Method Article

Çoğaltma ve Beta Hücre Fonksiyonu değerlendirilmesi Adenovirally-transdük İzole Kemirgen Islets

DOI:

10.3791/4080

⸱

June 25th, 2012

 ,  ,  , 
1Department of Pediatrics, Indiana University School of Medicine, 2Department of Cellular & Integrative Physiology, Indiana University School of Medicine

In This Article

Summary

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Bu protokol bir diyabet tedavisi için terapötik hedefleri bulmak için işlevsel beta hücre kitlesi modüle faktörleri belirlemek sağlar. Protokolü adenovirüsler ile gen ekspresyon manipülasyonu takiben izole sıçan adacıklarında adacık çoğaltma ve beta hücre fonksiyonu değerlendirmek için modern bir yöntem oluşur.

Abstract

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Glikoz homeostazı, öncelikle, sırasıyla, pankreas beta ve alfa hücrelerden salgılanan, endokrin hormonlar insülin ve glukagon tarafından kontrol edilir. Fonksiyonel beta hücre kütlesi anatomik beta hücre kütlesi gibi bir besin yük yanıt beta hücrelerinin yeteneği ile belirlenir. Işlevsel beta hücre kitlesi kaybı diyabet 1-3 iki büyük formlar merkezidir. Tip 1 diyabetin otoimmün bir saldırı azalan işlevsel beta hücre kitlesi sonuçları ise, tip 2 diyabet, bu eksiltme uygun insülin salgılamaya beta hücrelerinin bir yetersizlik ve mekanizmalar bir kadro beta hücrelerinin yok hem de gelişir. Böylece, işlevsel beta hücre kitlesi geri çabaları daha iyi tedavi ve diyabet için potansiyel tedavileri için her şeyden vardır.

Çabaları çoğaltma teşvik ve beta hücrelerinin işlevini geliştirmek için kullanılabilir moleküler yolları belirlemek için çalışmalar devam etmektedir.İdeal olarak, tedavi hedefleri beta hücre büyümesi ve fonksiyonu hem de artıracak. Ancak belki de daha önemli beta hücre büyümesini uyarır bir strateji zedeleyen beta hücre fonksiyonu (bazı onkogenler olduğu gibi) ve tam tersi pahasına geliyor olmadığını belirlemektir.

Izole sıçan adacıklar hedef genlerin sistematik baskılayarak veya aşırı ifadesi olarak, bir artan işlevsel beta hücre kitlesi 4-6 için potansiyel tedavi hedefleri belirleyebilir. Adenoviral vektörler izole sıçan adacıklar 4,7-15 verimli olarak artmış veya demonte proteinlerine istihdam edilebilir. Burada, adenoviral transdüksiyon kullanarak gen ekspresyon işlemek ve izole sıçan adacıklar (Şekil 1) adacık çoğaltma ve beta hücre fonksiyonu değerlendirmek için bir yöntem sunuyoruz. Bu yöntem, beta hücre çoğaltma veya fonksiyon 5,6,8,9,16,17 modüle yeni hedefler belirlemek için daha önce kullanılmıştır.

Protocol

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

1. Sıçan Adacıklar ve adenoviral İletimi ve Kültürleme

  1. Gerekli sayıda ortam, 2 ml (8 mM glikoz,% 10 fetal bovin serumu, 50 ünite / ml penisilin ve 50 ug / ml streptomisin içeren RPMI 1640 ortamı) ilave edilerek bir 6-sıra non-doku kültürü plakası kaplamalı hazırlamak kuyu. No-virüsü kontrolü için tek her biri, bir virüs kontrolü (örn., GFP-eksprese adenovirüs) ve deney grubu - Örneğin, tipik bir deneyde, üç kuyu gerektirebilir.
  2. En azından 30 dakika için bir doku kültürü inkübatöründe yerleştirilerek 37 ° C ye ısınmasına plakası.
  3. Hemen 6-sıra dışı doku kültürü kaplı plaka bireysel kuyulara sıçan adacık izolasyonu 18,19, yerde ....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Discussion

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Çoğaltma teşvik ve beta hücrelerinin işlevini geliştirmek için modüle olabilir kurulması yollarının her iki diyabet büyük formlar alakalı. Işlevsel beta hücre kitlesi bu belirleyicileri değerlendirmek, insülin salgılayan hücrelerin varlığı ve fonksiyonu bağlı olduğundan aynı anda avantajları vardır. Bu protokolün bir proteini aşırı ekspresyonu ya da bastırma sonra in vivo etki için test edilebilir in vitro olarak fonksiyonel beta hücre kütlesi değişikliklere yol açar olmadığını belirlemek için düzenlen.......

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Disclosures

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Çıkar çatışması ilan etti.

Acknowledgements

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Bu çalışma NIH (PTF kadar) hibe DK078732 tarafından desteklenmiştir.

....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Materials

List of materials used in this article
NameCompanyCatalog NumberComments
Reaktif Adı Şirket Katalog numarası Yorumlar
RPMI 1640 ortamı Gibco 11879
Penisilin / streptomisin Gibco 15140
6-iyi plaka BD-Falcon 35-1146 Sigara TC tedavi
[Metil-3 H] timidin- Perkin Elmer NET027Z001MC 1 mCi / ml
Mikro-santrifüj tüpü Denville C2170 1.7 ml
NaCl Sigma 59888
KCl Acros 42409
KH 2 </ Sub> PO 4 Acros 20592
MgSO 4 Acros 41348
CaCI2 Acros 34961
HEPES Sigma H0887 1 M solüsyon
% 35 BSA Sigma A7979
NaHCO 3 Acros 42427
D-glukoz Sigma G8769
TCA Fisher Scientific SA9410-1 % 10 w / v
NaOH Acros 12426
Sintilasyon tüp sayma Sarstedt 58.536 7 ml, PP
Sintilasyon sayma tüp kap Sarstedt 65.816
Econo-Güvenli sayma kokteyl RPI 111175
İnsülin RIA Siemens TKIN2
BCA Test Kiti Thermo Scientific 23250
Ekipman
Santrifüj Eppendorf 5415R
Sintilasyon tüp raf sayma Sarstedt 93.1431.001
Sıvı sintilasyon sayacı Perkin Elmer Tri-Carb 2910TR

References

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Ferrannini, E. beta-Cell function in subjects spanning the range from normal glucose tolerance to overt diabetes: a new analysis. J. Clin. Endocrinol. Metab. 90, 493-500 (2005).
  2. Weyer, C., Bogardus, C., Mott, D. M., Pratley, R. E.

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Reprints and Permissions

Request permission to reuse the text or figures of this JoVE article

Request Permission

Tags

Beta Cell FunctionAdenoviral TransductionIsolated Rat IsletsInsulin Secretion AssayTritiated Thymidine IncorporationGlucose HomeostasisFunctional Beta Cell MassAdenoviral OverexpressionGene Expression ManipulationCell Replication Analysis

Related Articles