki ayrı nöroanatomik bölgelerdeki ayrılabilir içinde. Amaç fare striatum içinde dilim hızlı tarama döngüsel voltametri (FSCV) için genel bir protokol göstermek için. FSCV d gerçek zamanlı olarak, dopamin salınımı ve alımı ölçmek için fırsat sağlayan iyi tanımlanmış bir elektrokimyasal tekniğiiscrete beyin bölgeleri. FSCV Karbon fiber Mikroelektronlar dopamin oksidasyon (~ 7 mm çapında) tespit etmek için kullanılır. Dopamin algılamak için FSCV kullanarak analitik avantajı in vivo mikrodiyaliz tamamlayıcı bilgiler sağlayarak, en az on mikron 100 milisaniye ve uzaysal çözünürlüğü, gelişmiş temporal çözünürlük .

Protokol

1. Deneysel şartları

Elektrot Fabrikasyon

• Çoğu in-house yapılır bu yana çok sayıda karbon fiber Mikroelektronlar imalat yöntemleri vardır. Tipik olarak elektrot imalat detayları dikte elektrot (örneğin amperometri vs FSCV) uygulanır elektrokimyasal bir tekniktir. Mikroelektronlar FSCV için, aşağıdaki üç adım yordamı kullanarak in-house olabilir. Karbon fiber elektrod fabrikasyon daha eksiksiz bir açıklaması için, yeni bir Jüpiter ^{1. maddesinde} bakın. Ancak, aşağıda açıklanan elektrotlar karşı yukarıda belirtilen protokol amperometrik karbon fiber Mikroelektronlar imal etmek için daha az adımları gerektiren silindirik karbon fiber Mikroelektronlar unutmayın. Bu basitleştirilmiş bir protokol, aseton içinde karbon fiber kaynar gerektirmez, cam kapilerleri yangın, parlatma veya cam-fiber kavşak mühür kullanılarak epoksi.
• Vakum emme aspirkapiller microfilament (PM sistemleri, Carlsborg, WA uzunluğu 10 cm, od 1.2 mm id 0,68 mm) ile borosilikat cam, karbon fiber (Goodfellow Oakdale, PA çapı 7 mm) yedik.
• Dişli, kılcal yarım çekti elektrot çektirmesi (Narishige, Tokyo, Japonya) içine kılcal yerleştirin. Elektrot çektirmesi için çıktı ayarları laboratuvardan laboratuvara değişir. Referans için, çektirmesi için çıkış ayarları ana mıknatıs 90.7, 23.2 sub-mıknatıs, ve ısıtıcı için 53.4. Çıkış ayarları ampirik olarak karbon fiber etrafında sıkı bir mühür ile yaklaşık 4.4 mm uzunluğunda bir cam konik oluşturmak için rafine edilmesi gerekir.
• Mikroskop altında (Olympus, Tokyo, Japonya), karbon fiber, karbon fiber yaklaşık 50-200 mikron ağzı sıkıca kapatılmış bir arayüz çıkıntı izin cam ucu uzanan bir neşter bıçak kullanarak kırpın.

Solüsyon hazırlama

Üç tür yapay Cereninbrospinal sıvısı (aCSF) çözümleri tüm ultra saf su (18 M cm), önceden hazırlıklı olmak gerekir.

• Sakkaroz-aCSF dilimleme en az bir gün önce hazırlanabilir. Sakaroz aCSF tampon (mM) oluşur: 180 sakaroz, 30 NaCl, 4.5 KCl, 1.0 MgCl _2, 26 NaHCO _3, 1.2 NaH ₂ PO _4, ve 10 D-glukoz (pH 7.4) ve 95 kullanıyorsanız oksijenli olmalıdır 15 dakika ² için% O ₂ /% 5 CO _2. Vaktinden önce hazırlanmış ise, çözüm 4 buzdolabında tutulmalıdır ° C 1 hafta kadar.
• Deney gün ACSF çözüm voltametrik kayıtları için hazırlıklı olmalısınız. 126 NaCl, 2.5 KCl, 2.4 CaCl _2, 1.2 MgCl _2, 25 NaHCO _3, 1.2 NaH ₂ PO _4, 11 D-glukoz, 0.4 askorbik asit (pH, 7.4 '): aCSF çözümü (mM) oluşur. Kurs süresince, oda sıcaklığında O2 /% 5 _CO 2 ile% 95 köpürme oksijen deney .
• Modified-elektrot kalibrasyonlar içerir aCSF çözeltisi (mM): 2.5 KCl, 126 NaCl, 1.2 NaH ₂ PO _4, 2.4 CaCl _2, 1.2 MgCl _2, ve 25 NaHCO ₃ (pH 7.4) ve bir hafta olmadan tutulabilir soğutma veya oksijenasyon.

