Willis perforasyon intralüminal Circle subaraknoid kanama standartlaştırılmış bir fare modeli tarif edilmektedir. Gemi perforasyon ve subaraknoid kanama intrakranial basınç izleme tarafından izlenir. Buna ek olarak, çeşitli çok önemli parametreler kaydedilir ve fizyolojik koşulları sağlamak için kontrol edilir.
Bu içeriği görüntülemek için JoVE aboneliğiniz gereklidir. Giriş yapın veya ücretsiz denemenizi bugün başlatın.
Bu makalede
Özet
Özet
Bu Video yayında subaraknoid kanama (SAK), standart bir fare modeli sunulmuştur. Kanama Willis perforasyon (KİP) endovasküler Çemberi tarafından uyarılan ve intrakranial basınç (ICP) izleme ile kanıtlanmıştır. Böylece arteriyel dolaşımı çevreleyen subaraknoid boşluk ve serebellar çatlaklar homojen bir kan dağılımı elde edilir. Vücut ısısı, sistemik kan basıncı, kalp hızı ve hemoglobin doygunluk: Hayvan Fizyolojisi, entübasyon, mekanik ventilasyon, ve çeşitli fizyolojik ve kardiyovasküler parametreler sürekli on-line izleme tarafından yapılmaktadır. Bu şekilde serebral perfüzyon basıncı sıkı bir şekilde ekstravaze kan daha az değişken bir hacim içinde elde izlenebilir. Bu farelerde endovasküler filament perforasyon daha iyi standardizasyonu sağlar ve tüm model yüksek tekrarlanabilir yapar. Bu nedenle, vahşi tip ve genetik ve farmakolojik çalışmaları için patofizyolojik hazırly değişmiş fareler.
Giriş
SAK hastalar için en yararlı sonuç ile inme alt tipi olduğu: Hastaların% 40 kanama 1 sonra bir ay içinde ölür ve hayatta kalanlar nadiren klinik olarak olumlu bir sonuç var.
Spontan UAHS (% 80) büyük çoğunluğu, çoğunlukla arter, baziler arter ve orta serebral arter (MCA) 2 iletişim anterior ve posterior boyunca yer intrakranial anevrizmaların yırtılması kaynaklanır.
Bu anevrizma hayvanlarda Modele zordur ve bu nedenle SAK hayvan modelleri ya da subaraknoid boşluk / beyin veya ventriküllere subaraknoid kabın endovasküler delme ile kan enjeksiyonu ile gerçekleştirilir.
Kan hacmi doğrudan 3 kontrol edilebilir gibi cisterna magna içine otolog kan enjeksiyonu yapmak kolay ve tekrarlanabilir. Ne yazık ki SAK fizyopatolojinin bazı yönleri, örneğindamar yaralanması, bu prosedür ile model olamaz. SAK indüksiyonu için başka bir teknik yaklaşım, bir intrasisternal ven 4 açılmasıdır.
Ancak, MCA şube intraluminal CWP modelleri insanlarda patofizyolojisi en yakın 5 prosedür olarak görünmektedir. Yöntem, Veelken ve arkadaşları 6,7 ile Bederson ve arkadaşları tarafından ve aynı zamanda geliştirilmiş ve ilk olarak sıçanlarda tarif edilmiştir. Daha sonra intraluminal perforasyon modeli farelere 8,9 uyarlanmıştır. Bir filament dış karotid arter (ECA) içine sokulur ve iç karotid arter (ICA) ile kafa tabanına ilerletilir. MCA dallanma noktasında filaman gemi deler ve kafatası tabanında subaraknoid boşluk içine bir kanama neden olur. Kan daha sonra çatlamalar ve kan damarları boyunca kalan subaraknoid alana dağıtır. Kanama perforasyon yerinde pıhtı oluşumu durdu, ama rebleedings, WH edilirich hastalarda 10, oluşabilir genellikle zararlıdır. Buna göre, endovasküler lif modeli son yıllarda yaygın olarak kullanılan SAK modeli oldu. Filaman perforasyon modelinde en sık bahsedilen dezavantajı kanama hacmi doğrudan kontrol edilemeyen ve bu nedenle de değişken olabilir olmasıdır. Bu değişkenlik anlamlı hayvan fizyolojisi ve post-hemorajik ICP sıkı kontrolü ile azaltılabilir.
