Büyük hacimli tarımsal sularda gıda kaynaklı patojenlerin entegre konsantrasyon, zenginleştirme ve son nokta kolorimetrik tespitini içeren bir protokol burada sunulmaktadır. Su, seçici veya seçici olmayan ortamlarla zenginleştirilmiş Modifiye Moore Swablarından (MMS) süzülür ve algılama, bakteriyel-gösterge kolorimetrik substratlarla gömülü kağıt bazlı analitik cihazlar (μPAD) kullanılarak gerçekleştirilir.
Bu içeriği görüntülemek için JoVE aboneliğiniz gereklidir. Giriş yapın veya ücretsiz denemenizi bugün başlatın.
Bu makalede
Özet
Özet
Bu protokol, tarımsal sularının büyük hacimli Escherichia coli, Salmonella spp. Ve Listeria monocytogenes hızlı kolorimetrik tespitini (10 L) da açıklamaktadır. Burada su bakteri konsantre, plastik bir kartuş içine basit bir ağ filtre oluşur steril Modifiye Moore Swabs (MMS), süzülür. Süzüldükten sonra, hedef bakteriler için seçici olmayan ya da seçici bir zenginleşme MMS gerçekleştirilir. Hedef bakteri kolorimetrik tespiti için, zenginleşmesi sonra bakteri işaret eden alt-tabakalar ile gömülü kağıt bazlı analitik cihazlar (μPADs) kullanılarak deneye tabi tutulur. Her bir alt-tabaka üzerinde görsel μPAD (kalitatif tespiti) tespit edilebilir renkli ürünler üreten, hedef gösterge bakteryel enzimler ile reaksiyona girer. Alternatif olarak, reaksiyona μPADs dijital görüntüler ortak tarama ve çekim cihazları ile ve oluşturulan ImageJ yazılımı al kullanılarak analiz edilebilirsonuçlar daha objektif ve standart yorumlanması için lowing. Biyokimyasal tarama işlemleri yukarıda bahsedilen bakteriyel patojenler belirlemek için tasarlanmış olsa da, enzimler, arka mikrobiyota veya kolorimetrik alt-tabakaların bozulması tarafından üretilen bazı durumlarda yanlış pozitif üretebilir. Bu nedenle, daha ayrımcı teşhis kullanılarak teyit gereklidir. Bununla birlikte, bu bakteriyel konsantrasyon ve algılama platformu bir ilk tarama yöntemi olarak kullanılmasını haklı, (konsantrasyon, zenginleştirme ve algılama yaklaşık 24 saat içinde yapılır), ucuz (0,1 CFU / ml tespit sınırı) duyarlı, gerçekleştirmek kolay ve hızlıdır Tarımsal su mikrobiyolojik kalitesi için.
Giriş
Bu gıda kaynaklı hastalık etmenleri gıda kaynaklı hastalık yükünü azaltmak için alan bazlı ortamlarda hızla ve tercihen tespit edilmesi önemlidir. Gıda kaynaklı bakteriyel patojenler tespit etmek için ortak stratejiler biyokimyasal profil, seçici ve diferansiyel kültürlemenin, immünolojik izolasyon ve algılama ve moleküler algılama vardır. Ancak, bu yöntemler sporadik kirlenme tarafından engellendiğini, test küçük bir örnek boyutları, gıda kaynaklı patojen bakterilerin genellikle düşük konsantrasyonlarda, uzun işlem süreleri gerektiren ve / veya alan ayarları için geçerli değildir. Bundan başka, birçok gıda matrislerdeki bileşiklerin tespit ve teşhis uygulamalarına ö....
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Protokol
MMS kullanma Tarımsal Su geniş hacimli Bakterilerin 1. Konsantrasyon
- MMS Hazırlık
- 40 x 12 cm boyutlarında 4-katlı tülbent dikdörtgen bir bölümü kesin.
- 20 x 6 cm boyutlarında bir dikdörtgen elde etmek için her iki eksen boyunca tülbent katlayın.
- Boyunda yaklaşık 6 cm ve çapı 3 cm olan silindirik bir çubukla oluşturulması için sıkı uzun ekseni boyunca tülbent döndürün.
- Alüminyum folyo tülbent bez otoklavlayınız kaseti otoklavlamayın yok. % 10 ev tipi ağartıcı içinde 30 dakika için ıslatılarak kaseti dekontamine ve bir sodyum tiosülfat pentahidrat (Na 2S 2 O 3 · 5H 2 O) çözeltisi (50 mg /....
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Sonuçlar
Bu protokolde tarif edildiği gibi, MMS kullanarak bakteri konsantrasyonu (Şekil 1), yaklaşık 15-20 dakika içinde yapılabilir. Iki ayrı bileşenleri, akrilonitril butadien stiren (ABS) 'den meydana in MMS; silindirik bir tülbent çubuk içine sokulduğu entegre bir mil kasnağı montajı (Şekil 1A) ile her ikisi de, bir kapak ve bir kartuş. Her iki bileşen de daha sonra birlikte MMS (Şekil 1 B) oluşturan vidalanır. MMS-tabanlı işleme alan ortamlarda yoğun olarak numuneler i.......
