Yöntem makalesi

A Guide In vivo Tek birim Kayıt

DOI:

10.3791/51757

⸱

7 Kasım 2014

 , 
1Institute of Neuroscience, University of Oregon

Bu makalede

Özet

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Burada, anestezi uygulanmış fare korteksindeki tanımlanmış inhibitör internöronlardan kararlı, iyi izole edilmiş tek birimli kayıtlar elde etme stratejimizi açıklıyoruz. ChR2 eksprese eden nöronlar, mavi ışığa verdikleri tepkilerle tanımlanır. Yöntem, standart hücre dışı kayıt ekipmanı kullanır ve kalsiyum görüntülemeye veya görsel olarak yönlendirilen yamaya ucuz bir alternatif olarak hizmet eder.

Özet

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Nörofizyolojideki büyük bir meydan okuma serebral kortekste çeşitli inhibitör hücre tiplerinin yanıtı özellikleri ve işlevini karakterize etmek olmuştur. Biz burada Lima ve 1 meslektaşları tarafından geliştirilen bir yöntem kullanılarak anestezi fare kortekste tespit inhibitör itibaren istikrarlı, iyi izole edilmiş tek ünite kayıtları elde etmek için strateji paylaşıyoruz. Kayıtlar spesifik sinir hücresi alt gruplarda channelrhodopsin-2 (CHR2) ifade eden farelerde gerçekleştirilmiştir. Nüfusun üyeleri mavi ışık kısa bir flaş kendi tepkisi ile tanımlanır. "PINP" olarak adlandırılan, ya da Nöronal Popülasyonlarının photostimulation destekli Kimlik - - Bu teknik, standart dışı kayıt ekipmanı ile uygulanabilir. Bu genetik olarak tanımlanan hücreler, hücre dışı kayıtları hedefleme amacıyla, kalsiyum görüntüleme veya görme güdümlü yama için ucuz ve erişilebilir bir alternatif olarak kullanılabilir. Here gündelik pratikte yöntemini optimize etmek için bir ilkeler kümesi sağlar. Bu parvalbumin pozitif (PV +) hücre hedeflenmesi için özel olarak bu strateji rafine edilmiş, ancak bu tür somatostatin salgılayan (som +) ve kalretinin salgılayan (CR +) internöronlar gibi, hem de diğer interneuron türler için geçerlidir bulduk.

Giriş

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Memeli beynini oluşturan sayısız hücre tipini karakterize etmek, nörofizyolojinin merkezi, ancak uzun süredir anlaşılması zor bir hedefi olmuştur. Örneğin, serebral korteksteki farklı inhibitör hücre tiplerinin özellikleri ve işlevi büyük ilgi gören konulardır, ancak hala nispeten bilinmemektedir. Bunun nedeni kısmen, geleneksel kör in vivo kayıt tekniklerinin farklı hücre tipleri arasında ayrım yapma yeteneklerinin sınırlı olmasıdır. Hücre dışı spike genişliği, varsayılan parvalbümin pozitif inhibitör nöronları uyarıcı piramidal hücrelerden ayırmak için kullanılabilir, ancak bu yöntem hem tip I hem de tip II hatalaratabidir 2,3. Alternatif olarak, kaydedilen nöronlar daha sonra morfolojik ve moleküler kimliklerini doğrulamak için doldurulabilir, geri kazanılabilir ve boyanabilir, ancak bu acı verici ve zaman alıcı bir süreçtir. Son zamanlarda, genetik olarak tanımlanmış inhibitör internöron popülasyonları, kalsiyum görüntüleme veya görsel olarak yönlendirilen yama kayıtları yoluyla erişilebilir hale gelmiştir. Bu yaklaşımlarda, bir kalsiyum raportörünün (GCaMP gibi) veya floresan proteinin (GFP gibi) viral veya transgenik ekspresyonu, promotör ekspresyonu ile tanımlanan hücre tiplerinin tanımlanmasına ve karakterizasyonuna izin verir. Bu yaklaşımlar, pahalı ekipman gerektiren 2-foton mikroskobunu kullanır ve ayrıca beyin dokusunun ışık saçma özellikleri nedeniyle yüzeysel kortikal tabakalarla sınırlıdır.

