Bir N-bütil-N-(4-hidroksibutil) nitrozamin bağımlı mesane kanseri modelinde insan müsin 1 (MUC1), test amacıyla MUC1 yönlendirilmiş immünoterapi için transgenik farenin olarak geliştirilmiştir. Bir MUC1 hedefli bir peptid aşının sonra, MUC1 bir sitotoksik T-lenfosit yanıt sitokin seviyeleri ve T-hücresi spesifik aktivitesi ölçülerek teyit edilmiştir.
Bu içeriği görüntülemek için JoVE aboneliğiniz gereklidir. Giriş yapın veya ücretsiz denemenizi bugün başlatın.
Yöntem makalesi
Bağışıklık Sağlam İnsan MUC1 Transgenik Farelerde İnvaziv Geçici Hücre Mesane Karsinomu indüksiyon: immünoterapi Kalkınma İçin Bir Model
Bu makalede
Özet
Özet
Invaziv mesane kanseri bir klinik öncesi modeli insan müsin 1 (MUC1) immünoterapi ve / veya sitotoksik kemoterapi değerlendirmek amacıyla transgenik (MUC1.Tg) farelerde geliştirilmiştir. Mesane kanseri, C57BL / 6 fareleri (MUC1.Tg ve yabani tip) 3.0 mg / gün dozunda kanserojen N-bütil-N-(4-hidroksibutil) nitrozamin (OH-BBN) ile oral olarak tedavi edildi, 5 gün / haftada teşvik etmek için 12 hafta boyunca. Tümör gelişimi sırasında sitokin profili üzerinde, OH-BBN etkilerini değerlendirmek için, tam kan submandibuler tedavi öncesinde kanamaları ve her dört haftada ile toplanmıştır. Buna ek olarak, MUC1 hedefli bir peptid, aşı ve plasebo sekiz hafta boyunca haftalık fareler gruplara uygulandı. Tümör gelişimi ve aşağıdaki aşılama sırasında serum sitokin Multiplex florometrik microbead immunoanalyses yapıldı. Çıkışta, interferon gamma (IFN-γ) / MUC1 spesifik T-hücresi bağışıklık tepkisi ve tümör Çeşidi histopatolojik değerlendirme için interlökin-4 (IL-4) ELISPOT analizive sınıf yapıldı. Sonuçlar göstermiştir ki: (1) MUC1.Tg ve vahşi hem tip farelerde mesane kanseri insidansı% 67 idi, (2) 2:1 oranında geliştirilen geçiş hücreli karsinom (TCC) skuamöz hücreli karsinom (SCC) ile karşılaştırıldığında , (3), inflamatuvar sitokinlerin tümör gelişimi sırasında zamanla arttığı ve (4) peptid aşılama, Th1-polarize sitokin profili ve bir MUC1 spesifik T-hücresi tepkisi indükler. MUC1.Tg farenin tüm tümörlerde MUC1 ifadesi için pozitiftir ve MUC1.Tg ve vahşi tip farelerde tüm tümörlerin yaklaşık yarısı invaziv. Sonuç olarak, farmakolog, immünologlar, patologlar ve moleküler biyologların çabalarının koordinasyonu ile bir ekip yaklaşımı kullanarak, biz hMUC1 ifade mesane kanseri bağışıklık sağlam transgenik fare modeli geliştirdik.
Giriş
Mesane kanseri kanser dördüncü en sık görülen ve Amerikan erkeklerde kanser ölümlerinin sekizinci önde gelen nedenidir. Amerika Birleşik Devletleri'nde, mesane kanserinden tahmini 72.500 yeni olgu ve 15.000 ölüm 2013 1 kombine erkek ve kadınlar arasında bekleniyor. Mesane kanseri insidansı kadınlara göre yaklaşık üç kat erkeklerde yüksek olduğunu. Vakaların% 90'ından için Amerika Birleşik Devletleri'nde, geçiş hücreli karsinom (TTK) hesap, skuamöz hücreli karsinom (SCC)% 2'den az 2 oranı varken. Papiller TTK için genel nispi 5-yıllık sağkalım oranı SCC 2 için 30.9% ile karşılaştırıldığında% 91.5 olduğunu. Noninvaziv pa....
