$$\rightleftharpoonup{xx}$$
$$\longleftharp{xx}$$,
$$\longrightharp{xx}$$,
Örneğin kalp, beyin ve bağırsak gibi iç organların normal işlevleri 1 için kritik olan sol-sağ (LR) asimetriler gelişebilir. Hareketli kirpikler fare, kurbağa, ve zebrafish 2-6 gibi omurgalı embriyolarının, LR asimetrisi kurma katılmaktadırlar. Bu 'LR kirpikler' organları 7 geliştirmek için LR desenlendirme bilgi sağlamak için düşünülmektedir sol lateral plaka mezoderm olarak kaskad sinyalizasyon korunmuş bir asimetrik Nodal (TGF-β süperailesi), tetiklemek için gerekli olan asimetrik akış oluşturur. Böylece, LR desenlendirme yatan mekanizmaları anlamak için, LR kirpikli hücrelerin organizasyonu, LR kirpikler ve sağlam asimetrik akış oluşturmak için yeteneklerini motilite ve uzunluğu düzenleyen genleri tanımlamak için gereklidir.
Zebrafish embriyo olarak, LR kirpikler 2,4,5 Kupffer en vesikül (KV) yer almaktadır. KV monociliated epitel hücreleri, tek bir tabaka oluşurBir sıvı dolu lümen içine aldığınız. Fate eşleme KV epiboly aşamaları sırasında 8,9 dorsal blastoderm kenar az göç dorsal haberci hücreleri (DFCS) olarak bilinen ~ 20-30 bir grup hücre elde edilir olduğunu göstermiştir. Erken somite aşamalarında, DFCS küme ve kirpikli epitel hücreleri içine ayırt embriyonun 10,11 tailbud KV oluşturur. Belirlemek ve izlemek için yeteneği DFCS-kombinasyon optik şeffaflık ve zebrafish KV LR kirpikli hücreleri incelemek için mükemmel bir model sistem embriyo-make zebrafish hızla gelişmesi ile.
İlginçtir, DFC / KV hücre soyunun ataları 4 saat sonrası fertilizasyon (HPF) ile sarısı hücresi arasındaki sitoplazmik köprüler kadar korumak, 2 hpf 8 sonrası yakın sarısı hücre ve diğer embriyonik hücreler arasında sitoplazmik köprüler oysa. Bu sitoplazmik köprü yararlanan biz morfolino oligonucle sunmak için bir sahne özgü enjeksiyon stratejisi geliştirdiDFCS ve devirme bu hücreler 12 bir hedef genin işlevi sadece otides (MO). Bu teknik, gen fonksiyonunun bir vahşi-tip embriyo bağlamında gelişen DFC / KV soy nakavt edildiği kimerik embriyolar oluşturur. KV asimetrik akış analiz etmek, biz KV lümeni ve videomicroscopy 2 kullanarak kayıt boncuk hareketin içine floresan mikroboncukları enjekte. Akışkan akışı kolaylıkla görülebilmektedir ve zamanla boncuk yerinden izleme ile belirlenebilir.
Burada sahne özgü DFC hedefli gen Knockdown tekniği ve akış görselleştirmek için KV içine floresan mikroboncuk enjeksiyon kullanılarak, biz KV gelişimi ve işlevi sırasında belirli bir genin rolü karakterize için etkili bir yaklaşım sağlayan bir protokol mevcut.