Son zamanlarda, Lima ve meslektaşları1, "PINP" veya Nöronal Popülasyonların Fotostimülasyon Destekli Tanımlanması olarak adlandırılan, in vivo genetik olarak tanımlanmış nöronal tiplere elektrofizyolojik kayıtları hedeflemek için yeni bir optogenetik uygulaması geliştirdi. Kayıtlar, belirli nöronal alt popülasyonlarda Channelrhodopsin-2 (ChR2) eksprese eden farelerde gerçekleştirilir. Nüfusun üyeleri, kısa bir mavi ışık parlamasına verdikleri tepkiyle tanımlanır. Diğer birçok optogenetik uygulamadan farklı olarak, amaç devre fonksiyonunu manipüle etmek değil, sadece genetik olarak tanımlanmış bir sınıfa ait nöronları tanımlamaktır, bu da daha sonra normal beyin fonksiyonu sırasında karakterize edilebilir. Teknik, standart hücre dışı kayıt ekipmanı ile uygulanabilir ve bu nedenle kalsiyum görüntülemeye veya görsel kılavuzlu yamaya erişilebilir ve ucuz bir alternatif olarak hizmet edebilir. Burada, anestezi uygulanmış işitsel kortekste belirli hücre tiplerinin PINPing edilmesine yönelik bir yaklaşımı, daha genel noktaların diğer preparatlarda ve beyin bölgelerinde yararlı bir şekilde uygulanabileceği beklentisiyle açıklıyoruz.

Kortekste, PIMP, inhibitör internöronların in vivo yanıt özelliklerini araştırmak için özel bir umut vaat ediyor. GABAerjik internöronlar, kortikal nöronların küçük, heterojen bir alt kümesini içerir4. Belirli moleküler belirteçlerin ekspresyonu ile işaretlenen farklı alt tiplerin, son zamanlarda kortikal devrelerde5-9 farklı hesaplama rolleri gerçekleştirdiği gösterilmiştir. Genetik araçlar geliştikçe, bu geniş sınıflara giren morfolojik ve fizyolojik olarak ayrılabilir türleri ayırt etmek mümkün olabilir. Burada, anestezi uygulanmış fare korteksindeki tanımlanmış inhibitör internöronlardan kararlı, iyi izole edilmiş tek birimli kayıtlar elde etme stratejimizi paylaşıyoruz. Bu strateji, parvalbümin pozitif (PV +) hücreleri hedeflemek için özel olarak geliştirilmiştir, ancak somatostatin eksprese eden (SOM +) ve kalretinin eksprese eden (CR +) internöronlar gibi diğer internöron tipleri için de işe yaradığını bulduk. PINPing kavramsal olarak basit olsa da, pratikte şaşırtıcı derecede inatçı olabilir. Deneme yanılma yoluyla, yöntemi deneyen diğer kişiler için yararlı olabilecek bir dizi ipucu ve püf noktası öğrendik.

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Protokol

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

NOT: Oregon Hayvan Bakımı ve Kullanımı Komitesi Üniversitesi tarafından onaylanan aşağıdaki protokol sağlık kuralları National Institutes uygundur.

1. Akut Cerrahi

  1. Intraperitonal (ip) enjeksiyon (Tablo 1) ile, bir ketamin-medetomidin kokteyl ile hayvan anestezisi.
    Not: Bu deneylerde kullanılan fare sürücü hatları (, SST-iCre12 SOM +; * Cr iCre12, CR + Pvalb-iCre11 PV +) interneuron bir CRE bağımlı ChR2 EYFP transgenik line10 çaprazlama yoluyla üretilir. CHR2 veya ilgili opsins viral iletim benzer ekspresyon düzeyleri elde varsayarak, eşit derecede iyi çalışmasıdır.
  2. Ameliyat başlamadan önce, emin olun hayvan sergiler nazik bir ayak tutam hiçbir yanıt olduğunu. Bu anestezi derinliği korumak için gerekli olarak deney boyunca anestezi yeniden yönetmek. Enjektabl anestezikler kullanıyorsanız, isteğe bağlı olarak bakım enjeksiyonlar için ip kateter implant.
  3. Tuzlu su ya da bakım enjeksiyonlar (Tablo 1), uygun bir şekilde seyreltilir anestezik kokteyli kullanarak, örneğin, deney boyunca laktatlanmış Ringer çözeltisi (yaklaşık 3 ml / kg / saat) ile sulu hayvan tutun.
  4. Sterotaksik veya diğer baş tutma cihazında hayvan yerleştirin. Kafatası iyi korunan emin olun. Bu kararlı tek hücre kayıtları muhafaza etmek için gereklidir.
  5. Kuruluğunu önlemek için gözlerin için opthalamic merhem sürün. 36,5-37 ° C vücut ısısını korumak.
  6. Ek kayıt istikrar için bir sisternal drenaj gerçekleştirin. Bir neşter bıçak kullanarak, sisterna magna maruz kafatasının arka yüzündeki doku kaldırmak. Serebrospinal sıvı boşaltmak için, dura içinde küçük bir çentik olun. Bıçağın sadece çok uç kullanın ve beyincik veya beyin sapıyla temas kaçının.
  7. Bisturi kullanarak, işitsel için (ilgi kortikal alanı üzerinde küçük bir kranyotomiyi (~ 2 mm 2) gerçekleştirmekkorteks bregmaya kabaca -2,3 mm posterior, orta hatta 4,5 mm lateral).
  8. Dura çıkarın ve sıcak 0.5 agaroz tabakası ile maruz korteksi kapak - 1 mm kalınlığında (tuzlu su içinde% 1.5 agaroz,% 0.9 NaCl, en geçerli ~ 37 ° C). Periyodik tuz birkaç damla damlatılarak deney boyunca agaroz nemli tutmak.

