Sentetik, doku mühendisliği kolorektal kanser modelleri, lazer microdissected stroma hücreleri ve moleküler profil invaziv ön ve kanserle ilişkili stromal hücre tümör hücreleri arasındaki ara yüzeyde ayırt edici karakterize biyoloji ve incelemek için bir yeni ve manuel olarak kullanılabilen bir yaklaşımı temsil etmektedir.
Bu içeriği görüntülemek için JoVE aboneliğiniz gereklidir. Giriş yapın veya ücretsiz denemenizi bugün başlatın.
Yöntem makalesi
Moleküler Kolorektal Kanser Hücrelerinin bir 3-Boyutlu Modeli İnvaziv tümör mikro Profili ve
Bu makalede
Özet
Özet
Kolorektal kanser işgalci (CRC) hücreleri, onların kardeş hücrelerden kurtulma stromayı sızmak ve hücre dışı matris (ECM) bozulmasina kapasitesini elde etmiş. Bu hücre fenotipik ayrı grubun biyolojisini karakterize ölçüde metastatik kaskad sırasında erken olayların anlayışımızı geliştirmek olabilir.
Tümör işgali malign epitel ve kanser bağlantılı stroma arasında çift yönlü etkileşimler tarafından kolaylaştırdı dinamik bir süreçtir. Bu ko-kültür ve lazer mikro-disseksiyon teknikleri Organotipik kombine tümör stroma-arayüzünde hücreye özel tepkileri incelemek amacıyla.
Fibroblastlar gibi önemli stromal bileşenleri 3-dimentioanally kanser epitelyal hücrelere sahip ortak-kültürlenir, olduğu Organik tip modeller, yakın pH incelenecek istila ve kansere stroma etkileşimi sağlayacak yüksek manuel olarak kullanılabilen deneysel araçlardırysiological koşulları.
Lazer mikrodisseksiyon (LMD) mikron düzeyinde hassasiyetle tümör dokusu içinde çeşitli katmanlarının cerrahi diseksiyonu ve çıkarma, gerektiren bir tekniktir.
Genomik Transkriptomik ve epigenetik profilleme ile bu teknikleri birleştirerek biz tümör hücreleri istila ve stromal doku çevresindeki moleküler özelliklerine daha derin bir anlayış geliştirmek ve bunu yaparken de potansiyel yeni biyomarkerler ve CRC ilaç gelişimi için fırsatlar ortaya hedefliyoruz.
Giriş
Organik tip ko-kültürler bu temel hücre-dışı matris bileşenlerini ihtiva eden bir 1-3 kollajen jel habis epitel hücreler ve stromal hücrelerin yan yana 3-boyutlu olarak in vivo tümör mikro-ortam içinde yeniden yardım doku mühendisliği modellerdir. Prensip olarak tümör istilasını ölçülmesi için bir yöntem olarak tasarlanmış, organotypics in vivo hayvan modellerinde bağımlılığı azaltmak ve bu bezine akın eden hücre, bir mono-dağılmış halde 2-4 içine yapay karşıya hareket ettiği Transwell tahlilleri, in vitro olarak, diğer tekniklerin eksikliklerini kaçının. Fibroblastlar gibi, bu modellerde görülen stromal hücreleri dahi....
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Protokol
Kolon Eksplantlarından Primer Fibroblast Kültürleri 1.. Kurulması
- Doğrudan cerrahi ameliyathanede normal insan kolon mukoza dokusu örnekleri elde edilir ve 7-10 içinde askıya PBS ml 100 birim / ml penisilin, 100 ug / ml streptomisin, ve / ml Fungizone, 0.25 ug ile takviye edilmiştir.
- Laboratuarda, 10 cm'lik bir doku kültürü çanağı merkezinde numune yerleştirin ve PBS / Pen-strep / fungizon ile 3 kez yıkayın. Son yıkamadan sonra aspire etmeyin.
- Steril forseps ve neşter ile (yaklaşık 2mm) küçük parçalar halinde doku kesilir ve 12 plaka olarak neşter ile çizilmiş bir haç merkezine her bir parçayı yerleştirin. Yapışması sağlamak için do....
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Sonuçlar
Biz CRC hücre hatları ve stromal hücrelerin çoklu kombinasyonlar için yukarıdaki yöntemi uyguladık. Burada sunulan bir örnek, primer insan ex vivo kolon fibroblastlar ile SW480 epitelyal hücre hatları olduğu, CRC. 3-boyutlu ko-kültürler istilacı tümör ön hücreler arasında farklı şekilde eksprese miRNAs karşılaştırılmasında mikroskopisi ve lazer yakalama mikro-kesim (Şekil 2) tabi tutuldu (Şekil 1), inşa edilmiş ve microRNA (miRNA) profil (Şekil 3) ile analiz ed.......
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Tartışma
Burada spesifik olarak izole edilmesi ve epitel hücreler ve stromal hücrelerin bir 3 boyutlu ko-kültür yapı metastatik ilerlemesi en erken aşamaları sırasında kanser bağlantılı stroma işgal etme kapasitesine kazanmış tümör hücrelerini karakterize etmek için bir yöntem tarif eder.
Ex vivo insan kolonik fibroblastlar ihtiva eden bir sentetik stroma ile yan yana CRC epitel hücrelerinin oluşan Co-kültür modelleri 3-boyutlu olarak CRC işgali yapısını incelemek için kullanılmıştır. In.......
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Açıklamalar
Yazarlar herhangi bir çıkar çatışmaları anlatmaktadır.
Teşekkürler
MB, MRC dostluk hibe finansmanı ile desteklenmektedir. KP ve AHM Wessex Tıbbi Araştırma ve Birleşik Krallık Kanser Araştırma / RCS (İngiltere) (C28503/A10013) hibe finansmanı ile desteklenmektedir. Biz Southampton Histokimyas Araştırma Birimi Üniversitesi'nin destek için müteşekkiriz.
....Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Malzemeler
| Ad | Şirket | Katalog numarası | Yorumlar |
|---|---|---|---|
| Kolorektal kanser hücre hatları - gösterilen örnek SW480 | ATCC | ATCC CCL-228 | |
| Kollajen | BD Biosciences | 354265 | |
| Matrigel | BD Biosciences | 354234 | |
| Naylon membran | Merck Millipore VVLP01300 | ||
| Metal ızgara | Mesh Şirketi | WSS20-A4 | themeshcompany.com |
| Lazer mikrodiseksiyon platformu | Leica Microsystems | Leica AS LMD | |
| Membran montajlı slaytlar | Moleküler cihazlar | ||
| Cresyl Violet | Merck Millipore 1052350025 |
Kaynaklar
- Nystrom, M. L., Thomas, G. J., Stone, M., Mackenzie, I. C., Hart, I. R., Marshall, J. F. Development of a quantitative method to analyse tumour cell invasion in organotypic culture. J Pathol. 205 (4), 468-475 (2005).
- Zhang, L., et al.
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Yeniden basım ve izinler
