Sıçan Böbrek Nakli sonra Akut Allogreft Reddi non-invaziv Görüntüleme Kullanımı<sup&gt; 18</sup&gt; F-FDG PET

Alexander Grabner; Dominik Kentrup; Uta Schnöckel; Gert Gabriëls; Rita Schröter; Hermann Pavenstädt; Otmar Schober; Eberhard Schlatter; Michael Schäfers; Stefan Reuter

doi:10.3791/4240

Bu içeriği görüntülemek için JoVE aboneliğiniz gereklidir. Giriş yapın veya ücretsiz denemenizi bugün başlatın.

Yöntem makalesi

Sıçan Böbrek Nakli sonra Akut Allogreft Reddi non-invaziv Görüntüleme Kullanımı

16.5K görüntülenme

⸱

DOI:

10.3791/4240

⸱

28 Nisan 2013

Alexander Grabner^*¹ , Dominik Kentrup^*¹ , Uta Schnöckel² , Gert Gabriëls¹ , Rita Schröter¹ , Hermann Pavenstädt¹ , Otmar Schober² , Eberhard Schlatter¹ , Michael Schäfers^*³ , Stefan Reuter^*¹

¹Department of Internal Medicine D, Experimental Nephrology, University of Münster, ²Department of Nuclear Medicine, University of Münster, ³European Institute for Molecular Imaging, University of Münster

^* These authors contributed equally

Bu makalede

Özet

Biz burada non-invaziv 18F-florodeoksiglukoz ile pozitron emisyon tomografisi kullanılarak akut allogreft reddi değerlendirmek için bir sıçan böbrek nakli modeli sunuyoruz.

Özet

Son dönem böbrek hastalığı olan hasta sayısı ve böbrek allogreft alıcı sayısı sürekli artmaktadır. Akut hücresel allogreft rejeksiyon (AR) atakları uzun süreli allogreft hayatta kalmak için olumsuz bir prognostik faktördür, ve zamanında tanı allogreft fonksiyonu ¹ için çok önemlidir. Şu anda, AR sadece kesinlikle invaziv bir yöntem olarak, greft yaralanmaya ve hatta kaybı önemli bir risk bares, çekirdek iğne biyopsisi ile teşhis edilebilir. Ayrıca, biyopsi AR odak veya yamalı ise yanlış negatif sonuçlar neden olabilir antikoagülan ilaçlar ve bu tekniğin sınırlı örnekleme sitesi alan hastalarda mümkün değildir. Bunun bir sonucu olarak, bu genellikle çeşitli nakil modellerin kullanımı da dahil olmak üzere hayvanlarda yapılması gereken yeni AR tespit yöntemleri için süregelen bir araştırma yol açtı.

60'lı sıçan böbrek nakli Examin için köklü bir deneysel yöntem olduğu içinAR ² tirme ve analizi. Ayrıca küçük hayvan pozitron emisyon tomografisi (PET) allojenik uninephrectomized sıçan böbrek nakli modelinde AR değerlendirmek ve bir non-invaziv, özel için yeni bir seçenek olarak greft FDG-PET görüntüleme teklif ¹⁸ F-florodeoksiglukoz (FDG) kullanarak Biz burada mevcut insan durum ³ için de AR ve erken tanı. Ayrıca, bu yöntem, transplant reddi ⁴ ölçümünün düzeltilmesi için takibi için uygulanabilir.

