Bu içeriği görüntülemek için JoVE aboneliğiniz gereklidir. Giriş yapın veya ücretsiz denemenizi bugün başlatın.

Yöntem makalesi

Boyuna, Non-invaziv için Eye Ön Kamara içine Nakli

13.2K görüntülenme

⸱

DOI:

10.3791/50466

⸱

10 Mart 2013

 ,  , 

Bu makalede

Özet

Intraoküler nakli ve konfokal mikroskopi birleştirerek yeni bir yaklaşım aşılı dokuların içinde tek hücreli çözünürlüğe sahip uzunlamasına, non-invaziv, gerçek zamanlı görüntüleme sağlar In vivo. Biz fare gözün ön kamaraya pankreas adacık nakli nasıl gösterilmektedir.

Özet

Intravital görüntüleme biyolojik araştırma vazgeçilmez bir araç olarak ortaya çıkmıştır. Bu süreç içinde bir çok görüntüleme teknikleri invaziv olmayan hayvanlarda çeşitli biyolojik süreçlerin çalışma geliştirilmiştir. Ancak, mevcut intravital görüntüleme yöntemlerinin önemli bir teknik sınırlama tek hücreli çözünürlük yetenekleri ile non-invaziv, boyuna görüntüleme birleştirmek için yetersizliğidir. Biz gözün ön kamara içine nakli in vivo hücresel çözünürlüğü ile non-invaziv, boyuna görüntüleme sağlayan çok yönlü bir deney platformu sunan böyle önemli sınırlama circumvents nasıl burada gösterir. Biz fare nakli prosedürü göstermek ve yani klinik önemi, pankreas adacık nakli ile bir model kullanarak temsilcisi sonuçlar sağlar. Gözün anteryor odacık içine transplante dokuların çeşitli direkt görüş sağlamak için ek olarak, bu yaklaşım kayşat için bir platform sağlargerçekleştirerek n ilaçların uzun süreli takip ve hedef dokularda izleme. Çünkü gözü faydaları transplantasyon tedavileri sadece ön odasına, çok yönlülüğü, doku / hücre nakli, sinyal iletimi ve kanser veya otoimmün hastalık gelişme olarak fizyolojik ve patofizyolojik süreçlerin çalışma vivo uygulamalarda diğer uzanır.

Giriş

Intravital mikroskopi Gelişmeler vitro çalışmalar 1 öngördüğü olmayan fizyolojik fenomenler ortaya koymuştur. Bu canlı hayvan içine in vitro yöntemler konvansiyonel ile elde edilen bulgular çevirisinde meydan vurgulamaktadır. Son on yıl içinde, canlı hayvanlarda dokuların görselleştirme ölçüde görüntüleme yöntemleri 2, 3, 4, 5, 6, teknolojik gelişmeler tarafından geliştirildi. Bu non-invaziv, hedef dokuların boyuna görselleştirme sağlamak için deneysel hayvan modellerinde uygulanabilir uygulama ile in vivo görüntüleme yaklaşımlar ihtiyaç mahmuzlu vardır.

Manyetik rezonans ....

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Protokol

Aşağıdaki yordam 2 adım stereoskop altında yapılır, ilk adım kanül içine adacıklar yükleme içerir ve ikinci adım ACE fiili naklidir. Hayvanlar üzerinde yapılan tüm işlemler Miami Üniversitesinin kurumsal hayvan bakımı ve kullanımı komitesi (IACUC) tarafından onaylanmıştır.

1. Transplantasyon için Kanül Yükleme adacıkları

  1. Daralma çevrelerinde çanak iplik Merkezi kültürü çanak adacıklar.
  2. "Rezervuar" dan kanül ayırın ve temiz bir yüzey üzerinde kanül ve bağlantı hortumu yerleştirin. Rezervuar filtresi (Şekil 1a) olmadan 300 ul tek kullanımlık plastik pipet üzerinden yapılabilir.
  3. Rezervuar içine....

