Bu içeriği görüntülemek için JoVE aboneliğiniz gereklidir. Giriş yapın veya ücretsiz denemenizi bugün başlatın.

Yöntem makalesi

Flybar: Sineklerin için Alkol yönetme

10.5K görüntüleme

⸱

DOI:

10.3791/50442

⸱

18 Mayıs 2014

 ,  ,  , 
1Department of Biological Science, Florida State University, 2Department of Biology and Biochemistry, Biology of Behavior Institute, University of Houston

Bu makalede

Özet

Drosophila alkole davranışsal yanıtların hücresel ve moleküler temellerini kesme için önemli bir model sistem olarak ortaya çıkmıştır. İşte biz kolayca başka deneylere uygulanabilir ve lisans araştırma için çok uygun bir sirkadiyen bağlamda alkol duyarlılık verilerinin toplanması için bir protokol mevcut.

Özet

Meyve sinekleri (Drosophila melanogaster) alkol araştırma ve sirkadiyen biyoloji hem de kurulu bir modeldir. Son zamanlarda, sirkadiyen saat alkol hassasiyeti değil, tolerans oluşumu modüle gösterdi. Burada ayrıntılı olarak bizim protokol açıklar. Alkol flybar kullanarak sinekler uygulanır. Bu kurulumda, doymuş alkol buharı grubu oranlarda nemlendirilmiş hava ile karıştırılır ve aynı anda dört tüplerde sinekler uygulanmıştır. Sinekler çoğaltır varyasyonu en aza indirmek için, standart koşullar altında yetiştirilir. Farklı genotipleri ya da muamele maddelerinin üç günlük sinekler, tercihen doğrudan karşılaştırma yapmak mümkün bulunan iki farklı zaman noktalarında (örneğin, CT 5 ve CT 17) sinekleri eşleştirerek, deneyler için kullanılmıştır. Deney sırasında, sinekler refleks (lorr) düzeltilmesi en kaybı sergileyen alkol buharın önceden belirlenmiş bir yüzde ve sinekler sayısı 1 saat boyunca maruz veya sed ediliration her 5 dakikada sayılır. Veriler üç farklı istatistiksel yaklaşımlar kullanılarak analiz edilebilir. İlk sineklerin% 50'si doğrulma refleksini yitirmiş olan süreyi belirlemek ve önemli farklılıklar zaman noktaları arasında var olup olmadığını belirlemek için, bir varyans analizi (ANOVA) kullanmaktır. İkinci bir varyans analizi ve ardından bir dakikalık belirtilen sayıda sonra lorr göstermektedir yüzdesi sinekler belirlemektir. Son yöntem değişkenli istatistikleri kullanarak bütün zamanlar serisi analiz etmektir. Bu protokol, aynı zamanda genotipler arasında olmayan sirkadiyen deneyleri ya da karşılaştırma için kullanılabilir.

Giriş

Drosophila melanogaster bu ilaç 2,3 insan yanıtlarına benzer olan alkol 1 Bifazik davranışsal cevapları göstermektedir. Ve sedasyon (tepki motor aktivite eksikliği tamamlamak: alkol, düşük konsantrasyonlarda ilk maruz sonra, motor koordinasyon eksikliği, postural kontrolün kaybı ve doğrulma reflekslerinin (lorr düzeltilmesi refleks kaybı) yerine, sergi artan lokomotor aktivite uçar mekanik uyarıya) alkol maruz 4-9 ilerledikçe. Endojen sirkadiyen saat 10,11 fareler, sıçanlar 12 gözlenen gibi alkol duyarlılık ve toksisite güçlü bir modülatörü olan ve 13, insanlarda. Drosophila araştırma son gelişmeler sirkadiyen saat akut alkol duyarlılığı değil alkol toleransı 1 modüle göstermiştir. Mutant çalışmaları ve uzaysal transjenik manipülasyon yoluyla Drosophila mevcut güçlü genetik yaklaşımlarve zamansal gen ekspresyon karmaşık davranışların altında yatan hücresel ve moleküler mekanizmaları belirlenmesinde hızlı bir ilerleme sağlayan bir sistem sağlar. Bir araştırma aracı olarak Drosophila kullanımı hızla memelilere 14-16 tercüme edilebilir alkol nörobiyoloji anlamada maddi gelişmeler izin verdi. Sirkadiyen saat alkol duyarlılık modüle, üzerinden moleküler mekanizmalar anlaşılmasını kolaylaştırmak ve muntazam bir sirkadiyen zaman noktalarındaki davranışsal tepkileri, loş kırmızı ışık koşullarında kullanım için uygun olan bir alkol yönetim protokol ölçmek için gereklidir. Drosophila, alkol kronik maruz kalma için güvenilebilir akut riskler için buhar şeklinde alkol idare yoluyla gıda takviyesi ile tatbik edilebilir. Burada, Kayıp-of-doğrulma refleksini (lorr) 1 sirkadiyen modülasyonu değerlendirilmesi yanı sıra uygun bir alkol yönetim protokolü açıklamaksedasyon.

