Kolajen VII 200 amino asit (aa 757-967) bir streç karşı IgG antikorları saflaştırılmış, bugünkü iş tarif hayvan modelinde kabarma fenotipi yanı sıra insan için karakteristik histolojik ve immunopatolojik özellikleri üreten farelere sürekli enjekte edilir epidermolizis bülloza (EBA) 1.
Bu içeriği görüntülemek için JoVE aboneliğiniz gereklidir. Giriş yapın veya ücretsiz denemenizi bugün başlatın.
Yöntem makalesi
Granülosit-bağımlı otoantikor indüklenen Cilt Kabarcıklanma
Bu makalede
Özet
Özet
Otoimmün fenomenler sağlıklı bireylerde ortaya, ama öz-hoşgörü başarısız olduğunda, otoimmün yanıtı spesifik bir patoloji neden olabilir. Göre Witebsky sitesi, otoimmün bir hastalık tanısında kullanılan kriterlerden biri önermeleri otoantikorların pasif transferi ile deney hayvanlarında hastalık üreme olduğunu. Epidermolizis için bülloza (EBA), deri ve mukoza bir prototipi organ-spesifik otoimmün hastalık, çeşitli deneysel modeller yakın zamanda kuruldu. Kolajen VII 200 amino asit (aa 757-967) bir streç karşı IgG antikorları saflaştırılmış, bugünkü iş tarif hayvan modelinde kabarma fenotipi yanı sıra insan için karakteristik histolojik ve immunopatolojik özellikleri üreten farelere sürekli enjekte edilir İTÇ 1. Tam teşekküllü bir yaygın hastalık genellikle ilk enjeksiyondan sonra 5-6 gün görülen ve hastalığın yaygınlığını yönetilen c dozu ile ilişkilidir edilirollagen VII-spesifik IgG. Deneysel EBA doku hasarı (kabarcık oluşumu) -4 doku bağlı otoantikorlar 2 ile granülosit alımı ve aktivasyon bağlıdır. Örnek efferent otoimmün tepki sadece T hücre-bağımsız bir faz üretir Bu nedenle, bu model, otoimmün doku hasarına neden granülosit-bağımlı enflamatuvar yolunun diseksiyon sağlar. Ayrıca, değeri in vivo otoantikorların blister uyaran potansiyelini gösteren ve İTÇ 1,3, -6 yılında blister oluşumu mekanizması araştıran çok sayıda çalışma tarafından belirlenmektedir. Son olarak, bu model oldukça otoantikor kaynaklı hastalıklarda yeni bir anti-inflamatuar tedavilerin geliştirilmesini kolaylaştıracaktır. Genel olarak, İTÇ pasif transfer hayvan modeli, erişilebilir ve öğretici hastalık modeli ve araştırmacılar İTÇ patogenezi sadece analiz etmek değil, temel biyolojik ve klinik cevap yardımcı olacakesansiyel otoimmünite sorular.
Protokol
1. Patojenik antikorun hazırlanması
Not: antikorlar gece boyunca 0.1 M glisin pH 2.5-3 (elüsyon tampon) (ON) saklanan olmamak gibi Saflaştırılması ve antikor konsantrasyonu, aynı gün yapılmalıdır.
IgG Affinity saflaştırılması: Bağışıklık tavşan serumu 25 ml kullanın:
- 4. ON tavşan serumu çözülme ° C, 20 ° C de 1xPBS (tampon çalıştıran) ile 1:1 Karışım, 10 dakika boyunca 1260 x g de santrifüjlenir İsteğe bağlı olarak, filtre kağıdı ile filtre adım serum yağ olması durumunda santrifüj sonrası dahil olabilir.
- Bu arada, G matrisi 1XPBS (tampon) çalışan 10 yatak hacmi (yatak hacmi = matriks hacm....
