Nöronal plastisite gastrointestinal (Gİ) sistem giderek tanınan, fakat yeterince anlaşılır bir özelliktir. Burada, insan pankreas bozuklukların örnekte, morfolojik ve fonksiyonel hem düzeyinde GI nöronal plastisite çalışma için, bir in vitro deneyi nöroplastisite mevcut.
Bu içeriği görüntülemek için JoVE aboneliğiniz gereklidir. Giriş yapın veya ücretsiz denemenizi bugün başlatın.
Bu makalede
Özet
Özet
Nöroplastisite patolojik koşullar altında, enterik sinir sistemi ve gastrointestinal (GI) innervasyonunun içsel bir özelliğidir. Ancak, GI bozuklukları nöroplastisitesi patofizyolojik rolü bilinmemektedir. Simülasyon ve GI nöroplastisitesi modülasyonu sağlayan yeni deneysel modeller gibi pankreas kanseri (PCA) ve kronik pankreatit (CP) olarak özellikle GI hastalıkların nöroplastisitesi katkısının gelişmiş takdir sağlayabilir. Burada, yeni doğan sıçan dorsal kök ganglionlar (DRG) ve myenterik pleksusu (MP) nöronlar kullanılarak in vitro koşullarda pankreas nöroplastisitesi simülasyonu için bir protokol mevcut. Bu çift-nöron yaklaşım hem organ içsel ve dışsal-nöroplastisite izlenmesini sağlar, ama aynı zamanda nöronal ve glial morfolojisi ve elektrofizyoloji değerlendirmek için değerli bir araç temsil değil sadece. Dahası, onların IMPAC eğitim için verilen microenvironmental içeriklerin fonksiyonel modülasyonu sağlarnöroplastisitesi t. Bir kez kurulan, mevcut nöroplastisite tahlil herhangi GI organ nöroplastisitesi çalışmaya uygulanabilir olma potansiyelini taşımaktadır.
Giriş
Gastrointestinal (Gİ) sinir morfolojisi ve yoğunluğu değişiklikler uzun bir süre için gastroenterolog ve patologlar dikkatini çekti, ama GI hastalıkların patofizyolojisi için kendi alaka 1-3 bilinmemektedir. Gerçekte, bu tür gastrit, reflüks yemek borusu iltihabı, kolit, divertikülit ve apandisit gibi birkaç derece yaygın GI hastalıkları, iltihaplı doku alanlarında 1 'de artan innervasyon yoğunluğuyla ilişkilidir. Ancak, gerçek bir ilgi kadar GI de mekanizmaları ve nöroplastisite anlamı ödenmiştir. Morfolojik değişmiş GI sinirler fonksiyon açısından, enterik sinir sisteminin normal devlet, yani normal bir GI sinirler farklı mı? Plas....
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Protokol
Protokoldeki tüm hayvan deneysel prosedürleri Technische Universität München, Almanya'da hayvan bakım yönergeleri izleyin.
1.. Medya / Hazırlık Özü
- Doku homojenizasyon
Doku homojenizasyonu kalitesi kültürlenmiş nöronlar içinde nöroplastik değişiklikler daha sonra tespit edilebilmesi için çok önemlidir. Burada, homojenleştirici doku sıcaklık önemli bir artış olmadan, doku ayrılmasını sağlayan önerilir.- Aktarım 5 mm x 5 mm x 5 mm doğrudan doku homogenator bir katı fazda ve sıvı azot yerine -80 ° C ila pankreas dokusu küp. İdeal homogenator bu defreeze izin vermeden, yeterince hızlı doku ayırmak olacaktır.
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Sonuçlar
Morfolojik nöroplastisite
Yeni doğmuş farelerin (P2-12) ile tohumlama yoğunluklarının belirtilen yaş aralığında, MP ve DRG nöronları daha önce 48 saat (Şekil 2A) sonra yoğun nöronal ağlar oluşturmak. PKa, CP yetiştirilmektedir nöronlar arasındaki nörit yoğunluğu ve NP özler karşılaştırması NP ekstrelerinde ya da daha PCa CP ekstrelerinde DRG nöronlarının nörit büyük yoğunluğa (Şekil 2A) 5 ortaya koymaktadır. MP nöronlar daha kolay DRG nör.......
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Tartışma
Mevcut protokol son zamanlarda PCa'nın ve CP 5 nöroplastisitesi mekanizmaları incelemek için bizim grup tarafından geliştirilen in vitro pankreatik nöroplastisite tahlil arkasındaki metodoloji göstermek için tasarlanmıştır. Protokol sanatçı DRG ve MP nöronların izolasyonu ve kültürü yeterli deneyim kazanmıştır sonra kolayca uygulanabilir üç günlük bir prosedür içerir. Ayrıca, pankreas microenvironmental bileşenlere enterik ve DRG ilişkili glia birlikte reaksiyonu incelemek için değerli bir araç t.......
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Açıklamalar
Yazarlar herhangi bir çıkar çatışması ve finansal açıklamaları var.
Teşekkürler
Tüm yazarlar sunulan analizin kurulması ve doğrulama doğru ve yazının taslak katkıda bulunmuştur.
....Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Malzemeler
| Ad | Şirket | Katalog numarası | Yorumlar |
|---|---|---|---|
| Poli-D-lizin hidrobromür | Sigma-Aldrich | P1149 | |
| Ornitin / laminin | Sigma-Aldrich | P2533 / L4544 | |
| 13 mm Lameller | Merck | 24 oyuklu plakalarda kullanım için | |
| Dağıtıcı S | Sartorius | ||
| Anti-Beta-III-tubulin antikoru | Millipore | MAB1637 | 1:200 konsantrasyon |
| Anti-GFAP-antikoru | DAKO | M0761 | 1:400 konsantrasyon |
| RIPA tamponu + proteaz inhibitörü | Herhangi bir tedarikçi | ||
| Nörobazal ortam | Gibco/Yaşam Bilimleri | 21103-049 | |
| B-27 Eki | Gibco/Yaşam Bilimleri | 17504044 | B-27'nin kalitesinin lot numarasına bağlı olduğu bilinmektedir |
| Gentamisin/Metronidazol | Herhangi | ||
| tedarikçi Minimal esansiyel ortam | Gibco/Yaşam Bilimleri | 31095-029 | |
| Hank' s Dengeli Tuz Çözeltisi (HBSS) | Gibco/Yaşam Bilimleri | 24020133 | Ca/Mg Kollajenaz tip II içerdiğinde kollajenaz aktivitesini iyileştirir |
| Worthington Biyokimyasal | CLS-2 | En az 200 U/mg aktiviteye sahip lotlar elde edin | |
| Tripsin-EDTA %0.25 | Gibco/Yaşam Bilimleri | 25200056 | |
| %4 Paraformaldehit | Herhangi bir tedarikçi | ||
| analiziSIS docu yazılım | Olympus |
Kaynaklar
- Demir, I. E., Schafer, K. H., Tieftrunk, E., Friess, H., Ceyhan, G. O. Neural plasticity in the gastrointestinal tract: chronic inflammation, neurotrophic signals, and hypersensitivity. Acta Neuropathol. 125, 491-509 (2013).
- Vasina, V., et al.
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Yeniden basım ve izinler
