Sirkülasyon tümör hücrelerinin (kapalı zaman eğrilerinin) birçok metastatik kanser prognostik bulunmaktadır. Bu el yazması altın standart CellSearch sistemi (CSS) CTC sayım platformu ve golleri ortak yanlış sınıflandırma hatalar açıklanır. Buna ek olarak, iki uyarlanmış protokolleri bu teknolojiyi kullanarak metastaz klinik öncesi fare modellerinde kapalı zaman eğrilerinin ve CTC numaralandırma kullanıcı tanımlı işaretleyici karakterizasyonu için tarif edilmiştir.
Bu içeriği görüntülemek için JoVE aboneliğiniz gereklidir. Giriş yapın veya ücretsiz denemenizi bugün başlatın.
Yöntem makalesi
Klinik ve Klinik Öncesi Araştırma Uygulamaları Tümör Hücre (CTC) Tahliller Sirkülasyon semiautomated adaptasyon
Bu makalede
Özet
Özet
Kansere bağlı ölümlerin çoğunluğu metastatik hastalık gelişimine daha sonra meydana gelir. Bu son derece öldürücü hastalık aşama tümör hücrelerinin (kapalı zaman eğrilerinin) dolaşan varlığı ile ilişkilidir. Bu nadir hücreler metastatik göğüs, prostat, kolorektal kanser ve klinik öneme sahip olduğu gösterilmiştir. Klinik CTC algılama ve numaralandırma güncel altın standardı FDA onaylı CellSearch sistemi (CSS) 'dir. Bu el yazması standart bu platformu tarafından kullanılan protokolü yanı sıra özetliyor standardını kullanarak, hasta kapalı zaman eğrileri protein karakterizasyonu için kullanıcı-tanımlı işaretleyici optimizasyonu ve kanın çok düşük hacimlerde CTC yakalamak için benzer bir protokol ayrıntılı sürecini açıklayan iki ek protokol uyarlanmıştır CSS reaktifler, metastaz vivo preklinik fare modellerinde okuyan için. Buna ek olarak, sağlıklı kan verici arasında CTC kalitesinde farklılıklar hastanın kan samp karşılık doku kültürü hücreleri ile tutturuldules vurgulanır. Son olarak, CTC yanlış sınıflandırma hatalara yol açabilir birçok yaygın discrepant öğeler özetlenmiştir. Birlikte ele alındığında, bu protokoller metastaz ve kapalı zaman eğrileri ilişkin klinik öncesi ve klinik araştırma ile ilgilenen bu platform kullanıcıları için yararlı bir kaynak sağlayacaktır.
Giriş
2013 yılında 580.350 kişi kanserden öleceği tahmin edilmektedir ve bu hastalığın o 1.660.290 yeni vaka başına 1 ABD'de tanısı olacaktır. Bu ölümlerin çoğunluğu metastatik hastalık 2 gelişiminde sonra ortaya. Metastaz ve metastatik kaskad sınırlı bir anlayış tedavisinde etkili tedavilerin mevcut olmaması hastalığın bu aşamada son derece ölümcül yapar. Kan içinde, tümör hücrelerinin (kapalı zaman eğrilerinin) sirküle varlığı metastatik hastalık 3 ile ilişkili olduğu gösterilmiştir. Bu hücreler son derece nadirdir ve algılama metastatik meme 4, prostat 5 genel sağkalım göstergesidir ve kolorektal kanser 6.<....
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Protokol
Bu yazıda anlatılan tüm insan çalışmalarda Batı Üniversitesi İnsan Araştırmaları Etik Kurulu tarafından onaylanan protokol çerçevesinde yürütülmüştür. Tüm Hayvan çalışmaları Western University Hayvan Kullanımı Alt Komitesi tarafından onaylanan protokoller çerçevesinde, Hayvan Bakımı Kanada Konseyi tavsiyeleri doğrultusunda yapılmıştır.
1.. CSS kullanarak Hasta kan örnekleri standart CTC Numaralama
1.. Hazırlık Enstrüman İnsan Kan Örnek Toplama ve İşleme Hazırlık
- Standart aseptik flebotomi teknikleri kullanılarak, etilen diamintetraasetik asit (EDTA) ve özel bir hücre koruyucu madde içermektedir, (bunda....
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Sonuçlar
Standart CTC Sayım Deneyi
CSS duyarlılığı ve özgünlüğü de literatürde belgelenmiştir. Bununla birlikte, eşit CTC kurtarma doğrulamak için, çivili (1000 LNCaP insan prostat kanser hücreleri) ve sağlıklı gönüllü vericilerden Katkısız bir insan kan numuneleri, standart CSSCTC protokolü kullanılarak CSS işlenmiştir. Beklendiği gibi, Katkısız numuneler, 0.00 ± 0.00% kapalı zaman eğrileri ücretsiz vardı ve CTC kurtarma çivili numuneler (Şekil 1A) için 86.9 ± 4.71% olarak gösterilmişt.......
