Yöntem makalesi

Modifiye Manşet Tekniği Sıçangiller Servikal Kalp Nakli Modeli

DOI:

10.3791/50753

⸱

12 Ekim 2014

 ,  ,  ,  ,  ,  ,  ,  ,  ,  , 
1Center of Operative Medicine, Department of Visceral, Transplant and Thoracic Surgery, Innsbruck Medical University, 2Department of Plastic and Reconstructive Surgery, Johns Hopkins University School of Medicine

* These authors contributed equally

Bu makalede

Özet

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Sıçangil modeli servikal kalp nakli immünolojik hem de iskemi reperfüzyon yaralanması çalışmasından için uygundur. Biz olmayan bir dikiş manşet tekniği kullanılarak prosedür değiştirilmiş ve bu yaklaşım ile 1.000 'den fazla başarılı nakli gerçekleştirildi.

Burada, videoyu tamamlamak için bu tekniğin ek ayrıntıları.

Özet

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Fare model monoklonal antikorların çeşitli beri araştırılmaktadır özel ilgi ve ticari olarak doğuştan tanımlandığı gibidir ve boşaltma suşları in vivo çalışmalar mekanik gerçekleştirmek için kullanılabilir. Bir dikiş tekniği kullanılarak kalp nakli modeller ilk kez başarıyla sıçanlarda geliştirilen iken, aynı derecede yaygın kullanılan kemirgen eşdeğer içine çeviri mikrocerrahi işlemin teknik karmaşıklığı nedeniyle elde değildi. Buna karşılık olarak, aynı zamanda, farelerde geliştirilmişken olmayan dikiş manşet teknikleri, farelerde başarılı bir şekilde 1-3 kullanılmak üzere adapte edilmiştir. Revaskülarizasyon için bu teknik bir polietilen manşet alıcı gemiyi tersine çevrilmesi iki önemli adım I) içerir; II) eski everte alıcı geminin üzerinde donör gemiyi çekerek ve çevresel bir kravat ile yerde tutuyor. Bu endotel tabakası, kısa çalışma süresi ve çok yüksek açıklık oranlarının 4 bir sürekliliğini sağlar. t "> vasküler anastomoz için bu tekniği kullanarak biz karotis arter girişi arteriyel için.% 95 genel başarı oranı ile 1.000 'den fazla servikal kalp nakli gerçekleştirilen ve proksimal aort arkı nakledilen kalbin bir retrograd perfüzyon sonuçlanan anastomoz edildi. venöz drenaj için greft pulmoner arter alıcının 5 eksternal juguler ven ile anastomoz edildi.

Burada, videoyu tamamlamak için bu tekniğin ek ayrıntıları.

Giriş

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Kalp transplantasyonu farklı son dönem kalp hastalıklardan muzdarip hastalar için tercih tedaviyi temsil eder. Cerrahi tekniklerin, enfeksiyonların daha etkili profilaksi, ve yeni immunsupresif rejimler ilerlemeler organ nakli 6 belirgin geliştirilmiş sonucunu sonuçlandı. Ancak, uzun dönem greft sağkalım son yıllarda üzerinde 7 titizlikle geliştirilmiş değil. Nakli damar sertliği ile karakterize kronik rejeksiyon, uzun dönem greft sağkalım 8-11 önemli bir engel olmaya devam etmektedir.

Farelerde heterotopik kalp nakli modeli akut dönemde immünolojik mekanizma analizi için önemli ve geçerli bir araç yanı sıra kronik rejeksiyon 12-15 sağlar.

Bugüne kadar en sık nakli modeli dikiş tekniği kullanılarak karın fare kalp nakli hala. Donör kalbin çıkan aort a anastomoz edilirbdominal aort ve pulmoner arter alıcının vena kava anastomoz edilir. Sütür modelin mikrocerrahi zorluk çoğu 16,17 dikilir gemilerin, küçük boyutuna bağlıdır.

Dikiş modelinin aksine kalp eksternal juguler ven pulmoner arter ve karotis arter donörün aort anastomoz edilir alıcının boyun bölgesinde yerleştirilir.

Manşet tekniği kullanılarak servikal kalp nakli modelinin gelişim mantığı bu modelin geniş uygulamasını sağlayacak temel mikrocerrahi becerileri ile yüksek başarı oranları elde sağlayan bir hayvan modeli, sahip oldu. Bu yöntemin önemli bir avantajı dikiş modeli 18 ile karşılaştırıldığında kanama ve tromboz gibi komplikasyonları ile ilgili önemli ölçüde daha az meydana anastomoz bulunmaktadır.