Sabit bir sıcaklıkta, 12 saat LD döngüler ve daha sonra deney söz bağlı olarak 2-5 gün için, kontrollü ışık rejimi aktarılır: Sinekler 12 saat ile sürüklenir. Sinekler flybar olarak bilinen bir cihaz etanol buharına maruz kalmaktadır. Bu cihazda, hava kontrollü miktarda bir su ve alkol fokurdatıldı edilir; buharlar, daha sonra bir şişe yuva sinekler karıştırılır ve yönlendirilir. Sinekler dk her 5 refleksleri doğrulma veya sedasyon haline gelmiş görüntülemek için başarısız numarası için puanlanır. Her zaman noktası için lorr yüzdeler sirkadiyen zaman noktaları arasında ya da sinek suşları arasında hesaplanmış ve karşılaştırılmıştır. Davranış analizi seçenekleri ile birlikte Flybar alkol teslim kullanılarak alkol teslimat basitliği ve güvenilirliği karanlık koşulları altında gerçekleştirilmiştir sirkadiyen deneyler için önemli bir fayda sağlar.

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Protokol

Flybar 1. Meclisi

Gerekçe ve bakış: sistem sinekler alkol buharının kontrollü yüzdeleri yönetmek için tasarlanmıştır. Not: Şekil 1, şematik bir incelemesini sunar Flybar kurulum üç aşamada (hava akışının düzeneği, alkol ve su şişeleri kurulumu ve gözlem şişelerin montaj), aşağıda tarif edildiği gibi. Kısacası, sürekli bir hava akımı, sırasıyla alkol ve su fokurdatıldı karıştırılmış ve 4 gözlem şişelerine tatbik edilmektedir iki fraksiyon ayrılır.