2. Kayıt Set-up

  1. Tungsten elektrot hazırlayın (7-14 MΩ, 127 mikron çapında, 12 ° konik ucu, epoksi kaplı). Bir cam kılcal tüp elektrodu superglue ve kavrama (Şekil 1) ısı ile büzülen boru ekleyin.
  2. Kortikal yüzeye dik seyahat için ayarlanmış bir motorlu (veya hidrolik) mikromanipülatör elektrot, monte edin. Kafatası karşı, deri altında bir tel zemin kaydırın. Onlar elektromiyografik eserler üretmek gibi baş tarafı ve boyun arkasındaki kasları ile temastan kaçının.
  3. Bir hücre dışı amfi kullanarak elektrik sinyali yükseltinTek ünite kayıt için uygun li fi er, tercihen bir empedans kontrol modu ile donatılmıştır. İki Osiloskoplara ve güçlendirilmiş hoparlör setini - devam eden spike aktivitesini (5000 Hz bant geçiren 300) izleyin. Burada, kaydedilen veriler 10 kHz örnekleme hızında sürekli sayısallaştırılmaktadır; ani çevrimdışı ayıklanır.
  4. Ucu korteks yüzeyine ulaşıncaya kadar agaroz aracılığıyla elektrot ilerlemek. Bir mikroskop aracılığıyla bu adımı gözlemleyin. "Sıfır" mikromanipülatör bu pozisyon.
  5. En iyi kayıt derinliğini tahmin etmek üzere görsel olarak penetrasyon sonunda elektrot geri çekildiği zaman, elektrot ucu sıfır derinlikte kortikal yüzeyinden çıkar olduğunu teyit etmektedir.
    Not: manipülatör okuma ve gözlenen elektrot konumu arasında bir farklılık bu dokuya göre sürüklenmiştir gösterir. Bu beyin ya da hayvan ya da manipülatör sürüklenme istikrarsızlık neden olabilir.
    1. Sağlamak için ilave bir kontrol olarakdoku ilk birkaç yüz mikrometre ile ilerletirken bu sıfır set-noktası korteks yüzeyine karşılık gelen, uyarıcı-uyarılmış alan potansiyelleri izlemek. Alan potansiyelleri izlerken, 10 Hz dışı amplifikatör alt bant geçiren filtre kesme indirin. Yerel alan potansiyelinin polaritesi tabakası I / II sınır 13 yakın, ~ 100 mikron derinliğinde etrafında tersine onaylayın. Bu işitsel korteks için güvenilir bir referans noktasıdır, ama diğer kortikal alanlar için farklı olabilir.
  6. Manuel bir mikromanipülatör üzerine bir mavi ışık kaynağı (Şekil 2) bağlı olan bir optik fiber monte edin. Mikroskop kullanarak, mümkün olan en agaroz yüzeyine yakın olarak, elyafın ucu yerleştirin. Elektrot dokuya girecek ışını Merkezlenmesi.
  7. Belirtilen genişlik ve duratio bir TTL (transistör-transistör mantığı) darbe katarı sunma yeteneğine bir kontrol ünitesi ile ışık kaynağının çıkış düzenleyenn, örneğin, bir Arduino (Şekil 3), (gösterildiği gibi), bir bilgisayar I / O kartı ya da ticari olarak temin edilebilir darbe üreteci.
    1. Her iki osiloskoplarda sinyali izleyin.
  8. Bir güç ölçer kullanarak fiber optik ucunda toplam ışık gücü (mW) ölçün. Elyaf çekirdeğin kesit alanına bölünmesi ile ışınlama (mW / mm2) hesaplamak için bu değeri kullanın. 10 aralığı içinde bir yoğunluk değeri ile başlayın - 15 mW / mm 2 ve gerekirse eserler ortadan kalkıncaya kadar aşağı doğru ayarlanır.
  9. Doku girmek için hazırlanıyor agaroz elektrot, hafif eserler için kontrol edin. Arama darbe tren başlatın (örneğin, 30 msn ışık darbeleri, 500 msn interstimulus aralığı (ISI)).
    1. Işığın açısını değiştirmek için elektrot için fiber optik göreceli konumlandırma geçici ışık eserler (Şekil 4) eleyin. Eserler devam ederse, ışık gücünü azaltmayı deneyin. The eserler tamamen (sadece minimize) elimine edilemez nadir durumda, arama darbenin süresini uzatmak. Bu doğru nöronal sivri tanınmasına yardımcı olabilir.