Fareler, genetik olarak modifiye edilmiş suşların çok sayıda mevcut olan büyük avantaj vardır. Ancak, küçük boyutları için cerrahi işlemler büyük türleri, örneğin, sıçan ya da tavşan daha karmaşık olma eğilimindedir. Bu nedenle farelere sıçanlar için geliştirilen tekniklerin küçültülür genellikle fareler hemoglobin saturasyonu ve kalp hızı izleme için çok sınırlı bir vücut ağırlığı ve kan hacmi noninvaziv kan basıncı ve kan gazı analizi için teknikleri yanı sıra gibi örneğin istenen sonuçlara yol açmazmümkün uygulanmalıdır. Buna uygun olarak, mevcut yayının amacı farelerde SAK için filaman delme modeli tanımlamak için ve bu model bir standart ve yüksek ölçüde tekrarlanabilir biçimde yapılabilir ne kadar göstermektir.
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Protokol
Tüm cerrahi işlemler etik incelemeye tabi ve Yukarı Bavyera hükümeti (referans numarası: 55.2-1-54-2532.3-13-13 ve -2532-136-11) tarafından onaylanmıştır. Hayvanlar yaklaşık 25 g bir vücut ağırlığına sahip erkek C57BL / 6 fareleri bulunmaktadır.
1.. Hayvan Preparasyon
- Bir odacık içine fare koyarak anestezi neden. Hayvan bilincini kaybedene kadar% 5 izofluran ile odasını yıkayın.
- Periton boşluğu içine enjekte edilir, önceden karıştırılmış anestezi: fentanil (0.05 mg / kg), midazolam (5 mg / kg) ve medetomidin (0.5 mg / kg). İşlem sırasında önce ve düzenli olarak refleksleri kontrol edin. Anesteziyi muhafaza etmek üzere saat başı başlangıç miktarının üçte birini yeniden enjekte.
- Bir 20 G venöz kateter 11 yapılmış bir tüp ile orotracheally entübasyon. Entübasyon eğimli bir platform (30 °) üzerinde hayvan düzeltmek için, bükülmüş forseps ile dilini geri operasyon mikroskobu altında ses telleri görselleştirmek ve trakea içine tüp takıninspirasyon sırasında.
- Yüzükoyun pozisyonda fare yerleştirin ve pamuklu bir parça veya bir microcapnograph ile tüpün doğru yerleşimini kontrol edin.
- Respiratöre entübasyon tüpü bağlayın. 180-220 nefes / dak ve 200-250 ul bir vuruş hacmi bir frekans ile% 25 oksijen ile takviye oda havası ile fare havalandırın.
- Microcapnograph için entübasyon tüpü bağlayın. Havalandırma frekansını ayarlayarak 30 mmHg son ekspirasyon pCO 2 koruyun.
- Bir rektal sıcaklık probu yerleştirin ve 37 ° C iç vücut ısısını korumak için de bir ısıtma pedi üzerine hayvan.
- Sağ arka pençe üzerinde halka şeklindeki Pulsoximeter sensörü uygulanır.
- Bir makas ile kafatası üzerinde cildi açın. Kesi yaklaşık 0.5 cm uzunluğunda ve kulak ve gözün arasında olmalıdır.
- Temporal kemik bir neşter ile sol temporal kas teşrih.
- Lazer Doppler debimetre (LDF) prob tutkalsol temporal kemik. Tutkal sertleşir kadar sabit bir pozisyonda probu tutun.
- Sol temporal kemik içine bir diş matkap ile yaklaşık 1.5 mm çapında bir delik delin. Isı hasarı önlemek için tuzlu su ile kemik soğutun.
- Kafatası boşluğunun içine ICP probu yerleştirin. Beyin doku hasarı ve kanama önlemek için dorsal mümkün olduğunca ileri itin.
- Prob doğru pozisyonda ise, düzeltmek, ve çimento ile mühür. 5 dakika için çimento kurumasını bekleyin.
- Sırtüstü pozisyonda dikkatle fareyi çevirin.
- Sürekli kan basıncı izlenmesi için, sol femoral arter kateterize.
- Kan basıncı izleme cihazı için femoral kateter bağlayın.
2. SAK İndüksiyon
- Çene sternum bir makasla (2 cm) ile deriyi açın. Açık açık bağ dokusunu incelemek ve bir kenara tükürük bezleri itin.
- Sol karotis arter (CCA) ortaya çıkarmak ve harekete geçirmek. KoruCCA gibi aynı bağ dokusu kılıf çalışır vagus siniri,. Kranial Taşı ve aynı tekniği kullanarak ICA ve ECA ortaya çıkarmak ve harekete.
- Kadar cranially mümkün ECA Arter.
- ECA'nın etrafında filament için iki tane daha önceden düzenlemek ligasyonu.
- Microclips ile geçici CCA ve ICA tıkamak. Bir mikroklip aplikatör ile microclips yerleştirin. Klipleri nazikçe geri çekerek doğru uygulanır emin olun.
