Periferik duyusal sinir lifi alt tiplerinin İmmünositokimyasal kimlik (ve orada protein ekspresyonu tespit), periferik hissi altında yatan moleküler mekanizmaları anlamak için kilit öneme sahiptir. Burada periferik duyusal sinir lifleri belirli immün için, deri ve bacak kemikleri gibi periferik / visseral doku örnekleri, hazırlama yöntemleri açıklanmaktadır.
Bu içeriği görüntülemek için JoVE aboneliğiniz gereklidir. Giriş yapın veya ücretsiz denemenizi bugün başlatın.
Yöntem makalesi
Deri ve Kol ve bacak kemikleri innerve Fare Duyusal Sinir Lif doku hazırlanması ve immün
Bu makalede
Özet
Özet
Algılama ve periferik duyusal sinir lifleri tarafından fiziksel, kimyasal ve termal duyusal uyaranlar birincil işleme, hayvanlarda ve insanlarda duyu algı anahtar. Bu periferik duyusal sinir lifleri, algılayabilir ve belirli duyusal uyaranlar başlatmak reseptörleri ve iyon kanal proteinlerinin bir bolluk ifade eder. Yöntem aynı zamanda bu liflerin belirli bir iyon kanalı proteinlerin fonksiyonel ifade tanımlamak için kullanılabilir cilt innerve periferik duyusal sinir lifleri, elektriksel özellikleri karakterize etmek için kullanılabilir. Ancak, benzer elektrofizyolojik yöntemler mevcut değildir (ve de geliştirmek için zor), periferik duyusal sinir lifleri, kemik gibi en zorlu dokuların da dahil olmak üzere diğer visseral organları innerve reseptörleri ve iyon kanal proteinlerinin fonksiyonel ifade algılama. Ayrıca, bu gibi elektrofizyolojik yöntemler olmayan Uyarılabilir protein ifade belirlemek için kullanılanperiferik duyusal sinir lifleri var. Bu nedenle, duyusal sinir fivers periferik / visseral doku örnekleri immün Bu sinir lifleri ilgi spesifik proteinlerin ekspresyonunu belirlemek için en iyi şekilde sağlar. Şimdiye kadar, duyusal nöronlarda protein ekspresyonu çalışmaların çoğu bilgi, belirli proteinlerin hücre vücudun belirli türleri ya da duyusal nöronların alt kümelerini ifade sınırlı duyu ganglionlar, prosedürleri immün kullanılmaktadır. Burada, periferik duyusal sinir lifleri immün periferik / visseral doku örneklerinin hazırlanması için ayrıntılı yöntemleri / protokoller raporu. Biz özellikle deri veya plantar punch biyopsi ve kemik (femur), periferik duyusal sinir lifleri immün farelerden elde edilen bölümleri hazırlanması için ayrıntılı yöntemleri. Bu yöntemler sadece periferik duyusal nöronlar protein ekspresyonu kalitatif tayin önemli değildir, aynı zamanda bir kantitatif yöntem sağlamakduyusal liflerin belirli türleri veya altkümelerini protein ekspresyon düzeylerinde değişiklikler tespit yanı sıra, çeşitli patolojik durumları sırasında duyusal liflerin sayısı ve yoğunluğu, morfolojik ve / veya anatomik değişiklikler belirlemek için. Ayrıca, bu yöntemler sadece duyusal sinir liflerinin boyanması sınırlı değildir, aynı zamanda deri, kemik ve diğer visseral doku herhangi bir tür sinir liflerinin boyanması için kullanılabilir.
Protokol
1. Hayvan Perfüzyon
Bu çalışmada gerçekleştirilen tüm hayvan prosedürleri Iowa Üniversitesi Kurumsal Hayvan Bakımı ve Kullanımı Komitesi tarafından onaylanmış ve araştırma hayvanların kullanımı için NIH yönergeleri izleyin.
- Perfüzyon bir gün önce, 4 ° C'de 1 L fosfat tamponu (0.2 M PB çift distile H 2 O, pH 7.4), ve mağaza hazırlamak Bu perfüzyon ve fiksasyonu sonrası süreçler için kullanılır.
- : 30 saniye için 200 ml cam beher GKD 2 O mikrodalga perfüzyon gününde, (PFA, pH 7.4)% 4.0 paraformaldehid 0.1M PB fiksatif çözüm 2 farelerin perfüzyon için yeterli bir hacmi 500 ml hazırlamak veya kaynar y....
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Tartışma
Burada fare, cilt ve immün ve periferik duyusal sinir lifleri algılama kemik doku kesitlerinde hazırlanması için yöntemler ayrıntılarıyla belirttik. Plantar punch biyopsi üretilen bölümleri hem tüysüz ve saçlı deri içeren protokol, her cilt tipine kullanılabilir anlamına gelir. Bu teknikler aynı zamanda diğer hücre türleri (örneğin lökosit, vasküler endotelin, düz kas diğerlerinin yanı sıra) bu dokuların leke istihdam edilebilirler. Bu yöntemler en iyi ultrastrüktürel korunması arasında mükemmel bir uzlaşma (glutaraldeh.......
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Açıklamalar
Hiçbir çıkar çatışmaları ilan etti.
Teşekkürler
Ona sürekli yardım ve bu işe yapıcı eleştiri ve Dr. Donna L. Hammond; konfokal mikroskopi / fare plantar punch biyopsi immün görüntüleme ilk standardizasyon yardımlarından dolayı Dr. Yuriy M. Usachev teşekkür ederiz. Bu çalışma NINDS / NIH (NS069898) hibe ve DPM, Savunma Prostat Kanseri Araştırma Programı Bakanlığı (DoD-PCRP-101.096) Fikir Kalkınma Hibe Ödülü tarafından finanse edildi
....Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Malzemeler
| Ad | Şirket | Katalog numarası | Yorumlar | |
|---|---|---|---|---|
| Malzeme Adı | Tip | Şirket | Katalog No. | Yorum |
| 3mm Harris Micro-Punch | Malzeme | Ted Pella | 15094 | |
| Perfüzyon pompası | Malzeme | VWR Uluslararası | 23609-170 | |
| Paraformaldehit | Reaktif | Fisher Scientific | T353 | |
| Pikrik asit | Reaktif | Sigma-Aldrich | 239801 | |
| Ekim gömülmesi bileşik | Reaktif | Doku-Tek | 4583 | |
| Cyto-Freeze kriyojenik aerosol sprey | Malzeme | Kontrol Şirketi | 3118 | |
| Keçi Serumu | Reaktif | Sigma-Aldrich | G9023 | |
| Kuluçka tepsi ve immün kapağı (Large) | Malzeme | RPI Corp. | 248.270 (tepsi) 248.270-A (kapak) | |
| ImmEdge hidrofobik bariyer kalem | Malzeme | Vektör Laboratuvarları | H-4000 | |
| Camel Saç Fırçaları (# 1 kalınlığı) | Malzeme | Ted Pella | 11859 | |
| Pro-Uzun Altın orta Montaj | Reaktif | Invitrogen | P36930 |
Kaynaklar
- Hoffman, E. M., Schechter, R., Miller, K. E. Fixative Composition Alters Distributions of Immunoreactivity for Glutaminase and Two Markers of Nociceptive Neurons, Nav 1.8 and TRPV1, in the Rat Dorsal Root Ganglion. Journal of Histochemistry & Cytochemistry. 58, 329-344 (2010).
- Neves, J. D. S., Omar, N. F., Narvaes, E. A. O., Gomes....
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Yeniden basım ve izinler