  1. Hava akışı montajı
    1. Esnek silikon tüp bina hava veya bir y-konnektörü kullanılarak tutarlı bir hava akımı ve bölünme oluşturmak için bir akvaryum perlatör birine kısa bir parça bağlayın. Sistemin (4 gözlem şişeler için, tipik olarak 1,000 ml / dakika) üzerinden toplam hava miktarını kontrol hava akış regülatörüne ilk dalı bağlayın.
    2. Ikinci tüp içinde bir hızlı konektör kaydedinhava akımı, hava akımı kalibre etkilemeden Deneyin başında kesildi, böylece. Bir Y-bağlantı ekleyin ve hava akış regülatörüne her dallanma tüp bağlayın.
    3. Hava akımı düzenleyiciler için boru bağlayın ve daha sonra iki hava akımı metre bağlayın.
  2. Alkol ve damacanaların Set-up
    1. Hava akışı metre çıkışında esnek borular ekleme ve boru uzunluğunun her ucuna bir 90 ° 'lik dirsek ile ince bir cam tüp (1 ml bir cam pipetler bölümlerinin) yerleştirin. Bu su ve alkol şişeleri içine giren hava akışını olarak görev yapacak.
    2. Alkol ve su ile doldurulmuş şişelerin içine içlerinden 2 delikli kauçuk tıpa yerleştirin. Bir su banyosu kullanılarak dış hava sıcaklığından daha yüksek bir sabit sıcaklık 2 ° C 'de hem de şişe tutun. Su banyosu 27 ° C 'de iken Deneylerde, çevresel odası, 25 ° C' de muhafaza edilir
    3. A için düz cam pipet takınir lastik tıpadan bir girişine ve şişenin tabanından yaklaşık 1 cm kadar sıvı içine uzanır.
    4. Camın ucu şişe içinde durdurucunun alt ile aynı hizaya gelene kadar kauçuk tıpa içinde kalan deliğe cam pipet bir dirsek bölümü yerleştirin. Bir başka boru uzunluğunda bu hava çıkış yerleştirin.
    5. Bir y-konnektör kullanarak hava akışlarını yeniden birleştirecek ve iki delikli lastik tıpa ile yerleştirilen kavisli cam pipet bölümleri ile boş bir karıştırma şişesi veya şişenin içinden hava akışını yönlendirmek için silikon tüp başka bir uzunluk kullanın. Çıkış karışık hava akımı için silikon tüp başka bir uzunluk kullanın.
  3. Gözlem Vial'e Meclisi
    1. Birden çok gözlem şişeler, her bir deney kullanılabilir, böylece hava, 4 veya 8 küçük akışları elde etmek için karıştırma şişe 2-3x çıkan çıkış hava dalgasının ayrıldı. Gözlem şişelerine esnek silikon boru bağlayın.
    2. Görünen kaydetme kurmakCam tüpler alkol buhar için bir giriş ve bir çıkış sağlayan, üzerinden iki delik içeren lastik bir tıpa ile kapatılmış boş şişeler kullanılarak şişeler üzerinde.
    3. Örgü ile birinci cam borunun ucunu Kapak ve esnek bir plastik boru, bir parça kullanarak yerine örgü tutun. Bu şişe yaklaşık yarısı uzunluğu kadar uzanan birinci delikten bu tüp yerleştirin. Gerekirse, bir rahat uyum elde etmek için teflon bant kullanımı.
    4. Bu lastik bir tıpa iç kenarı ile aynı hizaya gelene kadar örgü kapsadığı ucu, ikinci cam tüp yerleştirin.
    5. Loş kırmızı ışık koşulları altında sinekler ile kontrast maksimize etmek için yatay beyaz bir kâğıt parçası üzerinde şişeleri yerleştirin.
    6. Hava akımının içinde karıştırın Uygun fraksiyonlar alkol fokurdatıldı ve hava akımı su fokurdatıldı. Sürekli hava basıncı izleme ve hava akımlarının arzu karışmasını sağlamak için gerekli ayarlamaları yapmak.
      Not: Sürekli çalışanküçük bir oda içinde paralel olarak ya da tek bir deneyde çok Fly Bar deneylerinin alkol buharı gözle görülür bir birikimine yol açabilir. Potansiyel olarak kapalı bir odada araştırmacı etkileyebilir alkol buharı sürekli salınımını önlemek için, uygun bir sistem yeterli deney sırasında oluşturulan alkol buharı kaldırır yerine koymak gerekmektedir. , Alkol buharları çıkarmak her şişeye çıkıntılı ikinci cam tüpün üzerine bir boru 6-12 inç parçası bağlamak, onları paket ve bir huni-vakum sistemine yönlendirmek için. Araştırmacılar ayrıca deneysel test odası yeterince havalandırılmış olduğundan emin olmanız gerekir.

Deney Hayvanlarının 2. Hazırlanması

Gerekçe ve genel bakış: Özgün kültür ve sineklerin konut verileri değişkenlik azaltacaktır. Bu sinekler yaşadığı stres standardizasyonu ve azaltılması ile elde edilir. Bu nedenle, hiçbir anestezi (CO 2 veya alternatifleri) Duri kullanılırng protokol aşağıdaki adımları herhangi biridir. Ayrıca, sinekler, öğrenme ve hafıza deneyleri 17 dahil olmak üzere diğer davranışsal analizler için standart olarak değişkenliği en aza indirmek için deneyler ve zaman noktaları arasında uyumlu yaş olmalıdır.

Farklı aydınlık: karanlık koşullar etanole davranışsal yanıt olarak sirkadyen saatin çalışmasını araştırmak için kullanılabilir. Bir gündüz ritim olup olmadığını belirlemek için, deneyler belirli Zeitgeber Times (ZT) performansı ölçmek için bir tanımlanmış LD döngüsü altında yapılabilir. ZT 12 kez ışıklar 12:12 saat LD döngüsü ile kapalı iken ZT 0, şafak temsil ve LD çevrimleri altında ışıkların süre olarak tanımlanır. Sabit şartlar altında, sirkadiyen zaman (CT) çevre sinyalleri örneğin, serbest çalışma süresi yokluğunda hayvan için zaman ölçer ve bir önceki LD kenetleme döngüsü ile ilgilidir. Vahşi tip Drosophila olarak, CT ilk birkaç günü için önceki ZT yansıtırsabit serbest çalışan sirkadiyen dönemi olarak koşullarda ve ritimler s ~ 24 saat vardır. Karanlık döngüleri ve sonra deneylerden önce sürekli karanlık koşullarda (DD) aktarıldı: sirkadiyen modülasyonu ölçmek ve davranışları üzerinde akut ışık etkilerini ortadan kaldırmak için, sinekler ışığa sürüklenir. Sirkadiyen deneyler belirli sirkadiyen Times (BT) de performansını ölçmek için DD ikinci gününde yapılır.

