Biz yerli pancratistatin olarak karşılaştırılabilir anti-kanser aktivitesi ile pancratistatin bir roman analog sentezledik; ilginci, tamoksifen ile kombinatoriyel tedavi noncancerous fibroblastlar üzerinde minimal etkisi ile hedef mitokondriyal tarafından apoptotik ve otofajik indüksiyon köklü bir iyileştirme sağlamıştır. Böylece, tamoksifen ile kombinasyon halinde JCTH-4 güvenli bir anti-kanser terapisi sağlayabilir.
Bu içeriği görüntülemek için JoVE aboneliğiniz gereklidir. Giriş yapın veya ücretsiz denemenizi bugün başlatın.
Yöntem makalesi
İnsan Meme Adenokarsinom ve Tamoksifen Nöroblastom Hücreleri 7-deoxypancratistatin bir Roman Sentetik C-1 Analog tarafından Apoptotik ve Otofajik İndüksiyon Geliştirilmesi
Bu makalede
Özet
Özet
Göğüs kanseri, Kuzey Amerika'da kadınlar arasında yaygın kanserler biridir. Iyonizan radyasyon dahil olmak üzere birçok güncel anti-kanser tedavileri, DNA hasarı ile apoptoza yol. Ne yazık ki, bu tür tedavi kanser hücrelerine non-selektif ve normal hücrelerde benzer bir toksisite üretirler. Biz doğal bileşik pancratistatin (PST) tarafından kanser hücrelerinde apoptoz seçici indüksiyon bildirdin. Son zamanlarda, yeni bir PST analoğu, 7-deoxypancratistatin (JCTH-4) ve bir C-1 asetoksimetil türevi de novo sentezi tarafından üretilen ve bazı kanser hücresi hatlarında karşılaştırılabilir seçici apoptosis teşvik edici aktivite sergileyen edildi. Son zamanlarda, otofaji kemoterapiye yanıt yanlısı hayatta kalma ve pro-ölüm mekanizmaları hem olarak malignitelerde ortaya konmuştur. Tamoksifen (TAM) değişmez sayısız kanser yanlısı yaşam otofaji indüksiyonu göstermiştir. Bu çalışmada, tek başına Tam ile kombinasyon halinde JCTH-4 etkinliğini insan göğüs rak gerçekleştirildi hücre ölümü indüklemek içinr (MCF7) ve nöroblastom (SH-SY5Y) hücreleri değerlendirildi. Yalnız JCTH-4 otofaji bazı indüksiyon ile apoptozisi önemli indüksiyon neden ise yalnız TAM otofaji uyarılan, ancak önemsiz hücre ölümü. İlginçtir, kombinatoriyel tedavi apoptotik ve otofajik indüksiyon köklü bir artış sağlamıştır. Biz time-lapse mikroskopi kullanılarak kombinatoryal tedavi ile TAM bağlı otofaji geçiren MCF7 hücrelerinde zamana bağlı morfolojik değişiklikler, JCTH-4-apopitozu ve otofaji, ve hızlandırılmış hücre ölümü izlenir. Biz bu kanser hücrelerinde mitokondriyal hedefleme apoptoz / otofaji ikna etmek için bu bileşiklerin göstermiştir. Önemlisi, bu tedaviler kanserli olmayan insan fibroblast hayatta etkilemedi. Böylece, bu sonuçlar JCTH-4 Tam ile kombinasyon halinde meme kanseri ve nöroblastoma hücrelerine karşı güvenilir ve çok kuvvetli bir anti-kanser tedavisi olarak kullanılan kalabileceğini göstermiştir.
Protokol
Giriş
Apoptosis, ya da I, programlanmış hücre ölümü yazın, bir ölüm reseptörü için bir ölüm ligand bağlanması, ya özünde yoluyla, dışsal çalışabilir fizyolojik bir işlemdir. Apoptoz intrinsik yol gibi DNA hasarı ve mitokondriyal disfonksiyon olarak hücre içi stres tarafından başlatılır, bu sonuçta mitokondrial membran potansiyeli mitokondri, yayılımı (MMP), mitokondriyal arası boşlukta gelen apoptogenic faktörlerin sürümü permeabilization yol açar ve sonraki yürütme apoptoz 1.
Otofaji bir hücre araları, alçaltır ve plazma membran bütünlüğünü koruyarak kendi hücre içi bileşenlerinin geri dönüşümü olan b....
