Bu protokol izolasyonu açıklar adipoz-türetilmiş lipoaspirate ve iskelet rejenerasyon değerlendirmek için 4 mm kritik ölçüdeki kalvaryal defekt oluşturmadan stromal hücreler.
Bu içeriği görüntülemek için JoVE aboneliğiniz gereklidir. Giriş yapın veya ücretsiz denemenizi bugün başlatın.
Yöntem makalesi
Lipoaspirate itibaren hasat Yağ kaynaklı stromal hücreler kullanarak Kritik ölçekli Kalvaryum Defekt Model tamiri
* These authors contributed equally
Bu makalede
Özet
Özet
Kraniyofasiyal iskelet onarımı ve yenilenmesi kök hücreleri kullanan bir hücre-temelli bir yaklaşım ile de novo doku oluşumu vaadi sunar. Yağ-kaynaklı stromal hücreler (TSK) osteojenik, kondrojenik adipojenik ve miyojenik farklılaşma geçiren yeteneğine multipotent kök hücrelerin bol bir kaynağı olduğu kanıtlanmıştır. Pek çok çalışma hücresel teslim için çeşitli yapı iskelesi biyomalzemelerin kullanımı ile in vivo olarak bu hücrelerin osteojenik potansiyel araştırdılar. Bu gibi olduğu gösterildi bir osteokondüktif, hidroksiapatit-kaplı poli (laktik-ko-glikolik asit) (PLGA-HA) TSK ile iskele tohumlu, bir kritik boyutlu kalvaryal kusur, kendiliğinden geçmesi için kendi yetersizlik ile tanımlanan bir bozukluk kullanılarak , hayvanın ömrü boyunca şifa etkili sağlam kemik rejenerasyon göstermek olabilir. Bu in vivo modelde kemik dokusu yenilenmesine yönelik translasyonel yaklaşım esas göstermektedir - hücreselbileşeni ve biyolojik matrisi. Bu yöntem, bir doku spesifik kusurun tamir yönelik bir projenitör hücre nihai klinik uygulama için bir model olarak hizmet vermektedir.
Protokol
1. Hücre İzolasyonu & Genişletme
- Tüm hastanın rızası ve deneysel protokolleri Stanford Üniversitesi Kurumsal İnceleme Kurulu (Protokol # 2188 ve # 9999) tarafından gözden geçirilmiş ve onaylanmıştır.
- Genel / lokal anestezi altında elektif lipoaspiration prosedürlerden İnsan subkutanöz adipoz dokusu elde edilir.
- Lipoaspirate iki kat (Şekil 1A) olacaktır. Süpernatant işlenmiş hücresel malzemenin büyük bir çoğunluğu içerir. Alt tabaka daha çok tabaka ya da stromal hücreler hasat edilebilir Yağ-türetilmiştir. Salin enjekte, ancak verimi üstte yüzen madde gelen çok daha büyük olmasıdır.
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Tartışma
Ve izolasyonu yağ olarak türetilmiş lipoaspirate dan stromal hücreleri 2, bu hücrelerin hücre soylarının çeşitli ayrışmıştır edilmiştir. Yağ dokusu mezodermal kökenlerden gelen ve bu nedenle, multipotent adipoz-kaynaklı stromal hücrelerin büyük olasılıkla bir mezodermal soy doğru uygulama ile en etkili olacaktır. İskelet doku oluşturmak için yeteneği verici bir otogreft için siteleri ve enfeksiyon, rejeksiyon ve zaman üzerinde 3 arızaları dahil sentetik malzemenin doğal sınırlamaları sıkıntısı veri.......
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Açıklamalar
Çıkar çatışması ilan etti.
Teşekkürler
Biz araştırma verdikleri destek ve işbirliği için Dr George Avam ve Dr Dean Vistnes teşekkür etmek istiyorum. Saint Joseph Mercy Hastane GME tarafından desteklenen bu çalışma Diş ve Kraniofasial Araştırma hibeleri 1 R21 DE019274-01, R01EB009689 ve RC2 DE020771-02, MTL Dr Hyun Pediatrik Rejeneratif Tıp Oak Vakfı ve Hagey Laboratuvarı Ulusal Enstitüsü tarafından desteklenmektedir .
....Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Malzemeler
| Ad | Şirket | Katalog numarası | Yorumlar |
|---|---|---|---|
| Reaktif Adı: | Şirket | Katalog numarası | Yorumlar (isteğe bağlı) |
| Hasat Lipoaspirate | |||
| PBS | Gibco | 10010-023 | |
| Hank Dengeli Tuz Çözeltisi | Cellgro | 21-023-CV | |
| Kollajenaz | Sigma | C6885-500MG | |
| Hücre Süzgeç 100 mikron | BD Falcon | 352360 | |
| Steri-500 ml .22 mikron filtre | Millipore | SCGPT05RE | |
| Kalvaryum Kusur | |||
| Z500 Fırçasız MicromotorsUM50C | NSK | NSKZ500 | |
| Dairesel Bıçak 4,0 mm | Xemax Cerrahi | CK40 |
Kaynaklar
- Levi, B., James, A. W., Nelson, E. R. Human adipose-derived stromal cells heal critical size mouse calvarial defect. PLoS One. 5, (2010).
- Zuk, P. A., Zhu, M., Ashjia, P. Human adipose tissue is a source of multipotent stem cells. Mol. Biol. Cell. 13, 42....
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Yeniden basım ve izinler