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Sonuçlar
Klinik, histolojik ve immunopatolojik düzeyde insan İTÇ benzeyen farelerde tam şişmiş bir hastalık spesifik antijen antikor sonuçları, pasif transfer. Kabarcıklar, kabuklar, erozyonlar ve alopesi kulakları, burunları, pençeleri, bacaklar, sırt ve farelerin göz etrafında gelişir. Hastalığın ilk klinik bulguların muhtemelen kulak ve / veya kafa alanı görünecektir. Belirli tavşan IgG ve fare kompleman C3 çökelmesi IF perilezyonel deri cryosections içinde dermal epidermal bileşkede doğrudan tarafından tespit edilir. Lezyond.......
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Tartışma
Deney hayvanlarının içine otoantikorların pasif transfer onların patojenite 7, -12 göstermek için önemli bir yaklaşımdır. Bu yöntemle elde edilen hayvan modelleri üzerinde, otoimmünite 13 için dolaylı kanıt olmanın yanı sıra, patojenik mekanizmasının efferent faz inceleme sağlar. Epidermolizis bülloza (EBA) ve kabarma antikorun neden granülosit-bağımlı cilt pasif transfer modeli otoimmün dermatozlarda doku hasarının mekanizmaları incelemek için kullanılmıştır. Biliyorsunuz kolajen VII karşı otoimmü.......
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Açıklamalar
Çıkar çatışması ilan etti.
Teşekkürler
Yazarlar Freiburg Üniversitesi (CS) Tıp Fakültesi Deutsche Forschungsgemeinschaft SI-1281/4-1 ve BIOS'lar hibeleri ile destek için minnettarım.
....Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Malzemeler
| Ad | Şirket | Katalog numarası | Yorumlar |
|---|---|---|---|
| Reaktif Adı | Şirket | Katalog numarası | Yorumlar |
| rekombinant antijen | Mürin kolajen VII rekombinant biçimleri için kodlayan plasmidin karşılık gelen yazar temin edilebilir. | ||
| immun tavşan serumu | www.eurogentec.com | Biz antijen 200 mikrogram, 2 haftalık aralıklarla 3 kez ile immünize Beyaz Yeni Zelanda tavşan vardı. Bu amaçla Eurogentec SA, Belçika hizmetleri kullandık. | |
| Protein A agaroz | Roche Uygulamalı Bilimler | 11243233001 | |
| Balb / c fareleri | Charles River Laboratories | ||
| Ekim bileşik, Tissue-Tek | Sakura Finetek | 4583 | OCT, optimum kesim sıcaklık |
| Cryomold standart | Sakura Finetek | 4557 | 25 mm × 20 mm × 5 mm |
| Cryomold ara | Sakura Finetek | 4566 | 15 mm × 15 mm × 5 mm |
| Uni-Link-Einbettkassette | R. Langenbrinck | 09-0503 | Histoloji işleme ve gömme kasetleri |
| Spezial-Tatowierfarbe Schwarz | H. Hauptnerund & Richard Herberholz GmbH & Co KG | 71492000 | yapıştırma dövme |
| Tatowierzange TZ1 | EBECO E. Becker & Co GmbH | Cihaz dövme | |
| Heparin | Carl Roth GmbH & Co | 7692.1 | |
| Formaldehit% 37 | Carl Roth GmbH & Co | 7386 | |
| Ketamin hidroklorür | Sigma-Aldrich Chemie GmbH | K2753-1G | |
| Ksilazin hidroklorür | Sigma-Aldrich Chemie GmbH | X1251-1G | |
| steril PBS | Biochrom | L182-50 | |
| dijital fotoğraf makinesi | Nikon | Coolpix 5400 | |
| Şırınga filtre ünitesi 0.45 mikron tahrik | Millipore | ||
| Kaliper | Mitutoyo 7309 | 1667338 | Farnell (distribütör) |
| hastalığı puanlama sac | Örneğin enclosed |
Kaynaklar
- Sitaru, C., Mihai, S., Otto, C., Chiriac, M. T., Hausser, I., Dotterweich, B. Induction of dermal-epidermal separation in mice by passive transfer of antibodies specific to type VII collagen. J. Clin. Invest. 115, 870-878 (2005).
- Kopecki, Z., Arkell, R. M., Strudwick, X. L., Hirose, M., Ludwig, R. J., Kern, J. S.
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Yeniden basım ve izinler