Elektrot Kalibrasyonu

• Elektrot canlılığı ve duyarlılığı mühürlü bir referans elektrot (Ag / AgCl) ile 3 bağlantı noktası içeren bir akış "t-hücre" kullanarak, öncesi ve sonrası kalibrasyon, sırasıyla tarafından belirlenir. Fabrikasyon mikroelektrot akışı "t-hücre" içine indirdi. Giriş deliği modifiye aCSF 2 ml / dk akış hızında sürekli bir akış için izin veren bir şırınga pompası bağlıdır. "T-hücre" üçüncü bir bağlantı noktası, modifiye aCSF yapılan 3 mcM dopamin, ile dolu bir şırınga bağlı.
• Önceden kalibre, modifiye aCSF çözüm yaklaşık 3 dakika boyunca akmasına izin - 7 saniye ve daha sonra elle 3 mcM dopamin standart 1-2 ml enjekte. Her bir elektrot içinönceden kalibre edilmesi için en az 3 kez ve ortalama her birinden elde edilen maksimal akımlar kalibrasyon tekrarlayın.
• Dilim voltametri deneyi hemen sonra (bkz. Bölüm 3), elektrot, yukarıda açıklandığı gibi aynı şekilde yazılan kalibre.
• Kalibrasyon faktörü (daha sonra, veri analizi sırasında kullanılan) dopamin standart konsantrasyonu ortalama dopamin oksidasyon (nA) akım bölünmesi ile tespit edilir. Örneğin, 3 mcM dopamin standardını kullanarak geçerli yanıt 3 ile bölünmüştür.

2. Dilim hazırlık

1. Küçük bir beher, bir buz kovası ve yerine sakaroz aCSF 10 ml dökün. Ayrıca, ulaşmak içinde buz kovası anında yapıştırıcı (Loctite 404).
2. Alkol ped ile temiz silerek, bir tıraş bıçağı ve forseps, spatula, ve makas gibi, diseksiyon için gerekli gerekli araçları, hazırlayın.
3. Küçük bir gaz cha CO ₂ boğulma fare Kurbanmber, keskin bir makas kullanarak hemen dekapitasyon takip. Tüm beyni hızla kaldırmak. Yaklaşık 10 dakika boyunca buz sakaroz aCSF beher beyin yerleştirin.
4. Bu arada, dilimleme Vibratome hazırlar. İlk olarak, numune banyosu bazı kırılmış buz koyun. Numune odasına yerleştirin ve sıkıca tutun sıkın. Hiç buz odasına alır emin yapmak, boşlukları doldurmak için numune odasının etrafında daha fazla buz ekleyin. Temizlenmiş jilet, Vibratome bıçak tutucu ve numune haznesi, buz sakaroz aCSF ile doldurun.
5. Beyin hazırlanması için bir çalışma yüzeyi kurmak için, bazı soğuk sakaroz aCSF kalkık bir Petri kabı üzerine yerleştirilmiş olan bir parça kağıt havlu üzerine dökün. Forseps kullanarak hazırlanan Petri kabı üzerine beyin transferi. Koronal dilimler için bir jilet ve atın medial-lateral ekseni boyunca beyincik kesti. Bu, Vibratome aşamada yapıştırılmış olabilir düz bir taban oluşturur.
6. Yernumune aşamasında Loctite yapıştırıcı bir damla (Adım 1 sırasında buz kovası yerleştirilir). Hemen yapıştırmayın sahnede hazırlanan beyin düz ucunu mümkün olduğunca dik tutarak. Numune odasında sahneye yerleştirin ve beyin odasında sakaroz aCSF tamamen dalmış olduğu sağlanması, vidayı sıkın.
7. Vibratome ön denetimleri kullanarak sahne ayarlamak böylece beynin üst jilet hatları. Vibratome için optimum parametreler düşük frekans ve hız ayarı ile elde edilir. Düşük hızlarda, yüksek hızlarda gözlenen beyin, Ezici bıçak gücü en aza indirmek için tercih edilmektedir. Dilim kalınlığı 400 mikron ayarlanır.
8. İlk birkaç dilim striatum içermeyecektir. Dilimleme striatum içeren dilimleri elde edinceye kadar tekrarlayın. Striatal bölgeye ulaşıldığında (anatomik simge tarafından teyit), bir beherdeki dilim ve yer kaldırmak için bir boya fırça kullanınoksijenli, oda sıcaklığı aCSF. Tipik olarak, kaudat putamen ve nukleus accumbens böylece striatal kompleksi içeren 3 - 4 dilim elde edebilirsiniz.
9. Dilimleri deneyler için kullanmadan önce en az 1 saat oda sıcaklığında oksijenli aCSF gelmesini sağlayın.