Drosophila, sürekli ışık (LL) koşulları çekirdek sirkadiyen genler ve aritmik lokomotor aktivite 18-21 ve aritmik kısa-süreli hafıza 17 kanıtladığı gibi davranışsal sirkadiyen ritmin bozulması nemli veya kaldırılmış moleküler salınımlar ile sirkadiyen bozukluğuna neden. Protokol sirkadiyen çalışmaları için optimize edilmiştir ve diğer deneyler için basitleştirilebilir. Tüpler 12 inç kullanılan küçük kırmızı ışıklar; Tüm sirkadiyen deneyler loş kırmızı ışık (ortam havai kırmızı ışık

  1. 12:12 saat ışık altında 25 ° C'de arka sinekler: koyu sürüklenme koşulları (LD).
  2. Gün 1 ve gün ışığı süresinin sonunda taze eclosed sinekleri toplayın ve gıda yapışkanlığını en aza indirmek için, yüksek agar konsantrasyonu gıda küçük bir miktarını ihtiva eden küçük şişeler tutan LD koşullar altında 24 saat için saklayın. Not: Sağlıklı, normal gelişmiş sinekler toplanır sağlamak için, eclosion bir kültür şişe başladıktan sonra sadece ilk gün içinde toplanan sinekler kullanın.
  3. Yaklaşık 30 (25-35) toplu halde toplayın bir ışık döneminin sonuna doğru günde 2 aspiratör, ve taze tutma şişelere transfer kullanarak uçar.
  4. Şişenin kadar sonuna kadar sinekleri yönlendirmek için güçlü bir ışık kaynağı kullanın. Davranışsal gözlemler her deney sonunda sayılmıştır sinekler sayısı ile yüzde olarak rapor edildiği gibidir, bu aralık içinde, her bir küçük şişe içinde sinekler tam sayısı kritik değildir.
  5. 25 ° C'de fo DD koşullarda sinekler koruyuniki gün r.
  6. Deney gününde, farklı koşullar ya da deney öncesinde en az 1 saat için oda deneysel davranış oda dışında kuluçka içinde yer tüm sinekler yerleştirin. Acclimation nedeniyle sıcaklık ve nem değişikliklerine değişkenliği azaltır.
  7. Davranış sirkadiyen modülasyonu için test etmek amacıyla, altı zaman noktalarında bir gün (CT 1, 5, 9, 13, 17 ve 21) gözlemler olun.
  8. Deneysel tasarım dayanıklılığını arttırmak ve tek bir deneye değişkenlik özgü en aza indirmek için davranışsal deneyler tek bir set içinde birden çok kez puan karşılaştırın. Ters ışık-karanlık programları ile iki kuluçka sürüklenme için kullanılır Örneğin, CT 1 ve CT 13 gözlemleri aynı anda elde edilebilir.
    Not: yukarıdaki prosedür, sürekli karanlıkta sirkadyan durumda gerçekleştirilen deneyleri için deney hayvanlarının hazırlanmasını tarif etmektedir. Farklı ışık: karanlık koşulları saatin çalışmasını araştırmak için kullanılabiliralkol davranışsal yanıtların. Bir gündüz ritim deneyler belirli Zeitgeber Times (ZT) performansı ölçmek için bir LD döngüsü altında yapılabilir olup olmadığını belirlemek için. Ek olarak, iletişim kuralı deneyler test sirkadiyen fonksiyon bozukluğu için sürekli ışık altında ortaya sinek ile kullanılabilmektedir. Işık koşullarında muhafaza sinekler sınamak alternatif protokoller için, davranışsal deneyler hala karanlık koşullarda yapılmalıdır. Sinekler nedeniyle davranışı üzerindeki ışık akut etkilerine davranış değişkenliği en aza indirmek için deney öncesinde 1 saat boyunca karanlıkta içine transfer edilmelidir.

3.. Davranış Gözlemler

Gerekçe ve genel bakış: Aşağıdaki alkol verilmesi protokol loş kırmızı ışık koşulunda gözlemler için optimize edilmiştir. İki davranışsal tedbirler lorr ve sedasyon sinek sarhoşluk iki farklı noktalarını temsil eder. Lorr kaybı o içeren sarhoşluk geç bir noktasını temsilf motor ve postural kontrol, zehirlenme sedasyon önlemler ise çok geç bir bitiş noktası. Genotip veya sirkadiyen modülasyon farklı bu iki önlemlerini etkileyebilecek; dolayısıyla bir iki incelemek isteyebilirsiniz. Kısacası, sinekler şişeler içinde yüklenir, lorr veya sedasyon gösteren sinekler sayısı alkol buhar uygulama boyunca her 5 dakika ve deney sonunda sayılmıştır sineklerin sayısı puanlanır.