- Bir gemi makas ile ECA içine filament yerleştirilmesi için bir delik açın.
- ECA içine 12 mm uzunluğa sahip bir Prolene 5-0 filament yerleştirin.
- Bir danışıklı ligasyonu ile ekleme siteyi kapatın.
- CCA ve ICA bir mikroklip aplikatör ile microclips çıkarın.
- ICP yükselir kadar ICA içine bir forseps ile filament ilerlemek. ICP ani yükselişi kanama uyarıldığını gösterir.
- Hemen filamanın çekiniz ve pr hem kapatarak ECA Arterardışık earranged ligasyonu. Bu ekleme sitenin dışında kanama önler.
- Cilt yarayı dikin.
- Başka bir 20 dakika boyunca hayvanın fizyolojik parametreleri izlemek.
- ICP ve LDF probları kaldırmak ve cilt yara sütür.
3. Deney Sonu
- PBS içinde 20 ml% 4 PFA (4 ° C) ve ardından tuzlu su (oda sıcaklığı) 20 ml transcardially hayvan serpmek.
- Kafatasının dışında beyin teşrih. Orta hatta ve yörünge boşlukların arasındaki kafatası kesti. Daha sonra beyinden gelen kemik soyun.
- Subaraknoid aralığa kan dağılımını değerlendirmek.
4. Survival Cerrahi Durumunda Düşünceler (video gösterilmemiştir)
- Doğrudan anestezi indüksiyon sonrası postoperatif analjezi için Carprofen (4 mg / kg subkutan) enjekte edilir. Postoperatif gözlem süresi boyunca Carprofen (4 mg / kg deri altından), her 24 saat enjekte edilir.
- Bunun yerine invaziv kan basıncı ölçümü invaziv olmayan kan basıncı izleme sistemi kullanır.
- Nalokson (1.2 mg / kg), flumazenil (0.5 mg / kg) ve atipamezol (2.5 mg / kg) deri altından maddeler antagonize anestezi enjektö sonlandırılması için.
- Hayvan ekstübe.
- Refleksleri kazanmak sonra önceden ısıtılmış odasına hayvan koymak. 24 saat boyunca, yaklaşık 32 ° C 'de hayvan tutun.
- Hayvanlar ameliyattan sonra ilk saatlerde spontan solunum ve genel durum düzenli olarak kontrol edilir. Beyin sapı etkilenen ise hayvanların solunum problemleri ve ötenazi olmalı.
- Hayvanlar genel durumu ve vücut ağırlığı gibi nörolojik ve duyu eksikliklerinin 15 için her gün kontrol edilir.
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Sonuçlar
Ölüm oranı
Cerrahi teknik hakim sonra prosedür ameliyat sırasında hiçbir ölüm temin etmez. Aynı zamanda kanama hemen hemen bütün hayvanlarda elde edilebilir. Postoperatif mortalite hayvanların çoğu ameliyattan sonra (Şekil 5) 1. gün ölüyor ile% 30-40 olduğunu.
ICP SAK sonrası değerleri
Kanama önce ICP yaklaşık 4 mmHg. 120 mmHg ICP keskin bir artış sonuçlar kanama. ICP değerler daha sonra, 5 dakika ile yaklaşık 30 mmHg
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Tartışma
SAK sonrası tedavi seçenekleri kısıtlı ve çoğunlukla etkisiz vardır. Bu nedenle post-hemorajik beyin hasarının patofizyolojisi daha yeni tedavi hedefleri belirlemek ve yeni tedavi yaklaşımları geliştirmek için anlaşılması gerekir. Standardize ve genetiği değiştirilmiş hayvanlar, yani farelerde, iyi tekrarlanabilir hayvan modelleri gibi soruşturma için çok önemlidir. Yakından insanlarda patofizyolojiye benzer olarak cwp modeli SAK için yaygın olarak kullanılan bir model haline gelmiştir, ancak farelerde kullanım...
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Açıklamalar
Yazarlar ifşa hiçbir şey yok.
Teşekkürler
Güncel araştırma Solorz-Zak Araştırma Vakfı tarafından finanse edilmektedir.