3. Düz PINP-in '

  1. Yaklaşık olarak 1 mm / sn bir hızda, beyin boyunca yavaşça elektrot ilerletin. Devam eden aktivitesini izlemek için bir osiloskop kullanın. Öte yandan, lazer impulslarından tetikleyebilir.
  2. Elektrot bir ChR2 + hücre yaklaşıyor ve sık sık elektrik sinyali osiloskop belirgindir önce iyi algılanan edilebileceğini belirtir ses monitörde ışık uyarılmış başak hafif bir 'karma', dinleyin. Avans hızını yavaşlatabilir.
    NOT: Hücre elektrot doğrudan yolunda yatıyor olursa, ışık uyarılmış aktivite büyük (ve yüksek sesle) artacak. Elektrot tek bir interneuron yaklaştıkça, karma eşit boyut ve şekle sahip küçük ama iyi tanımlanmış sivri olarak çözülür.
  3. En kısa sürede li gibiGHT-uyarılmış sivri ayrı osiloskop kapalı tetiklemek için yeterince büyük, bu yüzden yapmaya başlar. Başak dalga kesin şeklini gözlemlemek için yatay eksende ölçekleme ayarlayın.
  4. Durdurmak ve doku yerleşmek için bekleyin. Yakın hücreye elektrodu taşımak için günaha karşı. Bu adım, sabit bir kayıt için çok önemlidir. Birkaç dakika sonra sinyal-gürültü oranı gelişmiş değilse - ki, doku yerleşmiş, ancak herhangi bir yakın elektrot ucu hücreyi getirmemiştir - avansı 5 ileri um ve tekrar bekleyin.
    1. Tepe ya da aksiyon potansiyelinin çukur ya güvenilir bir gürültü kat (örneğin, +/- 300 mV veya daha fazla) üzerinde iyi ayarlanmış bir gerilim eşik ile çekilebilir kadar bu işlemi tekrarlayın.
      NOT: inhibitör internöronlardan PINPing zaman yanlış pozitif veya belirsizlik az risk var. Çoğu hücreleri kolayca 30 msn süresi ve inter-pul ile bakliyat bir tren takip edebilirsinizse aralığı 2-5 msn (Şekil 5) güvenilir bir ilk başak gecikme ile 500 msn, veya daha hızlı. PV + hücrelerinin büyük bir çoğunluğu, özellikle, bir tam olarak 1 sn (Şekil 6) ateşleme sağlanabilmektedir. Bu inhibitör nöronlar Çünkü, disinaptik (dolaylı) aktivasyonu önemli bir endişe değildir.
  5. Kayıt sırasında, ilk osiloskop devam eden etkinliğini izlemek. Boyutu ve ikinci osiloskop kullanarak sivri şekline yakın bir göz tutmak. Hoparlör kendi ses kalitesine dikkat edin.
    1. Hücre ya (onu kazığa veya hasar görme riski) elektrot çok yakın çizim belirtmek ani değişiklikler için dikkatle dinleyin, ya da uzağa sürüklüyor. Ani, büyük ve bozuk hale gelirse, dışarı geri; daha küçük büyürse, elektrot ilerlemek. 2 mikron adımda yavaş hareket.
    2. Zirve veya çukur için hizalanmış tüm başak dalga formları, atma tarafından kayıt sonrası hoc kalitesini onaylayın. Voltaj thres Varytutun. Eşik değerlerin geniş bir yelpazede, sadece hiç eşit yükseklikte (Şekil 5a) tutarlı bir başak şekli olmalıdır.
  6. Herhangi bir noktada sinyal bir komşu nöronun gelen sivri kirlenirse, hareket. Elektrot komşu hücre aralığının dışında geçer, ama hedef nöron aralığında kalacağını kapalı-şans, yavaş yavaş ilerlemek. (Bu genellikle başarısız olur.)
  7. Her penetrasyonu korteks (900+ mikron) tüm derinliği boyunca elektrot hareket ettirin. Işık-duyarlı nöronlar tersine, kayıtlar rutin komşu ChR2- hücrelerinden sivri ile kontamine birçok sızmalar veya sonra karşılaşılan, yeni bir elektrot deneyin.
    NOT: Hatta tek bir parti içinde, bireysel elektrotlar empedans ve ucu geometri önemli ölçüde değişebilir. Her iki faktör wh-ışık uyarılmış ani algılamak için yeterli büyüklükte olmalıdır elektrodun etkili "dinleme yarıçapı", katkıdaIle arama, henüz tek başına bir tek interneuron kayıt sağlayacak kadar sınırlı.
  8. Istediğiniz gibi elektrot empedansı test edin. Dokuya zarar görmesini önlemek için, iyi beyin dışında, agaroz tabakasının üst kısmında elektrodun ucu ile bunu. 7-14 MΩ aralığı içinde, tam olarak empedans bu uygulama için performans, veya verim kesin bir belirleyici değildir. Yani dinleme yarıçapı için makul bir vekil var, dedi: alt-empedanslı elektrotlar daha birimleri pick up; yüksek empedans, az.
  9. Deneyin sonunda, böyle anestezi derinliğinin düzlemi altında anestetik aşırı dozda, ya da servikal bozma gibi kurumsal onaylı vasıtasıyla, hayvan euthanize.