  1. Deneye başlamadan önce, en az 10 dakika boyunca sistem (hava, su ve alkol şişeleri fokurdatıldı) üzerinden havayı çalıştırmak ve hava akımı ayarlamak için bu zaman kullanın.
  2. Hava akışını durdurmak için hızlı serbest ayırın. Şişelerde sinekler yük ve hava akışını yeniden ve sayaçlarını başlar. Not: tepkisiz sinekler veya ölü sinekler tutma şişelerde bırakılırsa, bu stres koşulları göstergesi olabilir. Genel olarak, bu koşullar tutan şişelerde az sinekler konut veya hafif kullanan gıda yapışkanlık azaltarak hafifletilebilirYemek hazırlama sırasında daha yüksek ly agar konsantrasyonu. Optimum davranışsal analiz ve deneyler arasındaki minimal değişkenlik için, sinekler, deneylerden önce sağlıklı olmalıdır.
  3. Doğru zaman tutmak için, alkol maruziyet toplam süre takip etmek için bir zamanlayıcı kullanın ve 5 dakikalık aralıklarla işaretlemek için ikinci bir sayım-geri zamanlayıcı kullanın.
  4. Kontrastı artırmak ve görünürlük sinek, özellikle loş kırmızı ışık koşulları altında şişelere altında beyaz bir kağıt parçası yerleştirin.
  5. Sabit düzeylerini korumak için bir deney sırasında düzenli hava akımını kontrol edin. Hava akımları stabilize kez Genel olarak, bu deney uzunluğu boyunca sabit kalır.
  6. 1 saat süreyle her 5 dk sonra doğrulma refleksini kaybetmiş sinek sayısını. Alkol duyarlılık genotipler ve genetik arka arasında değişir gibi, daha sık değerlendirme yapmak ya da daha uzun bir süre için deney yapmak için istenebilecektir.
  7. Şişe slightl kaldırınyüzeyden y ve şişe arkasında kağıt doğru bir kırmızı ışık el feneri gelen ışığı doğrudan. Loş kırmızı ışık koşullar altında tüm deneylerde 1 lux daha büyük bir ışık seviyesini korumak üzere deney şişesine, en az 12 inç arasında bir mesafede el fenerleri kırmızı tutun.
  8. Tüm deneyler için standartlar oluşturmak için bir ışık ölçer kullanarak ışık düzeylerini ölçmek.
  9. Flakon bir firma musluk uygulayarak doğrulma refleksini yitirmiş ve yaklaşık 4 saniye içinde kendilerini sağa başarısız kaç sinekler saymak var sinekler sayısını belirleyin. Lorr gösterilecek sinekler hala kendi ayakları ve kanatları hareket edebilir, ama dik kendilerini açamıyorum.
  10. Seansının sonunda, her şişede sinekler sayısı.
    Not: Bazen, bir tek sinek yükleme deney şişeleri içine uçar tıpa ve tarafı arasında yakalanmış olabilir. Bu karanlıkta yapılır gibi, hali hazırda bu nedenle toplam uyuşmuş sayısı için gerekli olan fark edilmeyebilirdoğru yüzdeleri hesaplamak için deney sonunda sinekler er.

Buna ek olarak, bu prosedür, aynı zamanda, farklı bir davranış gösteren bir bitiş noktası sinekler sedasyon, ölçmek için kullanılabilir. Sedasyon sinekler onların sağ refleksini kaybetmiş olsa da, sedasyon fazla alkol pozlama gerektirir. Davranışsal, sedasyon sinekler şişeye aa sağlam musluk sonra küçük şişe içinde hareketsiz kalan belirgin motor aktivitenin tam eksikliği ile karakterize edilebilir. Sedasyon, hareketsiz hiçbir bacak flakon sağlam bir musluğun aşağıdaki teslim sallayarak kalır sinek sayısını. Ayrıca, şişe bireysel sinekler hala kendi kapma refleksini korumak olmadığını belirlemek için yan yana rulo olabilir.