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Tartışma
PST ve benzer bileşikler, anti-kanser özelliği 11-15,21 sahip olduğu gösterilmiştir. Biz daha önce böylece apoptogenic faktörler 12,14 salınımı ile apoptozis kanser hücreleri, seçici mitokondri istikrarsızlaştırmak için doğal PST bildirdin. Bu büyük olasılıkla aynı mekanizma yoluyla JCTH-4 eylemleri; JCTH-4 (TMRM boyama (Şekil 5a) ile birlikte görülen, ve SH-SY5Y hücreler izole edilen mitokondri ROS üretimi arttıkça MCF7 hücrelerinde MMP çökmesine neden oldu Şekil 5b),
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Açıklamalar
Çıkar çatışması ilan etti.
Teşekkürler
Bu çalışma Columbus Bölüm 9671 (Windsor, Ontario), ve bir CIHR Frederick Banting ve Dennis Ma verilen Charles Best Kanada Yüksek Lisans Bursu Şövalyeleri tarafından desteklenmiştir. Time-lapse mikroskobu ile yardım için Robert Hodge ve Elizabeth Fidalgo da Silva için teşekkür ederiz. Hızlandırılmış mikroskopi düzenleme için videoları Katie Facecchia için teşekkür ederiz. Biz de bu yazının eleştiri için Sudipa Haziran Chatterjee ve Phillip Tremblay teşekkür etmek istiyorum. Bu çalışma 2010 yılında kansere karşı verdiği savaşı kaybetti Kevin Couvillon anısına adanmıştır.
....Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Malzemeler
| Ad | Şirket | Katalog numarası | Yorumlar |
|---|---|---|---|
| Malzeme Adı | Şirket | Katalog numarası | |
| SH-SY5Y hücre hattı | ATCC | CRL-2266 | |
| Dulbecco Modifiye Eagles Orta F-12 HAM | Sigma-Aldrich | 51448C | |
| Fetal sığır serumu | Gibco BRL | 16000-044 | |
| MCF7 hücre hattı | ATCC | HTB-22 | |
| RPMI-1640 ortamı | Sigma-Aldrich | R 0883 | |
| Görünüşe göre normal insan fetal fibroblast hücre hattı (NFF) | Tıbbi Araştırma Enstitüsü Coriell | AG04431B | |
| Dulbecco Modifiye Eagle Orta, Yüksek Glukoz orta | Thermo Scientific | SH30022.01 | |
| Tamoksifen sitrat tuzu | Sigma-Aldrich | T9262 | |
| 35 mm cam alt kültür kaplarına | MatTek Corp | P35G-014-C | |
| Leica DMI6000 B inverted mikroskop | Leica Microsystems | N / A | |
| Hoechst 33342 boyası | Molecular Probes | H3570 | |
| Leica DM IRB floresan mikroskop ters | Leica Microsystems | N / A | |
| Annexin V AlexaFluor-488 | Invitrogen | A13201 | |
| Tripan Mavi çözüm | Sigma-Aldrich | T8154-20ML | |
| Haemocytometer | Fisher Scientific | 267110 | |
| WST-1 reaktifi | Roche Applied Science | 11644807001 | |
| Wallac Victor 3 1420 Multilabel Sayaç | Perkin Elmer | 1420-011 | |
| Tetramethylrhodamine metil ester (TMRM) | Gibco BRL | T-668 | |
| Cam doku öğütücü | Fisher Scientific | K8885300-0002 | |
| BioRad protein tayini | Bio-Rad Laboratories | Form 500-0001Bottom | |
| Amplex Kırmızı | Invitrogen | A12222 | |
| Horseradish peroksidaz (HRP) | Sigma-Aldrich | P8125 | |
| SpectraMax İkizler XPS | Molecular Devices | 3126666 | |
| Anti-LC3 antikor tavşan büyüdü | Novus Biologicals | NB100-2220 | |
| Anti-fare HRP bağlı sekonder antikor | Abcam | ab6728 | |
| Anti-tavşan HRP bağlı sekonder antikor | Abcam | ab6802 | |
| Kemilüminesans peroksidaz substrat | Sigma-Aldrich | CPS160 | |
| Monodansylcadaverine | Sigma-Aldrich | 30432 |
Kaynaklar
- Earnshaw, W. C. Apoptosis. A cellular poison cupboard. Nature. 397, 387-389 (1999).
- Kroemer, G., Mariño, G., Levine, B. Autophagy and the integrated stress response. Mol. Cell. 40, 280-293 (2010).
- Dalby, K. N., Tekedereli, I., Lopez-Berestein, G., Ozpolat, B.
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Yeniden basım ve izinler
