Bu protokol, uyanık sıçanlarda subkortikal beyin yapılarındaki nöronal aktiviteyi izlemek için bir kafa kısıtlama mekanizmasının tasarımını ve cerrahi implantasyonunu açıklar. Juxtacellular konfigürasyondaki tek nöronları izole etmek ve anatomik konumlarını verimli bir şekilde tanımlamak için prosedürleri tanımlar.
Bu içeriği görüntülemek için JoVE aboneliğiniz gereklidir. Giriş yapın veya ücretsiz denemenizi bugün başlatın.
Yöntem makalesi
Uyarı, Baş-ölçülü Sıçanların Alt-kortikal Beyin Yapıları içinde Juxtacellular İzleme ve Yerelleştirme Single Nöronlar
Bu makalede
Özet
Özet
Tek nöronal birimlerin hücre dışı aktivitesini izlemek için çeşitli teknikler vardır. Bununla birlikte, bu aktivitenin davranan hayvanlardaki derin beyin yapılarından izlenmesi, özellikle yapıların stereotaksik olarak hedeflenmesi gerekiyorsa, teknik bir zorluk olmaya devam etmektedir. Bu protokol, hayvanın kafasını stereotaksik düzlemde tutan ve tek nöronların ani aktivitesini açık bir şekilde izole eden uygun cerrahi ve elektrofizyolojik teknikleri açıklar. Protokol, post-hoc histolojide nöron konumunu belirlemek için uyarı kemirgenlerinin baş desteğini, mikropipet elektrotlarla juxtaselüler izlemeyi ve iyontoforetik boya enjeksiyonunu birleştirir. Bu tekniklerin her biri kendi içinde iyi kurulmuş olsa da, protokol tek bir deneyde birleşik kullanımlarının özelliklerine odaklanır. Bu nörofizyolojik ve nöroanatomik teknikler davranışsal izleme ile birleştirilir. Mevcut örnekte, somatosensoriyel talamus içindeki nöronların aktivitesinde kendi kendine üretilen vibrissa hareketlerinin nasıl kodlandığını belirlemek için kombine teknikler kullanılmıştır. Daha genel olarak, sıçanlarda, farelerde ve diğer hayvanlarda çeşitli davranışsal görevlerle birlikte nöronal aktiviteyi izlemek için bu protokolü uyarlamak kolaydır. Kritik olarak, bu yöntemlerin kombinasyonu, deneycinin anatomik olarak tanımlanmış nörofizyolojik sinyalleri davranışla doğrudan ilişkilendirmesine izin verir.
Giriş
Aktif bir davranış görev yapan bir uyarı hayvanda nöronal aktivitenin izlenmesi sinir sisteminin fonksiyonunu ve organizasyonunu anlamak için önemlidir. Tek nöronal birimlerinden gelen elektriksel aktivite Hücre dışı kayıt uzun sistemleri nörobilim bir elyaf araç olmuştur ve şu anda kullanımda yaygın hala gelmiştir. Elektrot türleri ve yapılandırmaları çeşitli özel bir deney bilimsel ve teknik taleplerine bağlı olarak mevcuttur. Kronik mikro sürücü implante veya elektrot dizileri genellikle kuşlar, kemirgenler ve insan olmayan primatlar 1-4 de dahil olmak üzere serbest hareket eden hayvanlar, kullanılır. Alternatif olarak, harici bir mikromanipülatör yoluy....
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Protokol
Federal reçete hayvan bakımı ve kullanım yönergelerine uygun olarak - (350 gr 250) ve Kaliforniya San Diego Üniversitesi Kurumsal Hayvan Bakım ve Kullanım Kurulu tarafından kabul edildi Deneysel protokoller dişi Long Evans fareler üzerinde gerçekleştirilmiştir.
1. Vücut Kısıtlama için Rat acclimating
NOT: Bir kısıtlı diyet sıçan yerleştirin. Kısıtlama (aşağıda açıklanmıştır) sıçan gelmesini hemen her gün kullanım seansından sonra günde bir kez sıçan besleyin. Ilk ağırlığının% 80 hayvan korumak için yeterli yem sağlayın. Bu miktar 250 g ağırlığında dişi Long Evans fare için günlük besleme bölgesinin yaklaşık 6 gr....
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Sonuçlar
Bir sıçan aktif çırpma gibi bıyık hareketinin faz kendi ürettiği 15,16 çırpma esnasında kodlamak talamus ventral posterior medial (VPM) nöronal birimler. Şekil 7A bir VPM talamik birimin örnek spike aktivitesini gösterir. Şekil 7B başak bir histogram gösterir Zaman bıyık hareket 17 anlık aşamasına hizada. Çırpma geri çekilme aşamasında daha fazla sivri vardır. Şekil 7C'de gösterildiği gibi Kayıttan sonra, ünitenin yeri, Chicago gök mavisi.......
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Tartışma
Deneysel jig İnşaatı
Bu çeşitli şekillerde imal edilebilir deney jig (Şekil 4) oluşturmak için kullanılan mekanik parçaların açıklaması protokol atlandı. Bu gösteri standardında opto-mekanik parça ve destek kelepçeler kafalık bar ve vücut kısıtlama tüp (Malzeme bölümüne bakınız) monte etmek için kullanılır. Benzer opto-mekanik parçalar motorlu mikromanipülatör elektrot tutucu monte etmek için de kullanılabilir. Bu jig üzerine k.......
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Açıklamalar
Yazarlar hiçbir rakip mali çıkarlarını olduğunu beyan ederim.
Teşekkürler
Kanada Sağlık Araştırmaları Enstitüleri'ne (MT-5877 hibesi), Ulusal Sağlık Enstitüleri'ne (NS058668 ve NS066664 hibeler) ve ABD-İsrail İki Uluslu Vakfı'na (hibe 2003222) bu çalışmaları finanse ettikleri için minnettarız.
....Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Malzemeler
| Ad | Şirket | Katalog numarası | Yorumlar |
|---|---|---|---|
| Ketaset (Ketamin HCl) | Fort Dodge | N/A | |
| Anased (Ksilazin çözeltisi) | Lloyd Laboratories | N/A | |
| Betadin (Povidon-İyot) | CVS Eczane | 269281 | |
| Loctite 495 | Grainger Endüstriyel Tedarik | 4KL86 | 20 - 40 cp siyanoakrilat |
| Vetbond | 3M | 1469SB | |
| Kavrama çimentosu toz | Dentsply Intl | 675571 | Kayıt odasının tabanı için |
| Kavrama çimento sıvısı | Dentsply Intl | 675572 | Kayıt odasının tabanı için |
| Silikon jel | Dow Corning | 3-4680 | |
| Jet protez onarımı akrilik toz | Lang Dental Manufacturing Co. | N/A Baş | dayanağı aparatını kafatasına sabitlemek için |
| Ortho-Jet Hızlı kürlenen ortodontik akrilik reçine sıvısı | Lang Dental Manufacturing Co. | N/A Baş | dayanağı aparatını kafatasına sabitlemek için |
| Chicago gök mavisi | Sigma | C8679 | |
| Paraformaldehit | Sigma | 158127 | Perfüzyon ve doku fiksasyonu için |
| Fosfat tamponlu salin | Sigma | P3813 | Perfüzyon ve doku fiksasyonu için |
| Sitokrom C | Sigma | C2506 | Sitokrom-oksidaz boyama için, < güçlü>Şekil 7 |
| Diaminobenzidin | Sigma | D5905 | Sitokrom-oksidaz boyama için, Şekil 7 |
| Sıçan çorabı | Sew Elegant (San Diego, CA) | N/A | Özel yapım, Şekil 1, 4 |
| PVC tüp 2 ve frak12; " | ABD Plastik A.Ş. | 34108 | Figure 4 |
| >Subminiature D pinleri ve soketleri | TE Connectivity | 205089-1 | Figure 3 |
| Paslanmaz çelik müzik teli 0.010" çap | Precision Brand Products, Inc. | 21010 | Şekil 3 |
| Stereotaksik tutma çerçevesi | Kopf Instruments | Model 900 | Şekil 3 |
| Stereotaksik kulak çubukları | Kopf Instruments | Model 957 | Şekil 3 |
| Stereotaksik manipülatör | Kopf Aletleri | Model 960 | Şekil 3 |
| ½ mm matkap çapağı | Henry Schein | 100-3995 | |
| Sessiz Havalı diş matkabı | Midwest Dental | 393-1600 | |
| Paslanmaz çelik 0-80 & frac18; ” vidalı | Bağlantı Elemanı superstore | 247438 | Şekil 3 |
| >0.2 ml santrifüj tüpü | Fisher Scientific | 05-407-8A | Şekil 3 |
| Özel kafa tutma çubuğu | UCSD SIO Makine Atölyesi | N/A | Özel yapım, Şekil 2 - 4 |
| Özel kafa tutma plakası | UCSD SIO Makine Atölyesi | N/A | Özel yapım, Şekil 2 - 4 |
| Dik açılı kelepçe sonrası | Newport | MCA-1 | Şekil 3, 4 deneysel jig için standart opto-mekanik parçalar (Şekil 4) de Newport Corp.'tandır. |
| 8-32 ve frak34; ” vidalı | Bağlantı Elemanı Superstore | 240181 | Baş desteği için, Şekil 3 |
| 4-40 ¼ ” vidalı | Bağlantı Elemanı Superstore | 239958 | Baş desteği için, Şekil 3, 4 |
| Kuvars kılcal boru | Sutter Instruments | QF-100-60-10 | Şekil 5 |
| Karbondioksit lazer çektirme | Sutter aletleri | P-2000 | |
| Motorlu mikromanipülatör | Sutter Instruments | MP-285 | |
| Mikroelektrot amplifikatörü | Moleküler Cihazlar | Multiclamp 700B | Alternatif bölüm: Moleküler Cihazlar Axoclamp 900A |
| Mikroelektrot amplifikatör kafa aşaması | Moleküler Cihazlar | CV-7B | Alternatif bölüm: Moleküler Cihazlarla HS-9Ax10 Axoclamp 900A |
| İzole nabız stimülatörü | Sistemleri | Model 2100 | Alternatif bölüm: Moleküler Cihazlar ile HS-9Ax10 Axoclamp 900A |
| Ses monitörü | Radio Shack | 32-2040 | |
| Pipet tutucu | Warner Instruments | #MEW-F10T | Alternatif parçalar: bkz. Tartışma, Şekil 6A |
| Elektrot kurşun tel | Cooner tel | NEF34-1646 | (isteğe bağlı), Şekil 6D< / güçlü> |
| Amplifikatör kafa aşaması | için röle COTO Teknolojisi | # 2342-05-000 | (isteğe bağlı) Özel yapım bir baskılı devre kartı (UCSD Physics Electronics Shop) ile birlikte kullanılır, Şekil 6A-C< / güçlü> |
| Dijital video kamera | Basler | A602fm | (isteğe bağlı) Davranışsal izleme için, Şekil 7 |
| Puralube veteriner merhemi | Amazon.com, Inc | NC0138063 |
Kaynaklar
- Fee, M. S., Leonardo, A. Miniature motorized microdrive and commutator system for chronic neural recording in small animals. Journal of Neuroscience Methods. 112 (2), 83-94 (2001).
- Ventakachalam, S., Fee, M. S., Kleinfeld, D.
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Yeniden basım ve izinler