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Sonuçlar

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Biz burada "Lima ve ark. 1. Tablo 1 ayrıntıları önerilen anestezik kokteyl, ketamin-Medetomidin-acepromazine (tarafından geliştirilmiş bir Optogenetic yöntemi kullanılarak, anestezi fare kortekste genetik ilan inhibitör gelen tek birim kayıtları elde etmek için stratejimizi paylaşmak KMA "). Şekil 1 Şekil 4. 3 Arduino mikrodenetleyici ile ışık çıkışı yolluk için yapılandırma ve kodu içeren Şekil. 2 basit bir LED kontrol ünitesi için bir devre şeması ...

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Tartışma

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

PINP kavramsal olarak basit olmasına rağmen, pratikte zor olabilir. Başarının önemli bir belirleyici elektrot seçimdir. Elektrik dinleme çapı kritik bir parametredir. Bu ucu bazı mesafe uzakta bir ChR2 + hücreden hala zaman bir doğrultuda ilerleme hızını ayarlayabilirsiniz, böylece ışık-uyarılmış ani algılamak için yeterince büyük olmalıdır. Aynı zamanda, iyi bir tek birim izolasyonu sağlayacak kadar kısıtlanmalıdır. Bu elektrot da komşu ChR2- birimlerinden ani almak, olmamalıdır. Dinleme yarıçapı açısından doğru dengey...

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Açıklamalar

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Yazarların birbiriyle rekabet eden hiçbir mali çıkarı yoktur.

Teşekkürler

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Bu çalışma Whitehall Vakfı ve NIH tarafından finanse edilmiştir. Clifford Dax'a (Oregon Üniversitesi Teknik Destek İdaresi) ışık dağıtımı için bir devre tasarlama konusundaki yardımı ve uzmanlığı için teşekkür ederiz.