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Protokol
Tüm hayvan çalışmaları ve deneyleri University of California, Davis Kurumsal Hayvan Bakım ve Yönetim Danışma Kurulu kullanın tarafından onaylanmış bir protokol altında yapılmıştır.
1. MUC1.Tg Fare Yetiştirme ve Yayılım
- Heterozigot MUC1.Tg C57BL / 6 dişi fareler ile UC Davis Fare Biyoloji Programı (MBP) ırkları vahşi tip C57BL / 6 erkek fareler bizim üreme kolonisi kurmak. Gerektiği gibi MUC1.Tg yavrular çalışmalar için teslim edilir.
- MBP personel fare tanımlama için tanımlanmış bir desen (0-99) içinde yavru ayak klibi ve uygulanabilir klip kuyruk. Parmak veya kuyruk doku standart DNA izolasyonu ve Polimeraz Zincir Rea....
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Sonuçlar
Mesane kanserinde yeni immünoterapi ve kombinasyonları etkilerinin klinik öncesi değerlendirme uygun bir hayvan modelinin geliştirilmesi gerekir. Bizim transgenik fare modelinde, kimyasal kanserojen OH-BBN ile indüksiyon insanlarda mesane kanseri benzer bazı SCC, ağırlıklı olarak TTK mesane kanseri insidansı yüksek oranda sonuçlandı. Tümörün tipi, MUC1 ifadesi durumu ve peptid aşı tedavisi için bağışıklık yanıtı belirlemek için, 21 ve 18 MUC1.Tg vahşi tip farenin OH-BBN indüksiyon sonrasında kan toplanması, mesane ve da.......
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Tartışma
Insan MUC1.Tg farelerde invaziv geçiş ve skuamöz hücreli mesane kanserinin başarılı indüksiyon immünoterapi gelişimi için klinik öncesi model sunuyor. Immünoterapötik çalışmalar zaman yanı sıra immünoterapi için bağışıklık yanıtı üzerinde tümör ilerlemesi için inflamatuvar yanıt değerlendirmek için bir spontan, bağışıklık sağlam modelinin kullanılmasını gerektirir. Kendiliğinden bir tümör geliştirme modelinde, tümör mikro bozulmadan kalır ve tümörlerin tedavi antitümör etkilerinin değerlendirilmesine olanak daha temsilc.......
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Açıklamalar
DPV, AYKA, SMG, CJK, AMG, ve GKH herhangi bir çıkar çatışması beyan ederim. MWD Merck KGaA alınan bir hibe Baş Araştırmacı ve MW Merck KGaA bir çalışanıdır.
Teşekkürler
Yazarlar fareler üreme için UC Davis Fare Biyoloji Anabilim Dalı teşekkür etmek istiyorum. Bu araştırma Merck KGaA, Darmstadt, Almanya bir hibe ile desteklenmiştir.
....Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Malzemeler
| Ad | Şirket | Katalog numarası | Yorumlar |
|---|---|---|---|
| Reaktif | |||
| N-butil-N- (4-hidroksibutil) -nitrozamin (OH-BBN) | TCI Amerika | B0938 | |
| 20 G Gavaj İğneleri | Popper Sons, Inc. | 7921 | Paslanmaz çelik |
| Peptit Aşısı | N/A | N/A | araştırma ajanı |
| BD Mikrotainers | BD | 365957 | |
| Doku Kasetleri | Simport | M490-12 | |
| %10 Nötr Tamponlu Formalin | Fisher Scientific | SF100-4 | |
| Lizis Tamponu Delmek | 87787 | ||
| Halt Proteaz & Fosfataz inhibitör kokteyli | Thermo Scientific | 78444 | |
| Pierce BCA Protein Test Kiti | Pierce | 23225 | |
| Fare Sitokin 20plex Kiti | Invitrogen | LMC006 | |
| Manyetik Mikroküre | Boncukları Luminex | MC100xx-01 | xx boncuk bölgesidir |
| Anti-fare TNF-Yakalama Antikoru | BD Pharmingen | 551225 | |
| Anti-fare TNF- Algılama Antikoru | BD Pharmingen | 554415 | |
| Anti-fare IFN- Yakalama Antikoru | Abcam | ab10742 | |
| Anti-fare IFN- Algılama Antikoru | Abcam | ab83136 | |
| PBS, pH 7.4 | Sigma | P3813-10PAK | |
| Tween-20 | Fisher | BP337-500 | |
| Test Tamponu | Milipore | L-MAB | |
| Sitokin Standart | Millipore MXM8070 | ||
| Çok ekranlı HTS 96well filtre plakaları | Millipore MSBVN1210 | ||
| SA-PE | Invitrogen | SA10044 | |
| 100 m Naylon Doku Elekleri | BD | 352360 | |
| Splenosit Ayırma Ortamı | Lonza | 17-829E | |
| TNF- /IL-4 ELISpot plakaları | Ar-Ge D Sistemleri | ELD5217 | |
| Tavşan Anti-MUC1 monoklonal antikor | Epitomik | 2900-1 | |
| Keçi Anti-aktin monoklonal antikor | Sigma | A1978 | |
| Anti-tavşan HRP antikoru | Promega | W401B | |
| Keçi anti-fare HRP antikoru | Santa Cruz Biotechnology, Inc. | SC-2005 | |
| PVDF membran | BioRad | 162-0174 | |
| Mini Protean TGX Prekast Jeller | BioRad | 456-1083 | |
| Muse Sayım & Canlılık Kiti | Millipore MCH100104 | ||
| MUC1 Antikoru | BD Pharmingen | 550486 | IHC |
| antikoru Hayvan Araştırmaları Peroksidaz Kiti | Dako | K3954 | IHC boyama |
| < güçlü > Ekipman ve Yazılım< / güçlü > | |||
| Millipore plaka vakum aparatı | Millipore | MSVMHTS00 | |
| Luminex Lx200 | Millipore / Luminex | 40-013 | Luminex tarafından üretilmiştir, Millipore tarafından dağıtılmıştır |
| Luminex Xponent Yazılımı | Millipore / Luminex | N/A | Sürüm 3.1; Luminex ile birlikte verilir Lx200 |
| Milliple Analist Yazılımı | Milliplex / VigeneTech | 40-086 | Sürüm 5.1 |
| Muse Hücre Analiz Cihazı | Millipore | 0500-3115 | |
| Muse Yazılımı | Millipore | N/A | Sürüm 1.1.0.0; Analizör |
| Diseksiyon Mikroskobu | Unitron | Z730 | |
| Graphpad Prism Software | Graphpad Software Inc. | Yok | Sürüm 5.1 |
| Mini Protean Tetra Hücre Jel aparatı | BioRad | 165-8001 | |
| Trans Blot SD Hücre ve PowerPac | BioRad | 170-3849 |
Kaynaklar
- Siegel, R., Naishadham, D., et al. CA Cancer J. Clin. 63, 11-30 (2013).
- Lynch, C. F., Davila, J. A. Chapter 23. Cancer of the urinary bladder. SEER Survival Monograph: Cancer Survival Among Adults: U.S. SEER Program, 1988-2001, Patient and Tumor Characteristics. Ries, L. A. G., Young, J. L., et al. , National Cancer Institute, SEER Program. Bethesda, MD. 07-6215(2007).
- Jacobs, B. L.,....
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Yeniden basım ve izinler
