Tüp formasyonu deneyi in vitro olarak anjiyojenezi ölçmek için bir hızlı, ölçülebilir bir yöntemdir. Endotel hücreler, koşullu ortam ile bir araya yerleşen ve bazal zar özü ekilir. Tüp oluşumu saat içinde meydana gelir ve yeni oluşan tübülleri kolayca ölçülebilir.
Bu içeriği görüntülemek için JoVE aboneliğiniz gereklidir. Giriş yapın veya ücretsiz denemenizi bugün başlatın.
Yöntem makalesi
Endotel Hücre için Tüp Deneyi birleşimi
Bu makalede
Özet
Özet
Anjiyogenez normal doku gelişimi ve yara iyileşmesi için önemli bir işlem, aynı zamanda bir çok patolojik durum ile ilişkili bulunmuştur. Bu protokol kullanılarak, anjiyogenez hızlı, ölçülebilir bir şekilde in vitro ölçülebilir. Birincil veya Ölümsüzleştirilmiş endotel hücre koşullu ortam ile karıştırılır ve taban membran matrisi üzerinde plakalanır. Endotel hücreler, koşullu ortam bulunan anjiyojenik sinyallerine yanıt olarak benzeri yapılar kılcal oluştururlar. Tüp oluşumu endotel hücreleri 1 saat ve lümen içeren tübüller 2 saat içinde görünmeye başlıyor içinde kendilerini hizaya başlayan hızlı bir şekilde gerçekleşir. Tüpler, zıt fazlı bir ters mikroskop kullanılarak görüntülenebilir, veya hücreler floresan veya konfokal mikroskobu ile görüntülenir ve borular deneyi öncesinde kalsein AM ile tedavi edilebilir. Şubeleşmiş / düğümleri, sayısı döngüler / kafes ya da numara veya tüplerin oluşan uzunluğunu kolayca vitr içinde bir ölçü olarak tayin edilebilirO anjiyojenez. Özet olarak, bu deney, genler ve hızlı, tekrarlanabilir ve nicel olarak promosyon veya anjiyojenezin inhibisyonuna dahil yolların belirlenmesi için kullanılabilir.
Giriş
Anjiyojenez, önceden mevcut damarlardan yeni kan damarlarının gelişimi, 1-3 iyileşmesi, organ büyüme, embriyonik gelişme ve yara da dahil olmak üzere çeşitli işlemler için hayati önem taşımaktadır. Yeni dokulara endotel hücreleri, tedarik oksijen ve besin sıralandığı kan damarları, geliştirilen, hematopoetik hücreler tarafından immün gözetim teşvik ve atık ürünleri 2,4 çıkarın. Anjiyogenesis embriyonik ve fetal gelişim sırasında kilit öneme sahiptir. Bununla birlikte, bu işlem, yara iyileşmesi, iskelet gelişimi, gebelik zamanlarında dışında veya 1-3 adet döngüsü sırasında yetişkinde çıkamamaktadır.
Son iki....
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Protokol
Koúullanmıú Medya 1. Toplama Anjiyogenik Potansiyel için Test
- Doğal ya da düşük serum ortamında anjiyojenik veya anti-anjiyojenik potansiyeli için test edilecek olan primer ya da ölümsüzleştirilmiş hücrelerin büyümesine ve koşullu ortam toplanır.
- Seçenek olarak ise, kullanım anında ortamla veya numune alınır ve birkaç ay boyunca -80 ° C'de saklanır. Bir negatif kontrol olarak, doğal ya da nonconditioned düşük serum ortamı kullanın ve bir pozitif kontrol olarak sigara durumunu tam büyüme ortamı (% 10 FBS, ya da uygun bir konsantrasyonunu) kullanır. Seçenek olarak ise, angiogenesisin potansiyel uyarıcıları test etmek için ve söz konusu spesifik ....
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Sonuçlar
Fare 3B-11, endotel hücreleri, büyüme faktörü, katılaşmış düşük BME üzerine serpildi - Bu deneyde, ürünün Matrigel kullanıldı - ve zaman içinde takip etti. Şekil 1 'de gösterildiği gibi, her iki fare veya keratinositler, fibroblastlar tarafından salgılanan anjiyojenik faktörler, zaman içinde tüp oluşumunu sağlama yeteneğine sahiptirler. Endotel hücreleri göç ve kaplama 1-2 saat içinde küçük dalları oluşmaya başlar. Maksimum tüp oluşumu önceden keratinositlerinden elde edilen koşullandırılmış medyayı.......
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Tartışma
Anjiyogenesis fizyolojik ve patolojik süreçlerde hem de yer almaktadır. Angiogenesis ile ilişkili mekanizmaların incelenmesi anjiyojenezde büyük adımlar özetlemek tahlillerin kullanımını gerektirir. Endotel hücre tüp oluşumu tahlil diğer deneylerde fazla birkaç avantaj sunar. Bu, ayarlama kolaydır nispeten pahalı olmayan, birkaç saat içinde tübülleri üretir ve nicelleştirilebilmektedir. Bundan başka, 24 ya da 96 oyuklu plakalar içinde tamamlanabilir ve bu şekilde teşvik faktörleri tanımlamak veya anjiyogenezin inhibe ed.......
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Açıklamalar
Yazarlar ifşa hiçbir şey yok.
Teşekkürler
Bu araştırma, Ulusal Sağlık Enstitüleri Ulusal Kanser Enstitüsü İntramural Araştırma Programı tarafından kısmen desteklenen ve NCI tarafından UA5CA152907 hibe edildi.
....Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Malzemeler
| Ad | Şirket | Katalog numarası | Yorumlar |
|---|---|---|---|
| Costar 24 oyuklu doku kültürü ile tedavi edilmiş plaka | Corning | 3524 | |
| BD Matrigel bazal membran matrisi, büyüme faktörü azaltılmış | BD Biosciences | 354230 | |
| Gibco %0.05 tripsin-EDTA | Yaşam Teknolojileri | 25300-054 | |
| Gibco L-glutamin 200 mM (100x) | Yaşam Teknolojileri | 25030-081 | |
| Gibco kalem strep | Life Teknolojiler | 15140-122 | |
| Gibco DMEM (1x) | Yaşam Teknolojileri | 11965-092 | |
| Gibco DPBS (1x) | Yaşam Teknolojileri | 14190-144 | |
| Fetal Sığır Serumu Atlas | Biyolojikleri | F-0500-A Calcein | |
| Yaşam Teknolojileri | C3100MP | ||
| DMSO | ATCC | 4-X |
Kaynaklar
- Carmeliet, P. Angiogenesis in life, disease and medicine. Nature. 438, 932-936 (1038).
- Carmeliet, P., Jain, R. K. Molecular mechanisms and clinical applications of angiogenesis. Nature. 473, 298-307 (2011).
- Potente, M., Gerhardt, H., Carmeliet, P.
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Yeniden basım ve izinler