3. Kesitlerden Voltametrik kayıtları

Dilimleri kuluçka edilirken, dilim kayıt odası hazırlanabilir.

1. Bağlı tüp batırma kayıt odası (Özel Scientific, Denver, CO), oda sıcaklığında aCSF Oksijenleyici yer alın. Bir akış hızı 1 ml / dak perfüzyon pompası (Watson Marlow Limited, Falmouth, İngiltere) ayarlayın. 32 ° C'ye kadar sıcaklık kontrolörü ayarlayın ACSF özel dahili bir dilim tutucu (hasır disk sahne değiştirilmiş) doldurur sonra, bir iğne şırınga (BD spinal iğne) kullanarak herhangi bir hava kabarcığı çıkarmadan dilim için hazırlamak.
2. Vakum çizerek Başbakan dilim banyoakışını başlatmak için bir şırınga kullanarak çıkış boru (cam sıvı atık şişe açan). Arabellek taşması kontrol dilim sahibinin kenarında bir fitil gibi davranmaya kimwipe yerleştirin.
3. 1 saat inkübasyondan sonra, sürekli% 95 O ₂ /% 5 CO ₂ oda sıcaklığı aCSF ile perfüze kayıt odasında tutucu, dilim dilim.
4. Ag / AgCl referans dilim tutucu elektrot (dilim haznesinin kapağı bantlanmış) ve başkanı aşamasında bir timsah klibi kullanarak elektrot bağlamak Batmak.
   • Ag / AgCl referans elektrot AgCl yüzeyinde ince bir tabaka yatırmak için 5 dakika için 1 M HCl (1 V) 250 mikron gümüş tel (AM Sistemleri, Carlsborg, WA) Eloksal ev yapılabilir gümüş tel.
5. Striatal beyin kesit yüzeyi tungsten uyarıcı elektrot (Plastik, Roanoke, VA) indirin. Üst dayanmaktadır gibi uyarıcı elektrot dilim temas edinceye, ancak ponksiyon dilim olmamalıdır. Bizim deneysel, set-up stimülasyon nörolojik stimülatörü tarafından oluşturulur.
6. Karbon fiber çalışma mikroelektrot BD spinal iğne kullanılarak, 150 mM KCl çözeltisi ile tekrar doldurulur. Bir kurşun tel ChemClamp potansiyostat bir timsah klibi (Dagan Şirketler, Minneapolis, MN) kullanarak düşük gürültü kafa aşamasına bağlı (Squires Elektronik, Cornelius, OR), eklenir. Çalışma elektrot yerleştirilir yaklaşık 100 - 200 mikron uzaklıkta Bipolar uyarıcı elektrotlar, dilim derinliklerine yaklaşık 75 mikron.
7. Ya tek (monofazik, 350 uA, 60 Hz ve 4 ms darbe genişliği) veya birden fazla (örneğin 5 bakliyat, 350 uA, 20 Hz ve 4 ms geniş) bakliyat ile elektrik uyarılarının, nörotransmitter uyandırmak için uyarıcı elektrot tarafından verilmektedir sürüm ^3.
8. Elektriksel olarak uyarılmış dopamin FSCV kullanarak ölçmek için, bir üçgen dalga formu elektrot uygulanır. Dop için tipik parametreleriamin algılama: karbon fiber mikroelektrot potansiyeli sonra 400 tarama hızı -0.4 V geri getirdi, 1,2 V olumlu bir sınır için rampalı bir Ag / AgCl referans elektrot, karşı -0.4 V düzenlenen V / s .
9. Dilim, elektriksel olarak 15 saniye boyunca her 5 dakikada çıkan dopamin efflux ve voltametrik ölçümleri yapılır uyarılmış.
10. En az üç kararlı elektriksel olarak uyarılan dopamin salınımını kayıtları (pik yüksekliği arasındaki fark <% 10) sonra, ilgi farmakolojik ajan içeren aCSF dilim üzerinde maksimum etkiyi elde etmek için 30 dakika için 1 ml / dak akış hızında perfüze. Elektrikle uyarılan dopamin kayıtları farmakolojik perfüzyon sırasında her 5 dakikada bir yapılır.