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Malzemeler
| Ad | Şirket | Katalog numarası | Yorumlar |
|---|---|---|---|
| Equipment | |||
| >operation mikroskobu | Leica | KL2500 | |
| izofluran buharlaştırıcı | Harvard | Instruments Sürekli Akışlı Buharlaştırıcı | |
| solunum cihazı | Hugo Sachs | Minivent 845 | |
| mikrokapnograf | Hugo Sachs | Type 340 | |
| sıcaklık kontrol cihazı | FHC | DC Sıcaklık Kontrol Cihazı | |
| diş matkabı | Paggen | Labset- N | |
| ICP monitörü | Codman | ICP monitörü | |
| kan basıncı monitörü | AD Instruments | Bridge Amp FE221 | |
| şırınga pompası | Dünya Hassas Aletler | SP101IZ | |
| pulsoksimetre | Kent Scientific | MouseSTAT | |
| LDF | Perimed | Periflux 5000 | |
| analog veri monitörü | AD Instruments | Power Lab 16/35< | |
| ICP prob fiksasyonu için çimento LDF prob fiksasyonu için | tutkalı Bob Smith Industries Siyanoakrilat yapıştırıcı (Maxi Cure ve Insta Set) | ||
| venöz kateter | Johnson Johnson Jelco | kanatlı i.v. kateter; Femoral kateter için REF 4076 | modifiye entübasyon tüpü |
| tüpü | borusu Smiths Medical | İnce Delikli Polietilen Boru; İç çap 0,28 mm, Dış çap 0,61 mm; REF 800/100/100 | 30 cm uzunluğa kadar kesilmiş |
| filament | Ethicon | Prolene 5-0 | 12 mm uzunluğa kadar kesilmiş |
| cerrahi ekipman | İnce Bilimsel Aletler | forseps medikal #5, damar makası 8 cm, mikroklips 4 mm çene |
Kaynaklar
- Cahill, J., Zhang, J. H. Subarachnoid hemorrhage: is it time for a new direction. Stroke. 40, 86-87 (2009).
- van Gijn, J., Kerr, R. S., Rinkel, G. J. Subarachnoid haemorrhage. Lancet. 369, 306-318 (2007).
- Lin, C. L., et al. A murine model of subarachnoid hemorrhage-induced cerebral vasospasm. J. Neurosci. Methods. 123, 89-97 (2003).
- Altay, T., et al. A novel method for subarachnoid hemorrhage to induce vasospasm in mice. J. Neurosci. Methods. 183, 136-140 (2009).
- Feiler, S., Friedrich, B., Scholler, K., Thal, S. C., Plesnila, N. Standardized induction of subarachnoid hemorrhage in mice by intracranial pressure monitoring. J. Neurosci. Methods. 190, 164-170 (2010).
- Bederson, J. B., Germano, I. M., Guarino, L. Cortical blood flow and cerebral perfusion pressure in a new noncraniotomy model of subarachnoid hemorrhage in the rat. Stroke. 26, 1086-1091 (1995).
- Veelken, J. A., Laing, R. J., Jakubowski, J. The Sheffield model of subarachnoid hemorrhage in rats. Stroke. 26, 1279-1283 (1995).
- Kamii, H., et al. Amelioration of vasospasm after subarachnoid hemorrhage in transgenic mice overexpressing CuZn-superoxide dismutase. Stroke. 30, 867-871 (1999).
- Parra, A., et al. Mouse model of subarachnoid hemorrhage associated cerebral vasospasm: methodological analysis. Neurol. Res. 24, 510-516 (2002).
- Broderick, J. P., Brott, T. G., Duldner, J. E., Tomsick, T., Leach, A. Initial and recurrent bleeding are the major causes of death following subarachnoid hemorrhage. Stroke. 25, 1342-1347 (1994).
- Thal, S. C., Plesnila, N. Non-invasive intraoperative monitoring of blood pressure and arterial pCO2 during surgical anesthesia in mice. J. Neurosci. Methods. 159, 261-267 (2007).
- Hockel, K., Trabold, R., Scholler, K., Torok, E., Plesnila, N. Impact of anesthesia on pathophysiology and mortality following subarachnoid hemorrhage in rats. Exp. Transl. Stroke Med. 4, 5(2012).
- Wang, Z., Schuler, B., Vogel, O., Arras, M., Vogel, J. What is the optimal anesthetic protocol for measurements of cerebral autoregulation in spontaneously breathing mice? Exp. Brain Res. 207, 249-258 (2010).
- Schwartz, A. Y., Masago, A., Sehba, F. A., Bederson, J. B. Experimental models of subarachnoid hemorrhage in the rat: a refinement of the endovascular filament model. J. Neurosci. Methods. 96, 161-167 (2000).
- Feiler, S., Plesnila, N., Thal, S. C., Zausinger, S., Scholler, K. Contribution of matrix metalloproteinase-9 to cerebral edema and functional outcome following experimental subarachnoid hemorrhage. Cerebrovasc. Dis. 32, 289-295 (2011).
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Yeniden basım ve izinler