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Malzemeler

Bu makalede kullanılan malzemelerin listesi
AdŞirketKatalog numarasıYorumlar
ChR2-EYFP HattıJackson Kolonileri12569
Pvalb-iCre (PV) HattıJackson Kolonileri8069
Sst-iCre (SOM) HattıJackson Kolonileri13044
Cr-iCre (CR) HattıJackson Kolonileri10774
AgarozSigma-AldrichA9793Tip III-A, Yüksek EEO
Mikro Nokta (dural kanca)FST10066-15
Cerrahi MakasFST14084-09
NeşterFST10003-12 (sap), 10011-00 (bıçaklar)
Puralube Oftalmik MerhemFoster & Smith9N-76855
Homeotermik BattaniyeHarvard Aparatı507220F
Tungsten MikroelektrotlarA-M Sistemleri57720012 M & Omega; AC direnci, 127 & mu; m çapı, 12 derece; konik uçlu, epoksi kaplı
Kılcal Cam BoruWarner InstrumentsG150TF-3
Isıyla Daralan MakaronDigiKeyA332B-4-ND
Zapit HızlandırıcıDVASKU ZA/ZAAStandart Süper Yapıştırıcı ile kullanın.
Mikroelektrot AC Amplifikatör 1800Sistemleri700000
MP-285 Motorlu MikromanipülatörSutterMP-285
4 kanallı Dijital OsiloskoplarTektronixTDS2000C
Güçlendirilmiş HoparlörlerHarmanModeli JBL ve nbsp; Duet
Manuel ManipülatörScientificaLBM-7
800 & m Fiber Optik Yama KablosuThorLabsFC/PC BFL37-800
Güç ÖlçerThorLabsPM100D (Güç Ölçer), S121C (Standart Güç Sensörü)
475 nm Cree XLamp XP-EDigiKeyXPEBLU-L1-R250-00Y01DKR-NDLED gücü ve verimliliği sürekli artmaktadır, bu nedenle en son ürünleri (www.cree.com) kontrol etmenizi öneririz.
Arduino UNODigiKey1050-1024-ND

Kaynaklar

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Lima, S. Q., Hromadka, T., Znamenskiy, P., Zador, A. M. PINP: a new method of tagging neuronal populations for identification during in vivo electrophysiological recording. PLoS One. 4, (2009).
  2. Moore, A. K., Wehr, M. Parvalbumin-expressing inhibitory interneurons in auditory cortex are well-tuned for frequency. J Neurosci. 33, 13713-13723 (2013).
  3. Merchant, H., de Lafuente, V., Pena-Ortega, F., Larriva-Sahd, J. Functional impact of interneuronal inhibition in the cerebral cortex of behaving animals. Prog Neurobiol. 99, 163-178 (2012).
  4. Markram, H., et al. Interneurons of the neocortical inhibitory system. Nat Rev Neurosci. 5, 793-807 (2004).
  5. Atallah, B. V., Bruns, W., Carandini, M., Scanziani, M. Parvalbumin-expressing interneurons linearly transform cortical responses to visual stimuli. Neuron. 73, 159-170 (2012).
  6. Wilson, N. R., Runyan, C. A., Wang, F. L., Sur, M. Division and subtraction by distinct cortical inhibitory networks in vivo. Nature. 488, 343-348 (2012).
  7. Letzkus, J. J., et al. A disinhibitory microcircuit for associative fear learning in the auditory cortex. Nature. 480, 331-335 (2011).
  8. Pi, H. J., et al. Cortical interneurons that specialize in disinhibitory control. Nature. 503, 521-524 (2013).
  9. Adesnik, H., Bruns, W., Taniguchi, H., Huang, Z. J., Scanziani, M. A neural circuit for spatial summation in visual cortex. Nature. 490, 226-231 (2012).
  10. Madisen, L., et al. A toolbox of Cre-dependent optogenetic transgenic mice for light-induced activation and silencing. Nat Neurosci. 15, 793-802 (2012).
  11. Hippenmeyer, S., et al. A developmental switch in the response of DRG neurons to ETS transcription factor signaling. PLoS Biol. 3, 159(2005).
  12. Taniguchi, H., et al. A resource of Cre driver lines for genetic targeting of GABAergic neurons in cerebral cortex. Neuron. 71, 995-1013 (2011).
  13. Christianson, G. B., Sahani, M., Linden, J. F. Depth-dependent temporal response properties in core auditory cortex. J Neurosci. 31, 12837-12848 (2011).
  14. Povysheva, N. V., Zaitsev, A. V., Gonzalez-Burgos, G., Lewis, D. A. Electrophysiological heterogeneity of fast-spiking interneurons: chandelier versus basket cells. PLoS One. 8, 70553(2013).

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Yeniden basım ve izinler

Bu JoVE makalesinin metnini veya şekillerini yeniden kullanmak için izin iste

İzin iste

Etiketler

Optogenetik Tan mlamaKortikal nterneuronlarFotostim lasyon Yard ml Tan mlamaEkstrasell ler Amplifikat rMavi I k Stim lasyonuAnestezize Fare KorteksiTek nite zolasyonuElektrot lerlemesiSinyal g r lt Oran

İlgili makaleler