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Tartışma
2004 yılında CSS yana birçok yeni CTC teknolojilerin geliştirilmesine rağmen, bu teknik bugün piyasada sadece klinik onaylı bir teknolojidir ve bu nedenle CTC tespiti ve sayımı için geçerli altın standart olarak kabul edilir. Bu el yazması CSS sıkı kalite kontrol standartları olmasına rağmen bu yanlı yorumlanmasına tabi olacak ve hasta örneklerinde CTC kimlik çivili örneklerinde kimlik çok farklı olduğunu olduğunu göstermiştir. Yaygın olarak uyumsuz öğelerin altı kategoride CTC yanlış sınıflandırılması oluşmasına neden .......
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Açıklamalar
Yazar (ALA) olan ana şirket Johnson & Johnson da bu yazıda kullanılan reaktifler ve aletleri üreten Janssen Teşhis LLC, sahibi Janssen Onkoloji tarafından sağlanan fon aldı.
Teşekkürler
Bu çalışma Kanser Araştırma Ontario Enstitüsü (# 08NOV230), Yenilik için Kanada Vakfı (# 13199), Prostat Kanseri Kanada, Janssen Onkoloji, Londra Bölgesel Kanser Programı, ve John ve Donna Bristol donör desteği ile hibe tarafından desteklenmiştir (ALA) Londra Sağlık Bilimleri Vakfı. LEL bir Frederick Banting ve Charles Best Kanada Yüksek Lisans Bursu Doktora Ödülü tarafından desteklenmektedir. ALA CIHR Yeni Araştırmacı Ödülü ve Araştırma ve Yenilik Ontario Bakanlığı'ndan Erken Araştırmacı Ödülü tarafından desteklenmektedir.
....Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Malzemeler
| Ad | Şirket | Katalog numarası | Yorumlar |
|---|---|---|---|
| 0.5 M EDTA | |||
| Anti-insan CD44-FITC | BD Pharmigen | 555478 | |
| Anti-insan CD44-PE | BD Pharmigen | 555479 | |
| Anti-insan HLA-Alexa Fluor 488 | BioLegend | 311415 | |
| Anti-fare CD45-APC | eBioscience | 17-0451-82 | |
| Bond Birincil Antikor Seyreltici | Leica | AR9352 | |
| CellSave Koruyucu Tüpler | Veridex | 952820 (20 paket) 79100005 (100 paket) | |
| CellSearch CTC Kontrol Kiti | Veridex | 7900003 | |
| CellSearch CTC Kiti | Veridex | 7900001 | |
| CellSearch CXC Kontrol Kiti | Veridex | 7900018RUO | |
| CellSearch CXC Kiti | Veridex | 7900017RUO | |
| Alet Tamponu | Veridex | 7901003 | |
| Streck Cell Koruyucu (diğer adıyla CytoChex) | Streck | 213350 | |
| 1 ml Şırınga | |||
| 10 ml Serolojik pipet | |||
| 1.000 ve mikro; l Pipet | |||
| 1.000 ve mikro; l Pipet uçları | |||
| 12 mm x 75 mm Akış tüpleri | |||
| 200 ve mikro; l Jel yükleme uçları | |||
| 200 & l Pipet | |||
| 22 G İğne | |||
| 5 3/4 Tek Kullanımlık Pastör pipetinde | VWR | 14672-200 | |
| 5 ml Serolojik pipet | |||
| Otomatik pipetleyici | |||
| Kılcal Kan Alma Tüpü (EDTA) | BD Microtainer | 365974 | |
| CellSearch Analyzer II | Veridex | 9555 | Magnests ve doğrulama kartuşları içerir |
| CellSearch AutoPrep System | Veridex | 9541 | |
| Santrifüj | |||
| MagCellect Mıknatısı | Ar-Ge D Sistemleri | MAG997 | |
| Küçük Lateks Ampul | VWR | 82024-550 | |
| Vorteks |
Kaynaklar
- Siegel, R., Naishadham, D., Jemal, A. Cancer statistics. 63 (1), 11-30 (2013).
- Chambers, A. F., Groom, A. C., MacDonald, I. C. Dissemination and growth of cancer cells in metastatic sites. Nat. Rev. Cancer. 2 (8), 563-572 (2002).
- Pantel, K., Brakenhoff, R. H.
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Yeniden basım ve izinler
