Yöntem makalesi

Kullanarak İzleme Dendritik Hücre Göç 19 F / 1 H Manyetik Rezonans Görüntüleme

DOI:

10.3791/50251

⸱

20 Mart 2013

 ,  ,  ,  ,  ,  , 
1Experimental and Clinical Research Center, A joint cooperation between the Charité Medical Faculty and the Max Delbrück Center for Molecular Medicine, 2Berlin Ultrahigh Field Facility (B.U.F.F.), Max Delbrück Center for Molecular Medicine

Bu makalede

Özet

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

MRI kullanarak hücrelerin Takip geçmiş yıllarda kayda değer bir ilgi kazanmıştır. Bu protokol, flor ile dendritik hücrelerin etiketlenmesi açıklanmaktadır ( 19 F) zengin bu hücrelerin in vivo uygulama parçacıklar, ve ile drenaj lenf nodu göç ölçüde izlenmesi 19 F / 1 H MR ve 19 F MRS.

Özet

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Manyetik rezonans görüntüleme (MRG) gibi girişimsel olmayan görüntüleme yöntemleri sürekli gelişmeler büyük ölçüde canlılar fizyolojik veya patolojik süreçler çalışma yeteneğimizi geliştirdik. MR da in vivo olarak nakledilen hücrelerin yakalamak için değerli bir araç olduğunu gösteriyor. MR rahatlama kez etkileyen kontrast maddelerin MRG yapılan kullanımı için ilk hücre etiketleme stratejileri (T1, T2, T2 *) ve etiketli hücreleri mevcut sinyalinin bir donanım (T1) veya tükenmesi (T2 *) yol açar. T2 gibi ultrasmall demir oksit ajanlar (USPIO) olarak * geliştirme ajanlar hücre göçü ve bazıları da klinik uygulama için FDA tarafından onaylanmış çalışma istihdam edilmiştir. T2 * ajanların bir dezavantajı, kan pıhtılaşması, mikro kanamaları veya hava kabarcıkları gibi diğer eserler etiketli hücreler tarafından oluşturulan sinyal yok ayırt etmek zor olmasıdır. Bu yazıda, in vivo izleme hücreler için gelişmekte olan bir teknik tarifflorin (19 F) zengin parçacıkları ile hücrelerin etiketlenmesi dayanmaktadır. Bu parçacıklar perflorokarbon (PFC) bileşikleri emülsifiye edici ve daha sonra daha sonra MR 19 F tarafından görüntülenebilir etiket hücreleri, için kullanılır tarafından hazırlanır. In vivo içerir (i), daha sonra 19 F rezonans spektroskopi ile de hücreye sinyal ölçmek için arka plan görüntüleri içermeyen ve tam hücre selectivityand (ii) olasılığı elde edilir, in vivo olarak bağlı karbon-19 K, yokluğunda hücre izleme için PFC önemli avantajlar .

Giriş

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

In vivo hücre izleme biyomedikal pek çok alanda çok önemli bir yönüdür. Bunun için, seçici olarak bir süre içinde hücre lokalize edilebilir non-invazif görüntüleme yöntemleri son derece değerlidir. Üç boyutlu manyetik rezonans görüntüleme (MRG) gelişimine önce, bağışıklık hücre göç izleme mikroskopik analizler veya doku biyopsisi ile sınırlıydı. MR yardımıyla hücre izleme in vivo immün hücre davranışlarını incelemek Bağışıklık için değil sadece, son yıllarda büyük önem kazanmıştır, ama aynı zamanda klinik ve kök hücre araştırmacılar için vardır. 90'lı yılların sırasında, demir oksit ilk çalışmalar 1 MR ile izleme hücreler için gelişme....

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Protokol

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Tüm hayvan prosedürleri yürütme önce yerel kurumsal hayvan koruma kurulu tarafından onaylanması gerekir. MR ölçümleri sırasında anestezi ve fizyolojik izleme yeterli düzeyde (vücut ısısı, solunum hızı) vazgeçilmez gereksinimleri vardır.

1. Fare Kemik İliği-elde edilen dendritik hücreler üretimi

  1. C57BL kemik iliği hücreleri ayıklamak / 6 fareler daha önce 12 tarif. Bu protokol Geri 1992 13 yılına dayanıyor ve aslında Ralph M. Steinman (1.943-2.011), dendritik hücre 14 keşfeden grubu tarafından tanımlanmıştır.
  2. Kısaca, fare ödün kısa bir süre sonra tibia ve fibula ayıklayın. Lamin....

