Yöntem makalesi

CD4 İzolasyon Miltenyi MACS Arıtma Fare lenf düğümleri + T hücreleri

DOI:

10.3791/409

⸱

1 Kasım 2007

 , 
1Department of Physiology and Biophysics, University of California, Irvine (UCI)

Bu makalede

Özet

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Miltenyi MAC kiti kullanılarak lenfositlerin İzolasyon tüm lenfoid doku homojenatlarında hücreleri arındırmak için güvenilir bir yol. Miltenyi sistemini kullanarak saflaştırılmış Hücreler genellikle ≥% 96 saf. Burada, CD4 + T hücreleri, Miltenyi tarafından sunulan birçok kitleri biri izole etmek için atılan adımları göstermektedir.

Özet

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Birincil kaynak hücrelerin izolasyonu çok daha karmaşık protokoller gerekli bir adımdır. Miltenyi, insanlar, insan olmayan primatlardan, sıçan ve biz burada açıklamak gibi, fare dahil olmak üzere çeşitli organizmalar hücreleri izole etmek için kitleri sunmaktadır. Pozitif seçimi (veya hücre kaybı) yanı sıra olumsuz seçim ya boncuk tabanlı Manyetik hücre ayırma sağlar. Burada, biz, bakir ya da na ve CD4 + yardımcı T hücreleri olumsuz seçim göstermektedir. Biz genellikle ≥% 96 saf CD4 + / CD3 + hücrelerden arındırmak bu standart protokolü kullanarak. Bu protokol, protokol Diseksiyon ve T hücreleri ve diğer hücre tipleri adoptively görüntüleme amaçlı transfer saflaştırılması, Jüpiter 7. sorunu yayınlanan Fare Periferik lenf düğümleri, 2-Foton Görüntüleme ile birlikte kullanılır. Bu protokol video FACS analiz göstermek olmasa da, son derece izole hücrelerinin FACS üzerinden uygun antikorları kullanarak genel saflığını kontrol etmek için tavsiye edilir. Buna ek olarak, T hücre izolasyonu steril olmayan bir yöntem gösterilmektedir. Eğer steril hücreleri belirli bir son kullanıcı uygulaması için gerekli olan, tüm doku kültürü kaputu göstermiştir prosedürleri standart steril koşullar altında yapmak istediğinizden emin olun. Kendi deneyleri ile izlemek ve iyi şans için teşekkür ederiz!

Protokol

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Lütfen okuyun ve uygulayın Miltenyi kiti veya çevrimiçi dahil protokol http://www.miltenyibiotec.com/ .

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Tartışma

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Birincil kaynak hücrelerin izolasyonu çok daha karmaşık protokoller gerekli bir adımdır. Miltenyi, insanlar, insan olmayan primatlardan, sıçan ve biz burada açıklamak gibi, fare dahil olmak üzere çeşitli organizmalar hücreleri izole etmek için kitleri sunmaktadır. Pozitif seçimi (veya hücre kaybı) yanı sıra olumsuz seçim ya boncuk tabanlı Manyetik hücre ayırma sağlar. Burada, biz, bakir ya da na ve CD4 + yardımcı T hücreleri olumsuz seçim göstermektedir. Biz genellikle ≥% 96 saf CD4 + / CD3 + hücrelerden arındırmak bu standart protokolü kul...

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Açıklamalar

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Yazarların beyan edilecek bir çıkar çatışması yoktur.

Teşekkürler

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Rebecca Paquett MACS tamponunun hazırlanması için teşekkür etmek istiyorum.

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Malzemeler

Bu makalede kullanılan malzemelerin listesi
AdŞirketKatalog numarasıYorumlar
MACS TamponuReaktifYokYokMiltenyi tarafından açıklanan şekilde hazırlayın.
CD4+ T Hücresi İzolasyon Kiti: Temas Etmemiş İzolasyonReaktifMiltenyi Biotec130-090-860Miltenyi sistemi ile kullanım içindir.
Steril Fosfat Tamponlu Salin (PBS)ReaktifMACS tamponu hazırlığında kullanım içindir.
Corning 35mm TC-İşlem Görmemiş Kültür KabıDiğerCorning430588Tek hücre süspansiyonu hazırlığında kullanılır.
70 mikron Hücre SüzgeciAraçBD Biosciences352350Tek hücre süspansiyonu hazırlığında kullanılır.
6 mL ŞırıngaAraçTyco Healthcare, Covidien8881516051Tek hücre süspansiyonu hazırlığında kullanılır.
10x Dulbecco’s Fosfat Tamponlu Salin (DPBS)ReaktifInvitrogen14200-075RBC lizisinde kullanım içindir.
Steril SuReaktifSigma-AldrichW4502RBC lizisinde kullanım içindir.

Kaynaklar

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Miller, M. J., Hejazi, A. S., Wei, S. H., Cahalan, M. D., Parker, I. T cell repertoire scanning is promoted by dynamic dendritic cell behavior and random T cell motility in the lymph node. Proc Natl Acad Sci U S A. 101, 998-1003 (2004).
  2. Matheu, M. P., Deane, J. A., Parker, I., Fruman, D. A., Cahalan, M. D. Class IA phosphoinositide 3-kinase modulates basal lymphocyte motility in the lymph node. J Immunol. 179, 2261-2269 (2007).

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Yeniden basım ve izinler

Bu JoVE makalesinin metnini veya şekillerini yeniden kullanmak için izin iste

İzin iste

Etiketler

Negatif SeleksiyonH cre zolasyonuManyetik Boncukla Ay rmaEritrosit LizisiTek H cre S spansiyonuLS KolonuAk Sitometrisi

İlgili makaleler