4.. Veri Analizi

  1. Her şişede sinekler toplam sayısına bağlı olarak değerlendirilen her zaman yüzde lorr belirler.
  2. Calculati sirkadiyen zaman noktaları veya suşları arasındaki farklar Tahminisigmoid eğrinin lineer kısmı içinde kalan her bir örnek için% 50 lorr, (aşağıdaki Şekil 2) ng.
  3. Alternatif istatistikleri:
    1. Genotipler arasında karşılaştırmalar planlanmıştır, bu fark (Şekil 3) post-hoc testi ile önemli olduğu zaman noktaları aralığını belirlemek için tekrarlanan ölçümler için ANOVAand kullanarak tüm zaman süreci analizi için tercih edilir. Bu testler için, 0.001 bir değerini kullanmayı tercih. Bu bireysel maruz zamanlarda farklılık eğrinin eğimi genotip arasındaki farklar hem de değerlendirilebilir sağlar.
    2. Için duyarlılık farklılıklar, grafiğin doğrusal bölümü (Şekil 4) sedasyon gibi belirli bir tepki için alkol maruz belirli zamanlarda için belirlenebilir.
    3. Suşları veya sirkadiyen zaman noktaları arasındaki farklar standart F-istatistikleri ve post-hoc testleri kullanılarak tahmin edilebilir.

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Sonuçlar

Bir Marker olarak% 50 lorr kullanarak Alkol Duyarlılık sirkadiyen modülasyonu.

Gündüz alkol hassasiyeti sirkadiyen modülasyonu gösteren temsili bir örneği, Şekil 2'de gösterilmiştir. Lorr Canton-S DD, 2. gün boyunca altı zaman noktalarında ölçülmüştür ve% 50 lorr her bir zaman noktası için belirlendi. (: F 5,45 = 7.39, p <0,001, N = 6-10 Nokta zaman başına ANOVA) Analizi günün önemli bir zaman etkisini göstermiştir. Fisher LSD testi CT 2...

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Tartışma

Alkol ve toplum için alkolizm maliyetler de 29 insan ve ekonomik maliyetleri açısından, muazzam 30,31. Drosophila bir model olarak hızla bireylerin çok sayıda davranışsal tepkileri incelemek için hızlı ve çok yönlü bir sistem sunar ve gibi yaygın alkol 5,7,32-34 ve sirkadiyen araştırma 35-37 her ikisi için de kullanılmıştır.

Burada, sirkadiyen koşullar altında yetişkin sinek alkol buharı kontrol uygulanması için basit bir protokol tarif. <...

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Açıklamalar

Yazarlar, hiçbir rakip mali çıkarlarını olmadığını beyan ederim.

Teşekkürler

Bu araştırma için fon Florida State Üniversitesi Tıp Fakültesi ve FSU Biyolojik Bilimler Bölümü'nden destek Neuroscience Ödülü bir Programı tarafından sağlanmıştır. Ek Finansman bir Grant-in-Aid Alkollü İçki Üretici Araştırma Fonu tarafından sağlanmıştır.

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Malzemeler

Bu makalede kullanılan malzemelerin listesi
AdŞirketKatalog numarasıYorumlar
Alkol 190 geçirmezÇeşitli
HavalandırıcıYerel evcil hayvan mağazasıWhisper 60
Silikon boru 1/8 "VWR408060-0030
120° Y-konnektörVWR82017-256
Hızlı bağlantı kesmeVWR46600-048
Plastik boru kelepçeleriBell-art ürünleri132250000Ya bu ya da sonraki
Minyatür hava regülatörüMcMaster-Carr8727K11Ya bu ya da önceki
Minyatür hava regülatörü montaj braketiMcMaster-Carr9891K66
Gilmont boyutu 12 akış ölçerVWR29895-242
Alet klipsleriMcMaster-Carr1722A43Akış ölçerleri tutmak için
FlakonVWR89092-722
İki delikli kauçuk tıpaVWR59585-186Şişelere uyar
5 mm Pyrex cam tüplerTrikinetikPGT5x65Önceki tıpa Teflon banta en iyi uyar
HırdavatçıGerekirse tıpalara tam
İki delikli kauçuk tıpaVWR59582-122Şişelerimize uyar
Tek kullanımlık cam pipetlerVWR53283-768Isıtarak boyuna kesin ve bükün
Çok ince naylon ağVWRÇeşitli
15 watt ampullerHırdavatçıTepegöz kırmızı ışık
Fotoğrafik kırmızı güvenli ışık filtreleriTepegöz kırmızı ışık
Kırmızı filtreli mini el fenerleriMag-light
kullanıyoruz oturması için

