$$\rightleftharpoonup{xx}$$
$$\longleftharp{xx}$$,
$$\longrightharp{xx}$$,
Birkaç doğal olarak meydana gelen plazmid, memeli hücrelerinde muhafaza edilir. Bunlar arasında çok sayıda insan maligniteleri 1-3 neden Epstein-Barr virüsü (EBV) ve Kaposi sarkomu-ilişkili herpes (KSHV) dahil gama-herpesvirüslerinkiler genomlar vardır. Bu iki genom onların eksik geleneksel sentromer 4-8 rağmen lisanslı bir şekilde, tek bir viral protein ve hücresel replikasyon makine kullanarak her çoğaltılır ve hücre bölünmesi sırasında yavru hücrelere iletilir.
Çok iş gibi Southern blot ve in situ hibridizasyon (FISH) floresans gibi yöntemler kullanarak bu plazmid genomların tekrarlamalı karakterize etmek için yapılmıştır. Bu yöntemler, yine de sınırlıdır. Kantitatif PCR ve Southern blot hücrelerinin bir nüfus hücre başına plazmid ortalama sayısı hakkında bilgi verir. BALIK ortalama sayı ve plazmid dağılım hem de ortaya çıkaran bir tek hücreli bir testtir ancak hücre popülasyonunda s hücre başına incelendiğinde hücrenin ebeveyni veya soyu hakkında hiçbir bilgi sağlayan, statik.
Burada, canlı hücrelere plazmid görselleştirmek için bir yöntem açıklanmaktadır. Bu yöntem, ilgi 9 plazmid içinde çoklu sitelere karşı bir fluoresan etiketli laktoz repressör protein bağlayıcı esas alınmaktadır. Ilgi DNA laktoz operatörü (Laço) dizisinin yaklaşık 250 tandem tekrarlar dahil tasarlanmıştır. Laco özellikle bir floresan protein oluşturacak şekilde eklenebilir laktoz repressör proteini (Software) ile bağlıdır. Füzyon proteini ya da işlenmiş plazmid veya bir retroviral vektör tarafından piyasaya eksprese edilebilir. Bu şekilde, DNA molekülleri floresan etiketlendi ve bu nedenle floresan mikroskobu yolu ile görünür hale gelir. Plazmitler görüntülenmesi için hazır olana kadar füzyon proteini IPTG varlığında hücreleri kültür tarafından plazmid DNA bağlanmasını bloke edilir. ontent "> Bu sistem, plazmidler, birçok nesil boyunca canlı hücreler sentezi özelliklerini açığa ve yavru hücrelere bölünmesi olarak takip edilmesine olanak sağlamaktadır. ideal hücreler yapışık olan, kolaylıkla transfekte edilen ve büyük çekirdekler sahiptir. Bu teknik belirlemek için kullanılmıştır ki EBV-türetilmiş plazmidler,% 84 her bir üretim sentezlenmiş ve yeni sentez edilmiş plazmid bölme% 88 sadakatle HeLa hücreleri içinde yavru hücrelere. EBV, bu plasmidlerin çiftleri olarak sentez sonra için gergin veya kardeş kromatid ile ilişkili olduğu görüldü S- Onlar Anafaz 10 ayrılan kardeş kromatidler olarak ayırmak görüldü kadar faz. yöntem şu anda HeLa hücreleri ve SLK hücrelerinde KSHV genomlarının replikasyonu incelemek için kullanılmaktadır. HeLa hücreler insan epitel hücreleri ölümsüzleştirdi vardır, ve SLK hücreleri ölümsüzleştirdi endotel insan hücreler. SLK hücreler başlangıçta KSHV lezyon türetilmiş olmasına rağmen, HeLa ne SLK hücre hattı ne doğal harbors KSHV genomu 11. Viral replikasyon okuyan ek olarak, bu görüntüleme tekniği ayrıca, kaldırma ya da sentez, lokalizasyon, ve diğer rekombinant plazmit DNA bölünmesi ile ilgili çeşitli DNA sekansı elemanların mutasyon etkilerini araştırmak için kullanılabilir.