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Protokol

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Hayvanlar, bariyer patojenden ari bir yere yerleştirilmiştir. Bütün hayvanlar Ulusal tarafından Tıbbi Araştırmalar Ulusal Derneği "ve" Ulusal Bilimler Akademisi tarafından hazırlanan Laboratuvar Hayvanları "Bakımı ve Kullanımı Kılavuzuna tarafından formüle yayınlanan" Laboratuar Hayvan Bakımı Esasları "uyarınca insan bakım almak Sağlık Enstitüleri (NIH Yayın yok. 86-23, 1985 revize). Tüm deneyler Eğitim, Bilim ve Kültür Avusturya Maliye Bakanlığı tarafından onaylanır.

1. Alıcı Hazırlık

  1. Xylazine (5 mg / kg vücut ağırlığı) ve ketamin (100 mg / kg vücut ağırlığı) bir İM enjeksiyonu ile alıcı hayvan anestezisi.
  2. Hayvanın yan servikal bölgedeki tüm saç çıkarın ve operatif field chlorhexdine kullanarak üç kez fırçalayın.
  3. Operatif sahada yatar pozisyonda fare yerleştirin.
  4. Sonraki boyun inc bir cilt kesi yapmaksağ alt çeneye izyonu.
  5. Daha sonra, açık açık, sağ eksternal juguler ven (EJV) harekete geçirmek ve ligatürlerin arasındaki dalları bölmek.
  6. Sonra manşet vücut üzerinde proksimal güdük tersine çevrilmesi için yeterli uzunlukta bırakın emin ligatures arasındaki EJV bölmek.
  7. Sonraki submandibular bezin sağ lobunu çıkarın.
  8. Venöz anastomoz için polietilen manşet aracılığıyla EJV proksimal ucunu geçmek ve bir mikro kelepçe ile manşet sapına bunu düzeltmek.
  9. , Geminin sonunda ligatürün çıkarın manşet lümen tersine çevrilmesi ve 8-0 ipek döngü (Şekil 1a) ile sabitleyin.
  10. Ardından karotis arter erişmek için bipolar koter ile sağ SKM kas transect.
  11. Sonraki karotis arter harekete geçirmek ve bitişik harfler arasındaki gemi kesti.
  12. Sonraki karotis arter harekete geçirmek ve bitişik harfler arasındaki gemi kesti.
  13. Dis geçmektal manşet yoluyla geminin sonu ve arter kelepçe ile sabitleyin.
  14. Teknenin sonunda bitişik harfleri çıkarın ve vasküler dilatatörler kullanılarak gerilmek lümeni. Sonraki, EJV benzer şekilde, manşet arter ters çevrilecek ve 8-0 ipek döngü ile sabitleyin.

2. Kalp İhale

  1. Xylazine (5 mg / kg vücut ağırlığı) ve ketamin (100 mg / kg vücut ağırlığı) bir İM enjeksiyonu ile verici fare anestezisi. Daha sonra hayvanın karın bölgesi tüm tüylerden. Chlorhexdine kullanarak ameliyat alan üç kez fırçalamaktadır. Operatif alanın üzerine sırt üstü yatırıldı fare daha önce anlatıldığı gibi sonraki bir yer.
  2. Bir orta hat karın kesi ardından, inferior vena kava (IVC) ortaya çıkarmak için sola Q-ipuçları iç organları geri çekin.
  3. Heparinizasyon için IVC içine 4 heparin- natriyumhidroksid çözümü: 1 400 ul enjekte edilir.
  4. Acc kazanmak için cranially üzerinde ön göğüs duvarına bir torakotomi gerçekleştirin ve katkalbe ess.
  5. Sonraki, timus çıkarın ve sol ve sağ superior vena kava kesiler havalandırma yapmak.
  6. Daha sonra, brakiosefalik şube düzeyinde bir 27 G şırınga ile aort arkı kanül ile 4 ° Celsius HTK solüsyonu ile retrograd kalp serpmek.
  7. 8-0 ipek ile alt ve üst vena kava bağlanır ve bitişik harfler distal onları bölmek.
  8. Sonraki önceki kanül seviyesinde aort arkı bölmek ve pulmoner gövde serbest incelemek ve mümkün olduğunca distale bölmek.
  9. Bunun ardından, bir yığın ligasyonu ile pulmoner venlerin kravat ve bitişik harfler distal onları bölmek.
  10. Son olarak, donör sitesinden kalp çıkarın ve 4 ° Celsius HTK solüsyonu (Şekil 1b) saklayın.

