Germ hücre nakli ve testis dokusu xenografting için Protokoller açıklanmıştır. Germ hücre nakli alıcı testiste donör kaynaklı spermatogenez ve spermatogonial kök hücreler (DGM) belirlenmesi için fonksiyonel bir sulandırma tahlil sonuçları temsil eder. Xenografting Testis dokusu alıcı farelerde testis gelişimini ve spermatogenezi çeşitli donör türleri üretir.
Bu içeriği görüntülemek için JoVE aboneliğiniz gereklidir. Giriş yapın veya ücretsiz denemenizi bugün başlatın.
Yöntem makalesi
Germ Hücre Nakli ve Testis Dokusu Farelerde Xenografting
* These authors contributed equally
Bu makalede
Özet
Özet
Germ hücre transplantasyonu 1994 1,2 Pennsylvania Üniversitesi'nden Dr., Ralph Brinster ve arkadaşları tarafından geliştirilmiştir. Bu çığır açan çalışmalar alıcının hayvan 2 donör kaynaklı spermatogenez ve sperm üretimi, infertil alıcı fareler sonuçları seminifer tübüller içine bereketli donör farelerin germ hücreleri bu mikroenjeksiyon gösterdi. Kullanımı alıcı hayvanların 1 yavrular, donör haplotypein donör kaynaklı spermatogenez ve iletim bakteriyel β-galaktosidaz gen izin kimlik taşıyan donör erkek. Şaşırtıcı, seminifer tübül lümenine naklinden sonra, nakledilen germ hücreleri, spermatogonium 3 yer vardır bazal membran luminal bölmesini taşımak için başardık. Genellikle sadece DGM'lerden alıcı testis ve spermatogenez yeniden kurmak niş kolonize olduğu kabul edilir. Bu nedenle, germ hücrelitransplantasyonu,, testisinde kök hücre niş okumak için ve olası spermatogonial kök hücre karakterize fonksiyonel bir yaklaşım sağlar. Bugüne kadar, germ hücre transplantasyonu, temel kök hücre biyolojisi aydınlatmak için önce germ hücrelerinin genetik manipülasyon yoluyla nakli 4,5 transgenik hayvanlar üretmek için, Sertoli cell-germ hücreli etkileşimi 6,7, SSC homing ve kolonizasyon 3 çalışmak için kullanılır. 8, yanı sıra gibi SSC kendi kendine-yenilenmesini değişiklik yapmış ve diferansiyasyon 9,10.
Germ hücre nakli 11 iri türlere de mümkündür. Bu, ana uygulamalar doğurganlığın korunması, hayvan popülasyonlarının elit genetik yayılması ve bu teknik ile, spermatogenez ve SSC biyoloji çalışma lojistik, kemirgenlerde göre daha zor ve pahalı olduğu gibi, transgenik hayvan üretimi vardır. Farelerde colonizat sonuçları seminifer tübüller içine iri türlere germ hücrelerinin naklidonör hücrelerinin iyon ve spermatogonial genişleme değil, muhtemelen, filogenetik olarak uzak türler 12 germ hücreleri ile alıcı somatik hücre bölmesi uyumsuzluk nedeniyle tam farklılaşma. Alternatif bir yaklaşım çevreleyen somatik bölmesi ile birlikte büyük türlerinin germ hücre naklidir. Biz ilk dorsal deri altında bağışık yetmezliği olan farelere nakledilen olgunlaşmamış erkek testis dokusu küçük parçaları 13 döllenme yetkili sperm üretimi ile tam gelişmesi ancak hayatta geçmesi mümkün olduğunu, 2002 yılında bildirilmiştir. O zamandan beri birçok türün başarılı olmak için xenografting testis dokusunda gösterilmiştir ve farelerin 14 büyük hayvanların testis gelişimi ve spermatogenez incelemek için değerli bir alternatif olarak ortaya çıkmıştır.
Protokol
BÖLÜM farelerde A. Germ hücre nakli
1. , Alıcının fareler of Hazırlanışı
- Alıcılar donör testis hücreleri (donörlerden ya da bağışıklık eksikliği ya da genetik olarak uyumlu) bağışıksal hoşgörülü olmalıdır.
- Alıcılar ya doğal olarak spermatogenez yoksun (örneğin W / W v fareler) veya endojen germ hücrelerinin tüketilmiş olması gerekir. Germ hücre tükenmesi,, ışınlama ya da bu tür Myleran Film Tablet'ın gibi kemoterapötik uyuşturucular kullanıcısı tarafından başarılabilir uygulanmaz edebilirsiniz. , Bu protokol In, biz,,, Myleran Film Tablet'ın ile birlikte alıcının fareler hazırlarken of yöntemini açık....
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Tartışma
1. Germ hücreli Transplantation
Germ hücre transplantasyonu (DGM) bir hücre popülasyonu spermatogonial kök hücrelerin varlığı kesin onay için sadece fonksiyonel ölçüm sağlar. Sadece DGM'lerden ve ev bazal membran SSC niş kolonize ve donör kaynaklı spermatogenez başlatmak. Germ hücre transplantasyonu, DGM'lerden benzeri görülmemiş bir şekilde çalışmak ve işlemek için mümkün kıldı. Teknik, DGM'lerden 4, genetik manipülasyon yoluyla transgenik hayvanlar üretmek için kullanı.......
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Açıklamalar
Çıkar çatışması ilan etti.
Teşekkürler
Yazarlar laboratuvar İş USDA-/ CSREES / NRICGP (2007-35203-18213) tarafından desteklenen; NIH / NCRR (2 R01 RR17359-06), NIH / NIEHS (1 R21 ES014856-01A2) ve Alberta yenilikler yaratır - Sağlık Çözümleri.
....Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Malzemeler
| Ad | Şirket | Katalog numarası | Yorumlar |
|---|---|---|---|
| Reaktif Adı | Şirket | Katalog numarası | |
| Kollajenaz (tip IV) | Sigma | C5138 | |
| Tripsin-EDTA | Invitrogen | 25200-056 | |
| DNaseI | Sigma | DN25 | |
| DMEM | Invitrogen | 31053-028 | |
| Tripan mavisi KORUYUCU | Invitrogen | 15250-061 | |
| Naylon örgü hücre süzgecinden | BD biyoloji | 352.340 (40μm) 352.350 (70μm) | |
| Busulfan | Sigma | B2635 | |
| İnce Wall Cam kılcal | Dünya Hassas Çalgı | TW 100-3 | |
| BD intramedic plyethylene boru (PE100) | BD | CA-63018-725 | |
| Ethicon 6-0 İpek Sütür | Ethicon | 706g | |
| Yara klipler | BD | 427631 | |
| Sigmacote | Sigma | SL2 | |
| X-gal | Sigma | B4252 | |
| Ferrocyanide Potasyum | Sigma | P9387 | |
| Potasyum ferrisiyanürle | Sigma | P3667 | |
| magnezyum klorür | Sigma | 208337 | |
| sodyum deoksikolat | Sigma | D6750 | |
| , N, N-Dimethylformamide | Sigma | D4551 | |
| Igepal CA-630 | Sigma | 18896 |
Kaynaklar
- Brinster, R. L., Avarbock, M. R. Germline transmission of donor haplotype following spermatogonial transplantation. Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 91 (24), 11303-11303 (1994).
- Brinster, R. L., Zimmermann, J. W.
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Yeniden basım ve izinler