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Tartışma
Bu protokol, E. saptanması için entegre bir yöntem tarif E. coli, Salmonella spp. ve L. Tarımsal suda monocytogenes. Burada, tarım büyük hacimlerde suyun bakterilerin MMS konsantrasyonu (10 L), bakteriyel zenginleştirme ile birleştiğinde ve bakteri gösterge kolorimetrik tespiti μPADs kullanıyor. Bakteriler 10 kat konsantre olurken MMS prosedürü su örneklerinde yüksek partikül içeriği ile başa çıkabilir, sağlam ve az eğitimli personel tarafından saha uygulamaları için yeterince basit v.......
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Açıklamalar
Yazarların açıklayacak hiçbir şeyi yoktur.
Teşekkürler
USDA Ulusal Gıda ve Tarım Enstitüsü 2009-01208 ve 2009-01984 hibelerinden bu proje için fon sağlandığını minnetle kabul ediyoruz.
....Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Malzemeler
| Ad | Şirket | Katalog numarası | Yorumlar |
|---|---|---|---|
| Tarımsal su | Sulama suyu, yıkama suyu, kuyu suyu vb. Üretir. | ||
| Vinil boru | Wilmar | BN-CVT1005 | 1/4 "iç çap, 3/8 "dış çap, şurada mevcuttur: http://www.wilmar.com |
| Modifiye Moore Swab kartuşu | Lumiere Diagnostics | 11 ½ cm uzunluğunda ve 4 ½ cm genişliğinde, şu adresten ulaşılabilir: http://www.lumierediagnostics.com. Alternatif olarak, kartuşun tek kullanımlık olmayan bir versiyonu kullanılabilir (metne bakın) | |
| Tülbent | Chesapeake Silecek & Tedarik A.Ş. | CC90 | Sınıf # 90, 44 x 36 dokuma, şu adreste mevcuttur: www.raglady.com |
| Ev Tipi Çamaşır Suyu | Çeşitli | Sodyum hipoklorit konsantrasyonu yaklaşık% 6 | |
| Sodyum tiyosülfat 5-hidrat | Mallinckrodt Baker Inc | 8100-04 | |
| Manifold | Dahili şirket | İsteğe bağlı olarak, cihaz PVC borulardan ve uygun bağlantı parçalarından yapılabilir | |
| Peristaltik pompa | Mikron Metre | RPP1300 | Mevcut: http://www.micronmeters.com |
| Serolojik pipet | Çeşitli | Tek Kullanımlık, 10 ml | |
| Üniversal ön zenginleştirme suyu | Difco | 223510 | |
| Tamponlu pepton suyu | Difco | 218105 | |
| Salmonella takviyesi | Biomé rieux Industry | 42650 | http://www.biomerieux-usa.com |
| VIDAS UP Listeria (LPT) Et Suyu Biyom | é rieux Industry | 410848 | http://www.biomerieux-usa.com |
| Vancomycin | Sigma-Aldrich | 861987 | http://www.sigmaaldrich.com |
| Pipet Yardımı | Burada kullanılan çeşitli | Drummond DP-110 | |
| Çalkalama inkübatörü | Çeşitli | Excella E25, New Brunswick Scientific burada kullanılan | |
| Mikropipet ve nbsp; | Çeşitli | 10 μ l, 1 ml | |
| Mikropipet uçları | Çeşitli | Bariyer, 10 μ l, 1 ml | |
| 1.5 mikrosantrifüj tüpleri | Çeşitli | RNaz ve DNaz içermeyen | |
| Prob sonikatörü | Q Sonica LLC | XL-2000 serisi | |
| ve mikro; PAD'ler | Avant | Balmumu baskılı 7 mm çapında daireler, 4 pt çizgi kalınlığında. Ek bilgi için Dr. Charles Henry ile iletişime geçin: | |
| HEPES [N-(2-Hidroksietil)piperazin-N′ -2-etansülfonik asit] | Sigma-Aldrich | H3375 | |
| Sığır serum albümini | Sigma-Aldrich | A8022 | |
| Klorofenol kırmızı-galaktopiranosid (CPRG) | Sigma-Aldrich | 59767 | |
| 5-Bromo-4-kloro-3-indolil-β-D-glukuronid (X-Gluc) | Sigma-Aldrich | B8174 | |
| 5-bromo-6-kloro-3 indolilkaprilat (macenta kaprilat) | Sigma-Aldrich | 53451 | |
| 5-Bromo-4-kloro-myo-inositol fosfat (X-InP) | Sigma-Aldrich | 38896 | |
| Petri kapları, polistiren 100 mm x 15 mm | Çeşitli | Steril | |
| Düz yataklı tarayıcı | Çeşitli | Xerox USB tarayıcı | |
| ImageJ yazılımı | Ulusal Sağlık | Enstitüleri http://rsb.info.nih.gov/ij/ |
Kaynaklar
- Guidance for industry: Guide to minimize microbial food safety hazards for fresh fruits and vegetables. , U.S. Dept. of Health and Human Service, Food and Drug Administration, Center for Food Safety and Applied Nutrition (CFSAN). (1998).
- Bisha, B., Pérez-Méndez, A., Danyluk, M. D., Goodridge, L. D.
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Yeniden basım ve izinler