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Sonuçlar

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Intrakutanöz uygulamasını takiben on sekiz yirmi bir saat, 19 F-etiketli dendritik hücreler (DC) drenaj popliteal lenf nodu göç. Boşaltma politeal lenf nodu içine lenf kanalları üzerinden DC hareketi 19 F DC görüntüleri (Şekil 2A) ile 1 H anatomik görüntüleri kaplanacağı tarafından takdir edilebilir. Daha önce in vivo olarak, bu hücrelerin göç, hem de alım verimi 11 dahil DC Immunobiology, 19 F-parçacık boyutunun etkisi bildirilmiştir. Lenf.......

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Tartışma

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

19 F / 1 H MRI lenf nodu içine DC hareketini takip etmek istihdam Bu yöntem in vivo bağışıklık hücrelerinin göç yollarını incelemek için fırsat verir. Dendritik hücreler hızla sıkı belirli yüzeylere 17 kalarak olmadan üç boyutlu yapılar aracılığıyla manevra edebiliyoruz bağışıklık hücrelerinin göç mükemmel örnekleridir. Tanımlanan teknik uzaysal çözünürlüğü (mikron aralığında) bu teknikle, multiphoton mikroskobu ile elde edilebilen yüksek çözünürlüklü (nm aralığında) ile karşıla.......

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Açıklamalar

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Yazarlar hiçbir rakip mali çıkarlarının olmadığını beyan ederim.

Teşekkürler

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Bu çalışma, Berlin'de Moleküler Tıp ve Charite Tıp Fakültesi Merkezi Delbrück Deneysel ve Klinik Araştırma Merkezi, Max bir işbirliğinden SW için Deutsche Forschungsgemeinschaft (DFG WA 2.804) ve SW için bir üniversite hibe tarafından finanse edildi. Fon çalışma tasarımı, veri toplama ve analizi, yayınlama kararı ya da yazının hazırlanmasında herhangi bir rolü vardı. Biz laboratuvarda yaptığı staj sırasında teknik destek için Sayın Robert Westphal teşekkür ederim.

....

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Malzemeler

Bu makalede kullanılan malzemelerin listesi
AdŞirketKatalog numarasıYorumlar
REAGENTS
C57BL/6 farelerCharles Nehri, Berlin
RPMIGibco21875-091
FBS SuperiorBiochrom AGS 0615
HEPESGibco-Invitrogen15630-056
Penisilin-StreptomisinGibco15140-122
L-glutaminGibco25030-024
Dulbecco'nun PBSSigma AldrichD8662
PFASanta Cruzsc-281692
Perfloro-15-taç-5-eter ChemPur391-1996
Pluronic F-68 Sigma AldrichP5556
Petri kapları (35 x 10 mm)VWR, Almanya391-1996
27 ve frak12; G şırıngalarVWR, Almanya612-0151
Naylon hücre süzgeçleri (100 μ m mesh) VWR, Almanya734-0004
NMR tüpleri VWR, Almanya634-0461
EQUIPMENT
Diseksiyon araçlarıFST
CO2 inkübatörü Bağlayıcı
Küçük hayvan MR sistemiBruker Biospin9.4T BioSpec 94/20 USR, ParaVision Edinme ve İşleme Yazılımı
1H/19F çift ayarlanabilir hacimli RF bobini Hızlı Biyomed, W & # 252; rzburg, Almanya35 mm iç çap, 50 mm uzunluk
19F spektroskopi bobini kurumtune/kibrit döngüsü bobini, 4 dönüş, iç çap 5 mm, 10 mm uzunluk,
İzofluran inhalasyon sisteminiF & # 246; hr Medical Instruments GmbH
Hayvan izleme sistemi Model 1025SA Instruments Inc., New York, ABD
içi ayarlamak ve eşleştirmek için iki kapasitör

Kaynaklar

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Yeh, T. C., Zhang, W., Ildstad, S. T., Ho, C. In vivo dynamic MRI tracking of rat T-cells labeled with superparamagnetic iron-oxide particles. Magn. Reson. Med. 33 (2), 200-208 (1995).
  2. Weissleder, R., Cheng, H. C., Bogdanova, A., Bogdanov, A. Magnetic....

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Yeniden basım ve izinler

Bu JoVE makalesinin metnini veya şekillerini yeniden kullanmak için izin iste

İzin iste

Etiketler

Flor MRIPerflorokarbon aretlemeAk SitometrisiProton MRILenf Noduna G r nt lemeH cre TakibiManyetik Rezonans SpektroskopisiFlor SpektroskopisiHayvan MR Taray c s

İlgili makaleler