4. Veri analizi

Dilim elde sonuçlanan akım zamana izleri Wightman tarafından açıklandığı gibi, Michaelis-Menten tabanlı denklemlerin bir dizi doğrusal olmayan regresyon tarafından uygun olabilirve meslektaşları LabVIEW (National Instruments, Austin, Teksas) ^4-6 yazılmış yazılım. Ve puls başına dopamin konsantrasyonunu (nM, bu yazılım, şimdiki zamana izlerini değişen iki parametre, V _max (iz inen faz gösterdiği gibi dopamin taşıyıcı alımı oranına karşılık gelen nM / s) takılabilir. tepe yüksekliği maksimum karşılık gelen). Dopamin taşıyıcı dopamin yakınlığı yansıtan K _m değeri, 160 nM ve değişmez. Elektrot kalibrasyon faktörü deney sonucunda belirlenir uydurma önce gereklidir. LabView yazılım determinasyon katsayısı (R ²⁾ (R ² değerleri> 0.8) uyum iyiliği belirlemek için parametre içerir.

5. Temsilcisi Sonuçlar

FSCV tek nabız, kaudat-koymak elektrikle uyarılan dopamin salınımı ve alımı incelemek için kullanılanamin (CPU), nükleus akumbens (NAC) çekirdek, ve farelerde NAC kabuk. Şekil 1A gösterilen Temsilcisi sonuçları geçerli (veya konsantrasyon) zamana araziler göstermektedir. Kırmızı ok karbon fiber mikroelektrot dopamin konsantrasyonunda değişikliklere ait akım miktarı karşılık gelen bir artış izledi dilim elektriksel stimülasyon uygulandığı zaman gösterir. Elektriksel stimülasyon sırasında baskın bir süreç dopamin salınımını, ancak böyle alımı ve difüzyon gibi diğer işlemler ve genel olarak gözlenen pik yüksekliği katkıda bulunur. Tepe azalan faz özellikle nöronal stimülasyon ⁷ durdu beri onun taşıyıcı nörotransmitter geri alım atfedilir. Ancak, difüzyon ve metabolizma akım azalması da katkıda tepe çürüme, geri alım sınırlı değildir. Elektrokimyasal ölçümler zaman ölçeğinde birkaç saniye içinde olduğundan, FSCV contributio ölçmek için çok hızlı olduğunu öne olmuşturmetabolizma ⁷ ns. Bu akım zamana izleri, y-ekseni sonrası deneme kalibrasyon faktörü konsantrasyonu (mcM) dönüştürülür. Şekil 1A içerlek ilgili arka plan şimdiki zamana izlerini siklik voltamogramları çıkarılır. Uygulanan potansiyeline karşı elektrot (x-ekseni) (y-ekseni) ölçülen akım çizim, dopamin kimyasal gözlenen oksidasyon pik ve dopamin-orto-kinon karşılık gelen bir azalma zirvesinde görülmektedir 0,6 V ile tanımlanır Ag / AgCl referans elektrot karşı 0,2 V. Verilerin üçüncü temsilini tek bir komplo oluşturmak için zamana izleri ve döngüsel voltammogram bilgileri birleştirerek üç boyutlu bir pseudo-color arsa (Şekil 1B) kullanır. Temsilcisi pseudo-color arsa, zaman, x-ekseni boyunca saniyede çizilir, karbon fiber çalışma mikroelektrot uygulanan gerilim y ekseni boyunca görülebilir ve mevcut fal olarak temsilz-ekseni boyunca se renk. Karbon fiber Mikroelektronlar (~ 7 mm çapında), küçük boyutu sayesinde, elektriksel olarak uyarılmış dopamin dinamikleri striatum (Şekil 2 CPU karşı NAC çekirdekli karşı NAC kabuk) ayrı anatomik bölgelerde tespit edilebilir.