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Sonuçlar

"Iyi" bir transplantasyon tanımlayan birkaç parametre vardır. İyi bir transplantasyon video görülebileceği gibi kesi zaman kanama olmadan ilerler bir yoldur. Kanama ACE (Şekil 3a) içine neşter (iğne) sadece ucu nüfuz ederek önlenebilir / minimize edilmiştir. Bu da iris temas ve ponksiyon önlemeye yardımcı olacaktır. Ayrıca zaman (Şekil 3c, d) üzerinde kornea bulanıklıkları neden olmadan çok iyi iyileşir küçük bir kesi sağlayacaktır. Başarılı bir transplantasyon bir başka öneml.......

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Tartışma

Murin pankreas adacıklarının daha önce anlatıldığı gibi 33, yoğunluk gradient üzerinde saflaştırma, ardından kollajenaz sindirimi ile izole edilmiştir. İzole adacık nakli öncesi gecede kültüre edildi. Bu gerekli olmasa da, bu adacıkları izolasyon prosedürü kurtarmak için izin tavsiye edilir. O / sağlam adacık hayatta nakli sağlayacak gibi bu nakli diyabetik alıcılarında yapıldığında önemlidir.

Transplantasyon oksijen / izofluran karışımı (% 1.5-3) etkisi inhalasyon ile jeneralize .......

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Açıklamalar

PO.B. ticari bir hizmet platformu olarak gözün ön kamara kullanmak için gidiyor biyoteknoloji şirketi Biocrine, kurucularından biridir. AC Bu teknoloji koruma patent üzerinde.

Teşekkürler

Biz Drs kabul ediyorsunuz. Camillo Ricordi, Antonello Pileggi, R. Damaris Molano, Stephan Speier ve verimli tartışmalara Daniel Nyqvist. Ayrıca video kayıt ile yardım Eleut Hernandez ve Diego Espinosa-Heidmann teknik yardım için, ve Mike Valdes ve Margaret Formoso ederim. Byron Maldonado, düzenlenebilir kaydedilir ve son video üretti. Araştırma destek Diyabet Araştırma Enstitüsü Vakfı (tarafından sağlanmıştır www.DiabetesResearch.org ), NIH / NIDDK / NIAID (MHA için F32DK083226; AC NIH RO3DK075487; PO.B. için U01DK089538). PO.B Ek araştırma desteği Karolinska Enstitüsünde, İsveç Araştırma Konseyi, İsveç Di....

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Malzemeler

Bu makalede kullanılan malzemelerin listesi
AdŞirketKatalog numarasıYorumlar
Reaktif Adı Şirket Katalog numarası Açıklama / Yorumlar
IsoTHESIA (İzofluran) Buttler Hayvan Sağlığı Kaynağı 11695-6775-2 % 99.9 İzofluran / ml
Ketaset (Ketamin HCL) Fort Dodge Hayvan Sağlığı 0856-2013-01 Alternatif enjektabl anestezi
Beprenex (Buprenorfin HCL) Reckitt Benckiser, Sağlık (UK) Ltd 12496-075-7-1 0.3 mg / ml '
Eritromisin oftalmik merhem, USP,% 0.5 Akron 17478-070-35 Nakledilen göze profilaktik Uygulamalı
% 0.9 Sodyum Klorür (Tuz) Hospira Inc 0409-7983-03 Iv enjeksiyon için. Steril
PBS Gibco 10010-023 1X. Steril
CMRL orta 1066 Cellgro 98-304-CV Desteklenmiş, CIT modifikasyonu. Adacıklar için tercih edilen medya

Kaynaklar

  1. Weigert, R., Sramkova, M., Parente, L., Amornphimoltham, P., Masedunskas, A. Intravital microscopy: a novel tool to study cell biology in living animals. Histochem. Cell Biol. 133 (5), 481-491 (2010).
  2. Leibiger, I. B., Caicedo, A., Berggren, P. O.

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Yeniden basım ve izinler

Daha fazla makale keşfet

Ön Kamara TransplantasyonuPankreatik Adacık TransplantasyonuFare Göz GörüntülemeBoylamsal İn Vivo Görüntülemeİntravital Görüntüleme TekniğiKanül Yükleme ProsedürüMotorize Şırınga SürücüsüKornea İnsizyon YöntemiOküler Doku Aşılama