Biz nöron veya polietilen emme pipet kullanarak herhangi bir nöronal yoluna floresan ve kalsiyum duyarlı boyalar yüksek konsantrasyon tanıtmak için basit ve düşük maliyetli tekniği tanımlandı.
Bu içeriği görüntülemek için JoVE aboneliğiniz gereklidir. Giriş yapın veya ücretsiz denemenizi bugün başlatın.
Yöntem makalesi
Sinirler, yolları ve Floresan Boyalar ile Spinal Roots Retrograd Yükleniyor
Bu makalede
Özet
Özet
Nöronların Retrograd etiketleme de nöronlar 3-6, kalsiyum ve voltaj duyarlı boyalar yüklemek için kullanılan bir standart anatomik yöntemi 1,2. Genel olarak, boyalar katı kristaller halinde ya da cam pipet kullanılarak lokal baskısı enjeksiyon yoluyla uygulanır. Bununla birlikte, bu birkaç saat boya difüzyonu için gerekli olan, özellikle boya ve azaltılmış etiketleme yoğunluğunun seyreltme ile sonuçlanabilir. Burada boya çözeltisi ile doldurulmuş bir polietilen emiş pipet kullanılarak nöronlar içine flüoresan ve iyon karşı hassas boyaların sokulması için basit ve düşük maliyetli bir teknikle göstermektedir. Bu yöntem, yükleme işlemi boyunca akson ile temas halinde boya yüksek bir konsantrasyonunun muhafaza için güvenilir bir yol sunar.
Protokol
Floresan dekstranlar anatomik araçları olarak ve görüntüleme nöronal aktivitenin 1-4 için kullanılmıştır. Alanlar ve ark., (2009) 4 model sistem olarak omurilik odaklanarak aksonal yolları için iyon ve voltaj duyarlı boya uygulamak için bir protokol yayınlamıştır. Burada in-vitro optophysiological ve morfolojik çalışmalar için kesim ventral kök, dorsal kök ve omuriliğin herhangi bir nöronal yollarını floresan ve / veya iyon duyarlı boya uygulamak için daha ayrıntılı bir prosedür tanımlamaktır.
1. Tip I ve Tip-II Pipetler
Sivri uçları olan pipetler üretmek için bir alkol la....
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Tartışma
Biz burada nöronlar, sinirler ve spinal yolları içine boyalar tanıtılması için basit ve düşük maliyetli bir protokolü tanımlar. Bu yöntem, yükleme işlemi süresi için bir yüksek oranda konsantre boya çözeltisine tanımlanan anatomik yollar açığa içerir. Biraz arka plan bilgisi ile hedef sitenin retrograd etiketleme Bu sonuçlar microinjections, banyo uygulama ve elektroporasyon tekniklere nazaran. Bununla birlikte, bu yöntem, bir akson izole edilebilir yollarının sinir sisteminde siteleri ile sınırlıdır. Boya hücre gövd.......
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Açıklamalar
Biz ifşa hiçbir şey yok.
Teşekkürler
Bu çalışma, Ulusal Nörolojik Bozukluklar Enstitüleri ve Ulusal Sağlık Enstitüleri Strok intramural programı tarafından desteklenmiştir. Ayrıca yöntem ve Şekil 3'te verilere daha önceki katkıları için Dr George Mentis teşekkür etmek istiyorum.
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Malzemeler
Üç yollu Musluk
| Ad | Şirket | Katalog numarası | Yorumlar | |
|---|---|---|---|---|
| Malzeme Adı Şirket Katalog numarası Yorumlar | ||||
| Boru | PE90 (IDxOD: 0.034 "x0.050"; Duvar Kalınlığı: 0.008 ") | Clay Adams Marka Intermedic | 427.421 | Tip I ve Tip II pipetler için |
| NSF-51 (IDxOD: 1/16x1/8; Duvar Kalınlığı: 1/32) | PharMed BPT, Cole-Parmer | AY242002 | Esnek borular için | |
| Şırınga | 1ml insülin şırınga, U-100 | Becton Dickenson | 329.650 | |
| İğne | 19G x1-1/2 "Metal Hub İğne | MONOJECT | 200.136 | Şırıngaya Tip II pipet Bağlanması |
| Alkol Lamba | ||||
| Musluk | Baxter Healthcare Corp | 2C6241 | Şırınga ile kullanın | |
| Holder | H-1 elektrot tutucu | Narishige | H-1/12 | |
| Mıknatıs standı | Narishige | GJ-8 | ||
| Mikromanipülatör | Narishige | M-3333 | ||
| Cımbızlar | S & T DUMONT İsviçre 00.632-11 | DUMONT | JF-5 TC |
* Bu önerilen malzemelerdir. Herhangi bir uyumlu ürünler ile değiştirilebilir
Kaynaklar
- Nance, D. M., Burns, J. Fluorescent dextrans as sensitive anterograde neuroanatomical tracers: applications and pitfalls. Brain Res. Bull. 25, 139-145 (1990).
- Glover, J. C., Petursdottir, G., Jansen, J. K. Fluoresce....
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Yeniden basım ve izinler
