Periyodik asit Schiff boyama, dokuların polisakkarit içeriğini görselleştiren bir tekniktir. Bu makale, insan venöz kanından saflaştırılmış periferik kan mononükleer hücrelerinde kullanılmak üzere uyarlanmış periyodik asit Schiff boyama protokolünü göstermektedir. Bu tür örnekler, lenfositler ve bağışıklık sisteminin diğer beyaz kan hücreleri için zenginleştirilmiştir.
Bu içeriği görüntülemek için JoVE aboneliğiniz gereklidir. Giriş yapın veya ücretsiz denemenizi bugün başlatın.
Yöntem makalesi
Periyodik Asit Schiff Boyama ile periferik kan mononükleer hücreleri glikojen algılama
Bu makalede
Özet
Özet
Periyodik asit Schiff (PAS) boyama, kas biyopsilerinde ve kan örnekleri için bir tanı aracı olarak kullanılan immünohistokimyasal bir tekniktir. Glikojen, glikoproteinler ve glikolipidler gibi polisakkaritler, parlak macentayı lekeleyerek doku içindeki pozitif ve negatif hücrelerin numaralandırılmasını kolaylaştırır. Kas hücrelerinde PAS boyama, farklı kas hücresi tiplerindeki glikojen içeriğini belirlemek için kullanılırken, kan hücresi örneklerinde PAS boyama, çeşitli durumlar için bir tanı aracı olarak araştırılmıştır. Kan, bağışıklık sistemine ait beyaz kan hücrelerinin bir kısmını içerir. Bağışıklık sistemi hücrelerinin glikojene sahip olduğu ve onu bir enerji kaynağı olarak kullandığı fikri geniş çapta araştırılmamıştır. Burada, insan venöz kanından periferik kan mononükleer bağışıklık hücrelerine uygulanabilen PAS boyama protokolünün uyarlanmış bir versiyonunu açıklıyoruz. PAS pozitif granüllü küçük hücreler ve diffüz PAS boyaması olan daha büyük hücreler gözlendi. Numunelerin amilaz ile muamele edilmesi, lekenin özgüllüğünü doğrulayarak bu kalıpları iptal eder. Enzimatik sindirime dayalı alternatif bir teknik, numunelerdeki glikojenin varlığını ve miktarını doğruladı. Bu protokol, kan kaynaklı lenfositlerde polisakkarit içeriğini inceleyen hematologlar veya immünologlar için yararlıdır.
Giriş
Periyodik asit Schiff (PAS) boyama yaygın kas araştırma ve teşhis kullanılan bir immunohistokimyasal tekniktir. Aynı zamanda kan örnekleri üzerinde bir teşhis aracı olarak kullanılır. tekniği renksiz Schiff reaktifi böylece derin bir kırmızı ürünü üreten tepki polisakkarit oluşturarak aldehit grupları içinde birimler okside numune, periyodik asit çözeltisi uygulayarak çalışır. Bu işlem aşamaları, Şekil 1 'de gösterilmiştir. leke glikojen, glikoproteinler, glikolipidler, müsin veya polisakarit parçası ile diğer moleküller de dahil olmak üzere polisakaritler, kırmızı, herhangi bir şey döner.
PAS boyama, genellikle kas lifle....
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Protokol
İnsan kan örnekleri ile Araştırma Concordia Üniversitesi Etik Değerlendirme Kurulu, sertifika numarası 10000618. tarafından Concordia Üniversitesi Etik Değerlendirme Kurulu, sertifika numarası 2010BERG tarafından onaylanan fare kas çalışmalarını kabul edildi.
Tüm Blood 1. PBMC İzolasyon
NOT: Steril teknik ve üretici-sterilize ekipmanı kullanarak bir biyogüvenlik kabini bu prosedürü gerçekleştirin.
- Dikkatli bir şekilde 50 ml steril konik tüp içine heparinize (anti-koagülant), kan toplama tüpleri tam kan 10-15 ml dökün. Küçük kan dökülmeleri için, temizlik bezi kullanarak GKD 2 O ve% 70 EtO....
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Sonuçlar
Reaktifler ve temel tekniği doğrulamak için, PAS boyama fare soleus kas bölümlerinde üreticinin talimatlarına göre yapıldı. boyama kurban aynı gün yapıldı ve boyama son adımda, bölümler ksilen ile tespit edildi. Soleus Kas ~% 35 glikojen-pozitif hücrelerin 9 ihtiva ettiği bilinmektedir. lekeli, kas hücreleri, hücre içinde iki farklı PAS pozitif özellikleri-noktalı granüller görüntülenir ve hücre zarı (Şekil 2A) demarking işlem kesintisiz bir hat. noktalı granüllerin varlığının glikojen depola.......
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Tartışma
Bu video makalede kritik adım hücrelerin yıkanması ve amilaz işlemi sırasında idi. Slaytlar yıkarken önemli bir adım bir plastik sıkılabilir yıkama şişesi kullanarak ve su yavaşça slayt üzerinde numune üzerinden çalıştırmak izin ve örneklerin doğrudan hedefleyen değildi. Hatta ufak doğrudan su basıncı slayt dökülmek hücreleri neden olur. Bir başka önemli adım ± amilaz koşulları için aynı slayt kullanmak oldu. PBMC slayta yapıştırılmış sonra, dikkatli bir şekilde kayar, böylece yayma sadece yarısı amilaz çözeltisine maru.......
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Açıklamalar
Yazarların açıklayacak hiçbir şeyi yoktur.
Teşekkürler
Bu araştırma, NSERC Keşif programı hibe numarası RGPIN 418522-2013'ten alınan bir hibe ile desteklenmiştir. Yararlı tartışmalar için R. Kilgour'a ve fare kas bölümlerini sağladıkları için Katelin Gresty ve Dr. A. Berghdal'a teşekkür ederiz.
....Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Malzemeler
| Ad | Şirket | Katalog numarası | Yorumlar |
|---|---|---|---|
| Periyodik Asit Schiff Kiti |  Sigma-Aldrich | 395B | Kullanmadan önce oda sıcaklığına getirin. Bu kit içindeki malzemeler toksik ve zararlıdır. Dikkatli kullanın. |
| Domuz pankreasından α-Amilaz | Sigma-Aldrich | A3176 | |
| Binoküler Mikroskop | Carl Zeiss Microscopy | Axio Lab A0 | |
| Glikojen Analiz Kiti | Sigma-Aldrich | MAK016 | |
| Ficoll-Paque PLUS | VWR, GE Healthcare | 17-1440-02 | Sükrozun noniyonik sentetik polimeri. |
| Santrifüj | PBMC izolasyonu için açılı rotor (swing bucket) kullanılmıştır. |
Kaynaklar
- Rich, P. R. The molecular machinery of keilin's respiratory chain. Biochem. Soc. Trans. 31 (Pt 6), 1095-1105 (2003).
- Peter, J. B., Barnard, R. J., Edgerton, V. R., Gillespie, C. A., Stempel, K. E. Metabolic profiles of three fiber types of skeletal muscle in guinea p....
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Yeniden basım ve izinler