Kaynaklar

  1. Linde, K., Lyons, L. C. Circadian modulation of acute alcohol sensitivity but not acute tolerance in Drosophila. Chronobiol. Int. 28, 397-406 (2011).
  2. Kaun, K. R., Azanchi, R., Maung, Z., Hirsh, J., Heberlein, U. A Drosophila model for alcohol reward. Nat Neurosci. 14, 612-619 (2011).
  3. Shohat-Ophir, G., Kaun, K. R., Azanchi, R., Mohammed, H., Heberlein, U. Sexual deprivation increases ethanol intake in Drosophila. Science. 335, 1351-1355 (2012).
  4. Bellen, H. J. The fruit fly: A model organism to study the genetics of alcohol abuse and addiction. Cell. 93, 909-912 (1998).
  5. Guarnieri, D. J., Heberlein, U. Drosophila melanogaster, a genetic model system for alcohol research. International Review of Neurobiology. 54, 203-232 (2003).
  6. Scholz, H. Intoxicated fly brains: Neurons mediating ethanol-induced behaviors. J. Neurogenet. 23, 111-119 (2009).
  7. Wolf, F. W., Rodan, A. R., Tsai, L. T. Y., Heberlein, U. High-resolution analysis of ethanol-induced locomotor stimulation in Drosophila. J. Neurosci. 22, 11035-11044 (2002).
  8. Schumann, G., Spanagel, R., Mann, K. Candidate genes for alcohol dependence: Animal studies. Alcoholism: Clinical and Experimental Research. 27, 880-888 (2003).
  9. Singh, C. M., Heberlein, U. Genetic control of acute ethanol-induced behaviors in Drosophila. Alcohol Clin Exp Res. 24, 1127-1136 (2000).
  10. Perreau-Lenz, S., Zghoul, T., de Fonseca, F. R., Spanagel, R., Bilbao, A. Circadian regulation of central ethanol sensitivity by the mPer2 gene. Addiction Biology. 14, 253-259 (2009).
  11. Brager, A. J., Prosser, R. A., Glass, J. D. Circadian and acamprosate modulation of elevated ethanol drinking in mPer2 clock gene mutant mice. Chronobiol. Int. 28, 664-672 (2011).
  12. Sinclair, J. D., Geller, I. Ethanol consumption by rats under different lighting conditions. Science. 175, 1143-1144 (1972).
  13. Danel, T., Jeanson, R., Touitou, Y. Temporal pattern in consumption of the first drink of the day in alcohol-dependent persons. Chronobiol. Int. 20, 1093-1102 (2003).
  14. Kapfhamer, D., et al. Taok2 controls behavioral response to ethanol in mice. Genes, brain, and behavior. 12 (1), 87-97 (2012).
  15. Lasek, A. W., et al. An evolutionary conserved role for anaplastic lymphoma kinase in behavioral responses to ethanol. PLoS One. 6, 226-236 (2011).
  16. Lasek, A. W., Giorgetti, F., Berger, K. H., Tayor, S., Heberlein, U. Lmo genes regulate behavioral responses to ethanol in Drosophila melanogaster and the mouse. Alcohol Clin Exp Res. 35, 1600-1606 (2011).
  17. Lyons, L. C., Roman, G. Circadian modulation of short-term memory in Drosophila. Learning & Memory. 16, 19-27 (2009).
  18. Hamblen-Coyle, M. J., Wheeler, D. A., Rutila, J. E., Rosbash, M., Hall, J. C. Behavior of period-altered circadian-rhythm mutants of Drosophila in ligh-dark cycles (Diptera Drosophilidae). J. Insect Behav. 5, 417-446 (1992).
  19. Konopka, R. J., Pittendrigh, C., Orr, D. Reciprocal behavior associated with altered homeostasis and photosensitivity of Drosophila clock mutants. J. Neurogenet. 6, 1-10 (1989).
  20. Power, J. M., Ringo, J. M., Dowse, H. B. The effects of period mutations and light on the activity rhythms of Drosophila melanogaster. Journal of Biological Rhythms. 10, 267-280 (1995).
  21. Yoshii, T., et al. Temperature cycles drive Drosophila circadian oscillation in constant light that otherwise induces behavioural arrhythmicity. Eur. J. Neurosci. 22, 1176-1184 (2005).
  22. Berger, K. H., Heberlein, U., Moore, M. S. Rapid and chronic: two distinct forms of ethanol tolerance in Drosophila. Alcohol Clin Exp Res. 28, 1469-1480 (2004).
  23. Scholz, H., Ramond, J., Singh, C. M., Heberlein, U. Functional ethanol tolerance in Drosophila. Neuron. 28, 261-271 (2000).