Protokol

1. Donör Organ Kurtarma

Stereotaktik mikroskop, 8-10 haftalık sıçan (verici ve alıcı vücut ağırlığı aynı olmalıdır) rekor ağırlık ayarlayın.
Donör sıçan (Lewis Brown Norveç F1, İbni F1) oksijen / izofluran inhalasyon (izofluran% 4/2 L / dk oksijen) kullanarak anestezisi. 2-2.5% için izofluran düşürerek anestezi koruyun.
Ameliyat yastığı anestezi sıçan yerleştirin. Ped üzerine yapışkan bant ile sıçan ekstremite düzeltmek ve sıçan gözleri oftalmik merhem (Bepanthen, Bayer) geçerlidir.
Tıraş ve sıçan karın dezenfekte ve pubis gelen karaciğer kaudal sınırına bir ventral orta hat kesi yapmak. Dikkatli bir şekilde sağ tarafa bağırsak hareket ettirerek sol böbrek ve damarları Açığa. Sol böbrek üzerinde gazlı bez ince bir tabaka yerleştirin ve kuruma önlemek için ısıtılmış izotonik serum fizyolojik ile nemlendirin.
Dikkatle (Dumont Açılı İpucu Forseps ile yağ dokusu incelemek Dumont SS-45 Forseps Inox Tıp, Güzel Bilim Araçları, Sip 11203-25) sol üreter saran. Üreter ile doğrudan temastan kaçının, bunun yerine, yeterli çevre yağ dokusu ile seferber.
Dumont Açılı İpucu forseps kullanarak renal arter sol renal ven ayırın. Her iki gemi tüm yağ ve bağ dokusu çıkarın ve adrenal ve testis damarları dağlamak.
Sırasıyla, sol renal arter ve ven yukarıda ve kavşak altında aorta ve inferior vena kava (IVC) incelemek ve tüm giden arterler dağlamak.
Superior mezenterik arter yakın mümkün olduğunca, sol renal arter üzerinde bir mikrocerrahi kelepçe (Mikro Serrefines, Güzel Bilim Araçları, Sip 18055-04) ile böbreküstü aort Kelepçe. Cerrahi ipek kullanarak infrarenal aorta (5-0, Vömel, sanat yok. 14739) sol renal arter altında yaklaşık 5 mm Arter.
Cerrahi ipek ile infrarenal IVC (5-0, Vömel) Arter ve böbreküstü IVC kelepçebir mikrocerrahi kelepçe ile (Mikro Serrefines, Güzel Bilim Araçları, Sip 18055-03).
Ince makas (- ToughCut Düz 11.5 cm, Güzel Bilim Araçları, Sip 14058-11 Iris Makas) kullanarak mümkün olduğunca yakın IVC için renal ven kesin.
Yavaş yavaş ekleyerek 2 ml buz gibi soğuk HTK perfüzyon solüsyonu (CUSTODIOL HTK, Dr Franz Köhler Chemie) ile yerinde böbrek serpmek bir kanül (Microlance 3 27G ¾, BD, Sip 302.200) infrarenal aort. Onaylayın böbrek renk değişiklikleri (şimdi zeytin renkli).
İlk olarak, daha sonra, infrarenal aorta böbreküstü aort transect ve mümkün olduğunca yakın mesane nihayet üreter.
Buz üzerinde HTK perfüzyon çözüm üreter ve mağaza ile birlikte böbrek ve damar kaynağını çıkarın.
Vasküler kelepçeler ve anestezi altında kalbin üst üste eksizyon kaldırarak donör sıçan Euthanize.