Striatal koronal dilimleri kullanarak bir avantajı dopamin hücre gövdeleri katkıları ortadan kaldırır ve presinaptik dopamin dinamiklerinin bir soruşturma sağlar. Diğerleri ^{16, 17} gösterildiği gibi presinaptik dopamin salınımı ve alımı kontrolü kesinlikle dopamin autoreceptor veya taşıyıcı fonksiyonları ile sınırlı değildir. Diğer nörotransmiter sistemlerinde Heteroreceptors da dopamin dinamikleri ^{18, 19} modüle. Şekil 3A gösterilen Temsilcisi akım zamana izleri dilimleri 30 dakika 1 mcM quinpirole (D2/D3 reseptör agonisti), elektrikle uyarılmış dopamin salınımını bir azalma ile tedavi edildiklerinde görülmektedir olduğunu göstermek. Diğer taraftan, ne zaman bir substratmetamfetamin olarak dopamin taşıyıcı, 30 dakika boyunca dilim üzerinde perfüze için, dopamin salınımını hiçbir fark görülmektedir (Şekil 3B). Pik çürüme, genellikle dopamin taşıyıcı kinetiği değişiklikler _(K ^m) 3 ile ilişkili sağ, kaydırılır . Son olarak, dilim dopamin salınımını dinamikleri ^{20, 21} etkilemek için öne sürülmüştür 100 ng / mL beyin kaynaklı nörotrofik faktör (BDNF) çözümü, yıkanmış edildikten sonra Şekil 3C akım zamana eser temsil eden bir eser. Bu temsili eser, BDNF, elektrikle uyarılmış dopamin salınımını arttırmak için yeteneğinde olduğu görülebilir. Birlikte ele alındığında, bu farmakolojik tedaviler striatum içinde dopamin dinamikleri prob FSCV yararını vurgulamak.

FSCV presinaptik dopamin dinamiğini incelemek için beyin dilimleri kullanarak birincil sınırlama sağlam bir beyin neurocircuitry kaybetmiş olmasıdır.Dilim FSCV ile zor katkıları bu sistemlerin araştırılmaktadır bölge işlevselliğini anlamak için (örneğin striatum) ya da olmayan uyarılan dopamin seviyelerini değerlendirmek için, diğer beyin bölgeleri nörotransmitterlerin etkilerini incelemek mümkün değildir. ^{24 -} Bununla beraber, son teknik gelişmeler FSCV serbestçe farmakolojik manipülasyon, öz-yönetim, ya da ^yenilik 22 yanıt fareler hareketli dopamin geçici ölçümleri (ve elektriksel stimülasyon olmadan) için izin verdi . Genel olarak, dilim FSCV presinaptik dopamin dinamikleri hakkında değerli bilgiler sağlar ve mikrodiyaliz, elektrofizyoloji ve / veya serbestçe FSCV hareket gibi tamamlayıcı nörokimyasal teknikleri dilim FSCV sonuçları kaplin beyindeki nörotransmiter işleyişinin daha kapsamlı bir görünümünü sunmaktadır.

Şekil 1 dopamin elektrikle uyarılmışe sürüm C57Bl/6J fareler dorsal CPU dilim FSCV aşağıdaki tek-darbe stimülasyon kullanılarak ölçüldü. Dopamin salınımını tek bir darbe (kırmızı ok) tarafından uyarılmış olduğu (A) konsantrasyonu zamana iz. Tek yıldızla konsantrasyon, ağırlıklı olarak dopamin salınımını yükselişine katkıda bulunan faktörleri temsil eder, ama alımı ve difüzyon da katkıda bulunur. Nedeniyle alımı için değil, aynı zamanda difüzyon katkıda bulunur, başlangıca dönen çift yıldız tepe sinyal temsil eder. Ankastre ilgili döngüsel voltamogramları görüntüler. (B) dorsal CPU ekran zamanı (x-ekseni) Temsilcisi renkli çizimleri, sözde-renk karbon fiber mikroelektrot Ag / AgCl referans elektrot (y-ekseni) karşı potansiyel ve akım uygulanır.