  24. Kong, E. C., et al. Ethanol-regulated genes that contribute to ethanol sensitivity and rapid tolerance in Drosophila. Alcohol Clin Exp Res. 34, 302-316 (2010).
  25. Borycz, J., Borycz, J., Kubow, A., Lloyd, V., Meinertzhagen, I. Drosophila ABC transporter mutants white, brown and scarlet have altered contents and distribution of biogenic amines in the brain. J. Exp. Biol. 211, 3454-3466 (2008).
  26. Sitaraman, D., et al. Serotonin is necessary for place memory in Drosophila. Proceedings of the National Academy of Sciences. 105, 5579-5584 (2008).
  27. Bainton, R. J., et al. Dopamine modulates acute responses to cocaine, nicotine and ethanol in Drosophila. Current Biology. 10, 187-194 (2000).
  28. Kong, E. C., et al. A pair of dopamine neurons target the D1-like dopamine receptor DopR in the central complex to promote ethanol-stimulated locomotion in Drosophila. Plos One. 5, (2010).
  29. Xu, J., Kochanek, K. D., Murphy, S. L., Tejada-Vera, B. Deaths: Final data for 2007. , U.S. Department of Health and Human Services, Centers for Disease Control and Prevention: National Center for Health Statistics. (2010).
  30. The National Center on Addiction and Substance Abuse. Shoveling up II: The impact of substance abuse on federal, state and local budgets. , Columbia University. (2009).
  31. NIAAA, Estimated economic costs of alcohol abuse in the United States. , Available from: www.medtext.com/hdcn.htm (1992).
  32. Devineni, A. V., Heberlein, U. Preferential ethanol consumption in Drosophila models features of addiction. Current Biology. 19, 2126-2132 (2009).
  33. Devineni, A. V., Heberlein, U. Addiction-like behavior in Drosophila. Communicative & Integrative Biology. 3, 357-359 (2010).
  34. Rodan, A. R., Rothenfluh, A. The genetics of behavioral alcohol responses in Drosophila. International Review of Neurobiology. 91, 25-51 (2010).
  35. Boothroyd, C. E., Young, M. W. Molecular and Biophysical Mechanisms of Arousal, Alertness, and Attention. Annals of the New York Academy of Sciences. Pfaff, D. W., Kieffer, B. 1129, Blackwell Publishing. 350-357 (2008).
  36. Nitabach, M. N., Taghert, P. H. Organization of the Drosophila circadian control circuit. Current Biology. 18, 84-93 (2008).
  37. Sheeba, V. The Drosophila melanogaster circadian pacemaker circuit. J. Genet. 87, 485-493 (2008).
  38. Cohan, F. M., Graf, J. -D. Latitudinal cline in Drosophila melanogaster for knockdown resistance to ethanol fumes and for rates of response to selection for further resistance. Evolution. , 278-293 (1985).
  39. Moore, M. S., et al. Ethanol intoxication in Drosophila: Genetic and pharmacological evidence for regulation by the cAMP signaling pathway. Cell. 93, 997-1007 (1998).
  40. Berger, K. H., et al. Ethanol sensitivity and tolerance in long-term memory mutants of Drosophila melanogaster. Alcohol Clin Exp Res. 32, 895-908 (2008).
  41. Pohl, J. B., et al. Circadian Genes Differentially Affect Tolerance to Ethanol. in Drosophila. Alcoholism: Clinical and Experimental Research. , (2013).
  42. Bhandari, P., Kendler, K. S., Bettinger, J. C., Davies, A. G., Grotewiel, M. An assay for evoked locomotor behavior in Drosophila reveals a role for integrins in ethanol sensitivity and rapid ethanol tolerance. Alcoholism: Clinical and Experimental Research. 33, 1794-1805 (2009).
  43. Rothenfluh, A., et al. Distinct behavioral responses to ethanol are regulated by alternate RhoGAP18B isoforms. Cell. 127, (1016).

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Yeniden basım ve izinler

Etiketler

Alkol Buhar na Maruz B rakmaDrosophila melanogasterFlyBar KurulumuDo rulma Refleksinin KaybSirkadyen Mod lasyonAlkol HassasiyetiLo K rm z I kHava Ak Reg lasyonuG zlem T pleristatistiksel Analiz
Flybar: Sineklerin için Alkol yönetme
Bize ulaşın
Kütüphaneye tavsiye et

Gizlilik

Kullanım Şartları

İlkeler

Telif hakkı © 2026 MyJoVE Corporation. Tüm hakları saklıdır.