2. Alıcı hazırlanması ve naklition

Stereotaktik mikroskop, sıçan rekor ağırlık ayarlayın.
Izofluran% 4 ile alıcı sıçan (Lewis) anestezisi. 2-2.5% için izofluran düşürerek anestezi koruyun.
Ameliyat yastığı anestezi sıçan yerleştirin. Ped üzerine yapışkan bant ile sıçan ekstremite düzeltmek ve sıçan `ın Gözleri oftalmik merhem uygulayın. Bir rektal sıcaklık sensörü ve bir ısınma takımını kullanarak Monitör ve kontrol çekirdek vücut sıcaklığı. Ameliyat sırasında tekrar tekrar sıcaklık, solunum ve hayvanın kalp hızı kontrol.
Tıraş ve karın dezenfekte ve pubis gelen karaciğer kaudal sınırına bir ventral orta hat kesi yapmak. Deri travma en aza indirmek için bir neşter forcutting deri kullanın. Sağ tarafa bağırsak hareket ettirerek sol böbrek ve damarları Açığa.
Dikkatle Dumont Açılı İpucu forseps ve pamuklu kullanarak böbrek kapsülü kaldırın.
Böbrek yakın sol renal arter, ven ve üreter tıkamakcerrahi iplik (4-0 Mersilen, Ethicon, kedi. yok. EH6732H) kullanarak iki ligasyonu ile hilusu. Sadece böbrek hilusu bırakarak böbrek tüketim büyük bir kısmı,. Pamuklu çubukla kesim yüzeyi temiz ve kanama kontrol edin. Gerekirse başka bir bağ ekleyin.
Dikkatlice pamuklu çubukla kuyruk sitede infrarenal aorta ve vena kava kapsayan bağ dokusu ile açık açık incelemek.
Dumont Açılı İpucu forseps kullanarak infrarenal aorta ve vena kava herhangi bir görünür sinir ayırın.
İlk testis damarlarının dallanma altında ve ortak iliak damarların dallanma Yukarıdaki ikinci bir: dikkatlice iki 2-4 mm uzunlukta açıklıklar oluşturan, infrarenal aort ve vena kava arasındaki bağ dokusu sayfası aracılığıyla incelemek. Arasında iliolumbar arter ve venler dağlamak.
Iki açıklık her ile, tek bir cerrahi iplik (Ethicon, kedi no.EH6665E. Mersilen 0) çizin. Bu konuları infrarenal çekin kullanmahafifçe dorsal sitede dallanma gemilere erişmek için hayvanın sağ tarafına aort ve vena kava. Iki açıklık arasında bu kapların her yakmak ve daha sonra cerrahi konuları çıkarın.
Daha sonra, aort ile üst açılışında başlayan ve üst açılış (Mikro Serrefines de vena kava ile biten dört mikrocerrahi kelepçeleri (Mikro Serrefines, Güzel Bilim Araçları, Sip 18055-04) saat yönünde uygulama tarafından aorta ve IVC tıkamak , Güzel Bilim Araçları, Sip 18055-03).
Daha sonra dikkatli bir şekilde delmek bir iğne ile aort izole kısmının üst biten (Microlance 3 27G ¾, BD, Sip 302.200), ince bir yay makas (Vannas Bahar Makas alt bıçak takın - 3 mm Bıçak, Güzel Bilim delinme açıklıktan Araçları, cat.no 15000-00) ve kısa boyuna kesi yapmak. Herhangi bir geri kalan kan kaldırmak için buz soğukluğunda HTK perfüzyon çözeltisi ile izole aort yıkayın.
Aynı şekilde, dikkatli bir şekilde delmekbir iğne ile vena kava izole kısmının alt biten, delinme açıklıktan ince bir bahar makas alt bıçak yerleştirin ve kısa bir süre aort kesi altında biten uzunlamasına bir kesi yapmak. Yine, kalan kan kaldırmak için gemi yıkayın.
Depolama çözümü gelen böbrek greft çıkarın. Sol böbrek eski konumunu altına yerleştirin ve doğru yönde olduğundan emin olun.
Greft renal arter yönünü kontrol edin ve herhangi bir bükülme olmadığından emin olmak. Daha sonra greft üzerine gazlı bez ince bir sayfa koyun ve soğumaya buz HTK perfüzyon çözümü ile nemlendirin ve kuruma önlemek için.
Üst ilk önce, daha sonra alt ucunda - greft renal arter cerrahi iplik (.. Ethilon 9-0, Ethicon, kedi hiçbir 2809G) ile içine açıldığı aort parçasının suprarenal kısmının açılması sabitleştirmek aort insizyon yapıldı. Cerrahi iplik kullanarak sürekli bir dikiş ile saat yönünde kesi kapatın(Ethilon 9-0), Dumont Açılı İpucu forseps ve kavisli bir Castroviejo iğne tutucu (Güzel Bilim Araçları, kedi. Yok. 12061-01). Daha sonra, bir saatin ikinci sürekli dikiş ile bağ dokusu ile ilk dikiş kapsamaktadır. Şimdi, greft aort parçasının sadece alt kısmı kapalı kalır. Düzenli buz HTK perfüzyon çözeltisi ile greft serin.
Dikiş sızdırmazlık ve bütünlüğünü doğrulamak yanı sıra, greft kalan kan kaldırma aort greft parçasının açık olan ucuna takılan, kör bir iğne ile buz soğukluğunda HTK perfüzyon çözeltisi 1 ml greft serpmek. Daha sonra, cerrahi ipek ile aort parçası (5-0, Vömel) açık olan ucuna ligate.
Greft renal ven yönünü kontrol edin ve herhangi bir bükülme olmadığından emin olmak.
Vena kava de kesi alt ucunda sonra, üst birinci - cerrahi diş (Ethilon 9-0) ile greft damarın açılması sabitleşmek. Kesi kapatıncerrahi iplik (Ethilon 9-0), Dumont Açılı İpucu forseps ve kavisli bir Castroviejo iğne tutucu kullanarak sürekli bir dikiş ile saat yönünde. Düzenli buz HTK perfüzyon çözeltisi ile greft serin.
En üst vena kava kelepçe ile başlayan, mikrocerrahi kelepçeleri sökün tersine. Son aort kelepçe çıkardıktan sonra, dikkatlice pamuklu çubukla sonunda hafif kanamayı durdurmak. Birkaç saniye sonra greft pembe renkli dönecek ve uretric kasılmaları görünmelidir.
Alıcı `nın mesane içine greft üreter ekleme dikkatli bir Vannas Bahar Makas (Öğrenci Vannas Bahar Makas düz, Güzel Bilim Araçları, Sip 91500-09 kullanarak mesane üstündeki kas küçük bir düzeltme ekini kaldırmak için .) Daha sonra, Dumont Açılı İpucu forseps kullanarak greft üreter çevreleyen doku (çoğunlukla yağ) çıkarın. Bu nedenle, dikkatle üreter ucu kapmak ve yavaşça çevreleyen yağ, bağ dokusu ayrı ve gömülü gemileri sağa solaters yönde çekerek bunu m. Bir cerrahi iplik (Prolen 6-0, Ethicon, kedi. Yok. 8697H) sonunda uretric ucu sabitleşmek ve ekli iğne ile mesane önceden hazırlanmış üst perfore. Mesane ile üreter çekin ve ikinci bir perforasyon ile tabanında bunu çıkın.
Cerrahi iplik (Ethilon 9-0) ile mesane üstündeki doku ayrılmış üreter gelen daha önce sabitleşmek. Ekli cerrahi iplik ile üreter ucu kesilmiş ve hafifçe aşağıdan iterek mesane içine geri üreter çekin. Daha sonra, cerrahi iplik (Ethilon 9-0) ile ikinci mesane delinme kapatın.
Cerrahi dikiş ipliğinin (Mersilen 0) kullanarak iki sürekli ama ayrı dikişlerle karın duvarı ve cilt kapatın. Pividon İyot kullanarak yara dezenfekte ve yara ağrı kontrolü için ameliyat sonrası üç gün buprenorfin (kg / BW / teklif başına 0.1 mg) sc yönetmek.