Şekil 2 NAC çekirdekli tek bir elektriksel stimülasyon darbe (kırmızı ok ile gösterilen) tarafından uyarılmış. Dopamin serbestC57Bl/6J fareler ve kabuk. (A ve C) NAC çekirdek ve kabuğunda zaman izleri ve bunlara karşılık gelen döngüsel voltamogramları (inset) karşı konsantrasyon. (B ve D) Daha önce NAC çekirdek ve kabuğunda, temsili renk araziler tarif.

Şekil 3 dilim sonra Temsilcisi izleri, 30 dakika boyunca bir farmakolojik ajan ile tedavi edildi; her durumda, tek bir darbe CPU dopamin salınımını uyandırmak için kullanılır . (A) Uygulama, dopamin D2 reseptör agonisti quinpirole (kırmızı iz) tedavi öncesi (siyah iz) göre. (B) Metamfetamin perfüzyon (mor eser), tedavi öncesi (siyah iz). (C) beyin kaynaklı nörotrofik faktör yeteneği tedavi öncesi (siyah iz) göre (mavi iz) dopamin dinamiklerini etkilemek için.

Tartışma

Burada sunulan protokol FSCV deneyler fare koronal beyin dilimleri hazırlamak ve nasıl kullanılacağını gösteriyor. ^{11 -} Bu yöntem dopamin dinamiklerini elde etmek ve ölçmek için özel olmasına rağmen, diğer nörotransmitterlerin gibi adenozin, hidrojen peroksit, noradrenalin ve serotonin FSCV ^{3, 8} ile in vivo ve in vitro olarak takip edilmiştir. FSCV bazı çalışma elektrot ^{3, 11} uygulanan dalga basit değişiklikler ile bu diğer nörokimyasalların izlemek için kullanılabilir....

Malzemeler

Bu makalede kullanılan malzemelerin listesi

Ad	Şirket	Katalog numarası	Yorumlar
Isim	Şirket	CAS numarası
Reaktif
Potasyum klorid	Balıkçı	7447407
Sodyum klorür	Merck Kimyasallar	7647145
Magnezyum klorür	Balıkçı	7791186
Kalsiyum klorür	Balıkçı	10035048
Sodyum bikarbonat	Merck Kimyasallar	144558
Sodyum fosfat, Dibazik	Merck Kimyasals	7558794
D-glukoz	Balıkçı	50997
Askorbik asit	Balıkçı	50817
Sakaroz	Balıkçı	57501
Malzemeler	Satıcı	Katalog numarası
Karbon fiber	Goodfellow Oakdale, PA
Cam kapiller	AM Sistemleri Carlsborg WA.	602000
Gümüş tel	A-M Sistemleri Carlsborg WA.	787000
Tungsten uyarıcı elektrot	Plastik biri, Roanoke, VA
Platin tel
Kurşun tel	Squires Elektronik, Cornelius, OR
Loctite 404 anında yapıştırıcı	Hankal Corp Rocky Hill CT.
Jilet	Dünya hassas Instruments Inc FL.
BD Spinal iğne	BD Tıp sistemleri, Franlin Gölü, NJ	REF 405.234
Cerrahi Bıçak	Tüy Güvenlik jilet LTD. Japonya
Yazılım	Satıcı	Katalog numarası
TH yazılım	ESA A.Ş., Chelmsford, MA
Enstrüman	Satıcı	Katalog numarası
Daldırma kayıt odası	Özel Scientific, Denver, CO
Neorolog uyaran izolatör	Digitmeter, Hertfordshire, İngiltere
Otomatik sıcaklık kontrolörü	Warner Instrument Corporation
Mikroskobu (SZX7)	Olympus
Mikroskop	Balıkçı
Vibratome 3000 kesit sistemi	St. Lou, MO.
Perfüzyon pompası	Watson Marlow Limited, Falmouth Cornwall - İngiltere	H110708
Mikropipet çektirmesi	Narishige, Tokyo, Japonya
ChemClamp potansiyostat	Dagan Şirketler, Minneapolis, MN.