3. İmplantasyon

  1. Bir baş aşağı konumda alıcı boyun bölgesinde kalp greft yerleştirin (Şekil 1c ).
  2. Sonraki alıcının ven manşet yapı üzerinde kalp akciğer gövde çekin ve bir ipek döngü (Şekil 1d) ile sabitleyin.
  3. Greft aorta ve aynı moda (Şekil 1e) olarak alıcı hayvanın everte arter arasındaki anastomoz gerçekleştirin.
  4. Daha sonra, arteryel kelepçe ardından ilk venöz kelepçe, kaldırın. Kalp reperfuzyona ve 1-2 dakika içinde yenerek başlar. Reperfüzyon sırasında sıcak (35 ° C) tuzlu su ile kalp nemlendirin.
  5. Son olarak, sürekli 6-0 dikişler (Şekil 1e) ile cerrahi yara kapatın.

4. Ameliyat Sonrası Bakım, Endpoint

  1. Sıvı replasmanı için postoperatif 0.3 ml normal tuzlu ip vazgeçtim.
  2. Anesteziden awaking kadar bir ısı lambası altında hayvan yerleştirin.
  3. Uyanık, onlar yiyecek ve suya serbestçe ulaşabilir barınak ortamına dönüş hayvan.
  4. MIilk 7 gün boyunca ameliyat sonrası ağrı durumuna küçült Karprofen (4 mg / kg her 12 saatte subkutan (sc), tatbik. Ek olarak, 5 gün süre ile hemen işleminden sonra) Buprenorphin her 12 saat (0.1 mg / kg sağlar.
  5. Doğru besin alımını değerlendirmek için her alıcı hayvan haftalık ağırlığını (g) edinin. Daha fazla% 10-15 kilo kaybı bulgusu cerrahi, güncel, ilgisizlik, sakatlayıcı veya çok bükülmüş arka ağırlığına kıyasla varsa, klinik bitiş noktasına ulaşmadan önce, terminal izofluran inhalasyon kullanmadan hayvan kurban. Kalp reddedildi sonra da hayvan kurban.

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Sonuçlar

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Şekil 2 tam MHC uyumsuz C57BL / 6 alıcılarının içine naklinden sonra BALB / c vericilerden kalp allogreftlerinin temsili sağkalım verileri gösterir. Kalpler nakli sonrası günde 7 ± 1 reddedilir. Nakledilen allogreftin parmak palpasyonu allogreft reddinin zamana bağlı ders tespit etmek için hassas bir yöntemdir. Dizimizin yapılan tüm singenik kalp nakilleri süresiz atlattı (> 150 gün).

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Tartışma

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Vaskülarize allogreft reddi sadece yetersiz m vitro modeller kullanılarak değerlendirilebilir farklı adımları bir bolluk gerektirir. Alıcıların sensitizasyon, antijen işleme ikincil lenfoid organlarda değil, aynı zamanda, bağışıklık yetkin hücrelerin farklılaşması ve proliferasyonu gibi in vivo fenomen daha iyi karakterize edilmiş bulunmaktadır. Hayvan modelleri böylece translasyonel araştırma 16 için ideal bir araçtır. Fare modelleri hala transgenik ve gen nakavt fareler, çünkü geniş bir te...

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Açıklamalar

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Bu çalışma, Innsbruck Tıp Üniversitesi'nin "MUI-START Förderungsprogramm" hibesi #207, "Medizinischer Forschungsfond Tirol"ün #2010022010 hibesi ile desteklenmiştir.

Teşekkürler

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Yazarlar, rekabet eden hiçbir mali çıkarları olmadığını beyan ederler.

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Malzemeler

Bu makalede kullanılan malzemelerin listesi
AdŞirketKatalog numarasıYorumlar
Yaşargil Klips Mini Kalıcı 7 mmAesculapFE720K
Mikro Damar KlipsiS & TB1 00396 V
MikromakasFST14075-11
Gemi YükleyiciS & TD-5a.2 00125
MicroforcepsFSTDumont 11271- 30
KlipsleyiciS & TCAF-4 00072
Mikro damar klipsiS & TB1 00396 V