3. Görüntüleme Allogreft Reddetme

Izofluran 2-2.5% kullanarak Tokluk sıçan anestezisi.
30 MBq FDG (0.1 ila 30 MBq FDG ml% 0.9 NaCl), bir 24 G kateter (Braun, Introcan, 4.252.500-01) kullanılarak, yanal kuyruk damarı yoluyla kateterizasyonu IV tatbik edilir. Daha sonra, 0.9 ml% 0.9 NaCl çözeltisi ile kateter tasfiye.
Saatte% 0.9 NaCl çözeltisi, 1 ml IV enjeksiyonu ile tarama ve hidrat da hayvan başlangıcına kadar anestezi olmadan bir süzgeç, sıçan bırakın.
Tarama başlamadan önce hemen izofluran% 2 kullanılarak yeniden anestezisi sıçan.
Yüksek çözünürlükte anestezi sıçan yerleştirin çok telli oda-tabanlı hayvan PET kamera quadHIDAC (Oxford Pozitron Systems Ltd, Oxford, UK). PET tarayıcı uzaysal çözünürlüğü 1,0 mm ve tüm FOV (çap, 165 mm; aksiyel uzunluk, 280 mm) üzerinde sabittir. Bir pulse oksimetre ile bir rektal sıcaklık sensörü ve kontrol anestezi kullanarak tarama sırasında Monitör ve kontrol vücut ısısı.
60 m için dinamik satın alma başlayınFDG böbrek atılımı nedeniyle böbreklerde izleyici birikimini azaltmak için FDG-enjeksiyon sonrası 180 dakika başlangıç.
Renal parankim belirlenmesi için ve ¹⁸ F-boşluk ⁵ hesaplanması için tarayıcı içinde sıçan konumunu taşımadan ¹⁸ F-florür iv 5 MBq uygulayın ve 60 dakika hemen sonra ¹⁸ F-florür enjeksiyon başka bir PET taraması gerçekleştirin. Her iki tarama görüntüleri yeniden. 2 dakika böbrek korteks yaklaşık ¹⁸ F-florür enjeksiyon (perfüzyon-faz) sonra yeniden görüntülerde elle ilgi hacmi (VOI) iz ve FDG görüntülere VOI aktarın. Dikkatlice VOI gelen renal pelvis dahil değildir. Her iki tarama görüntüleri yeniden ve elle böbrek korteks çevresinde ilgi bir hacim (VOI) iz. Listesi mod veri 0.4 × 0.4 × 0.4 mm ³ bir voksel boyutu ile görüntü içine yeniden inşa edildi. Dikkatlice VOI gelen renal pelvis dahil değildir.
Oranı o tarafından FDG tutulumu hesaplamakf toplam sayısı ve hacmi ve enjekte doz (% ID) yüzdesini hesaplar. Biz görüntü analizi için MATLAB (Sürüm R2011b, MathWorks, Natick, MA, ABD) ve tomografik görüntüleme (TİM) Sürüm 2.8 kullanılır.