Kaynaklar

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Brandacher, G., et al. Tetrahydrobiopterin compounds prolong allograft survival independently of their effect on nitric oxide synthase activity. Transplantation. 81, 583-589 (2006).
  2. Schneeberger, S., et al. The effect of secretory leukocyte protease inhibitor (SLPI) on ischemia/reperfusion injury in cardiac transplantation. Am J Transplant. 8, 773-782 (2008).
  3. Sucher, R., et al. IDO and regulatory T cell support are critical for cytotoxic T lymphocyte-associated Ag-4 Ig-mediated long-term solid organ allograft survival. JImmunol. 188, 37-46 (2012).
  4. Yamashita, K., et al. Heme oxygenase-1 is essential for and promotes tolerance to transplanted organs. FASEB J. 20, 776-778 (2006).
  5. Kienzl, K., et al. Proteomic profiling of acute cardiac allograft rejection. Transplantation. 88, 553-560 (2009).
  6. Aurora, P., et al. Registry of the International Society for Heart and Lung Transplantation: tenth official pediatric lung and heart/lung transplantation report--2007. J Heart Lung Transplant. 26, 1223-1228 (2007).
  7. Häyry, P. Chronic allograft vasculopathy new strategies for drug development. Transplant Proc. 30, 3989-3990 (1998).
  8. Hosenpud, J. D. Immune mechanisms of cardiac allograft vasculopathy an update. Transpl Immunol. 1, 237-249 (1993).
  9. Libby, P., Pober, J. S. Chronic rejection. Immunity. 14, 387-397 (2001).
  10. Kouwenhoven, E. A., de Bruin, R. W., Heemann, U. W., Marquet, R. L., Ijzermans, J. N. Late graft dysfunction after prolonged cold ischemia of the donor kidney inhibition by cyclosporine. Transplantation. 68, 1004-1010 (1999).
  11. Kouwenhoven, E. A., Ijzermans, J. N., de Bruin, R. W. Etiology and pathophysiology of chronic transplant dysfunction. Transpl Int. 13, 385-401 (2000).
  12. Chen, Z. H. A technique of cervical heterotopic heart transplantation in mice. Transplantation. 52, 1099-1101 (1991).
  13. Huang, X., Chen, D., Chen, L. [A modified model of cervical heterotopic cardiac transplantation for chronic rejection research]. Zhongguo Xiu Fu Chong Jian Wai Ke Za Zhi. 22, 1508-1510 (2008).
  14. Hasegawa, T., Visovatti, S. H., Hyman, M. C., Hayasaki, T., Pinsky, D. J. Heterotopic vascularized murine cardiac transplantation to study graft arteriopathy. Nat Protoc. 2, 471-480 (2007).
  15. Wang, C. Y., et al. Suppression of murine cardiac allograft arteriopathy by long-term blockade of CD40-CD154 interactions. Circulation. 105, 1609-1614 (2002).
  16. Matsuura, A., Abe, T., Yasuura, K. Simplified mouse cervical heart transplantation using a cuff technique. Transplantation. 51, 896-898 (1991).
  17. Tomita, Y., et al. Improved technique of heterotopic cervical heart transplantation in mice. Transplantation. 64, 1598-1601 (1997).
  18. Zhou, Y., Gu, X., Xiang, J., Qian, S., Chen, Z. A comparative study on suture versus cuff anastomosis in mouse cervical cardiac transplant. Exp Clin Transplant. 8, 245-249 (2010).
  19. Corry, R. J., Winn, H. J., Russell, P. S. Primarily vascularized allografts of hearts in mice. The role of H-2D, H-2K, and non-H-2 antigens in rejection. Transplantation. 16, 343-350 (1973).
  20. Kamada, N., Calne, R. Y. Orthotopic liver transplantation in the rat. Technique using cuff for portal vein anastomosis and biliary drainage. Transplantation. 28, 47-50 (1979).
  21. Zimmermann, F. A., et al. Techniques for orthotopic liver transplantation in the rat and some studies of the immunologic responses to fully allogeneic liver grafts. Transplant Proc. 11, 571-577 (1979).
  22. Maglione, M., et al. Donor pretreatment with tetrahydrobiopterin saves pancreatic isografts from ischemia reperfusion injury in a mouse model. Am J Transplant. 10, 2231-2240 (2010).
  23. Heron, I. A technique for accessory cervical heart transplantation in rabbits and rats. Actapathologica et microbiologica Scandinavica Section A, Pathology. 79, 366-372 (1971).

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Yeniden basım ve izinler

Bu JoVE makalesinin metnini veya şekillerini yeniden kullanmak için izin iste

İzin iste

Etiketler

Murine Kalp TransplantasyonuVask ler AnastomozMikrocerrahi Prosed rHeterotopik TransplantasyonOrtak Karotis ArterEksternal Juguler VenRetrograd Perf zyonBa ar OranTransplant mm nolojisi

İlgili makaleler