Pamuk fareleri son derece heyecanlıdır ve güçlü bir kaç ya da savaş tepkisine sahiptir. Hayvanların stresini azaltmak için optimize edilmiş bir işleme yöntemi tanımlanmıştır, bu da pamuk farelerini klinik öncesi bir model olarak daha erişilebilir hale getirecektir.
Bu içeriği görüntülemek için JoVE aboneliğiniz gereklidir. Giriş yapın veya ücretsiz denemenizi bugün başlatın.
Yöntem makalesi
Oncolytic virüs klinik öncesi Değerlendirme Çalışmaları Pamuk Rat Taşıma
Bu makalede
Özet
Özet
Onkolitik virüsler, sağlıklı hücreleri sağlam bırakırken tümör hücrelerini hedef alma yeteneğine sahip yeni bir antikanser tedavisidir. Bu stratejinin başarılı olması için, son çalışmalar konak bağışıklık sisteminin tutulumunun gerekli olduğunu göstermiştir. Bu nedenle onkolitik viroterapi, immünkompetan bir model bağlamında değerlendirilmelidir. Ayrıca, tolere edilmiş hayvan modellerinde antitümör tedavilerin incelenmesi, klinik çalışmalarda görülen sonuçları daha iyi özetleyebilir. Solunum yolu virüslerini incelemek için yaygın olarak kullanılan pamuk sıçanları, meme karsinomu ve osteosarkomun sinjeneik modelleri iyi kurulmuş olduğundan, onkolitik viroterapiyi incelemek için çekici bir modeldir. Bununla birlikte, bu son derece uyarılabilir kemirgenler için uygun kullanım prosedürü hakkında yayınlanmış bilgi eksikliği vardır. Özetlenen taşıma ve yakalama yaklaşımı, deneyleri kolaylaştırmak için hayvan stresini en aza indirir. Bu teknik, araştırmacının kullanım sırasında sakin kalma ve prosedürleri zamanında gerçekleştirme becerisine bağlıdır. Son olarak, tutarlı subkutan tümör oluşumu için pamuk sıçan meme tümör hücrelerinin nasıl hazırlanacağını ve intratümöral ve intraperitoneal enjeksiyonların nasıl gerçekleştirileceğini açıklıyoruz. Bu yöntemler, antitümör tedavisini incelemek için ilgili bir klinik öncesi model olarak pamuk faresinin gelişimini ilerleten çok çeşitli çalışmalara uygulanabilir.
Giriş
Onkolitik virüsler (OV) seçici olarak normal ve tümörlü hücrelerde 1,2 arasındaki biyokimyasal farklılıklar yararlanılarak tümör hücreleri içinde replike. Doğal olarak meydana gelen doğal tipte virüs ifade seçici oncolysis elde etmek için bir mutasyon gerekmez olanlar, seçici oncolysis elde etmek için tasarlanmış olmalıdır ki bu: Ovs iki türü vardır. Belirli bir tümör türü içinde mutasyonların koleksiyonu OV 2 normal hücreler üzerinde selektif büyüme avantajı doğasını belirler. kullanılarak Ovs güvenlik ve faydaları, klinik çalışmalarda 3-7'de gösterilmiştir. Onkolitik viroterapi alanında ilerlemelere rağmen iyi modeller Ovs antit....
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Protokol
NOT: kullanılan protokoller Hayvan Bakımı yönergelere Kanada Konseyi'ne göre McMaster Üniversitesi'nde kurumsal Hayvan Araştırmaları Etik Kurulu tarafından onaylanmıştır. Deneyler McMaster Üniversitesi Merkez Hayvan Tesisleri'nde gerçekleştirildi.
1. Kültürleme fazla tercih Hücreler
- Dulbecco tadil edilmiş Eagle ortamı (DMEM) içinde kültür fazla tercih hücreleri,% 10 fetal sığır serumu (FBS), 2 mM L-glutamin, 100 U / ml penisilin ve 100 ug / ml streptomisin ile takviye edilmiştir. 37 ° C 'de, T-150 doku kültürü şişelerinden hücreler korumak ve% 5 CO2. Geçiş hücreleri% 90 konfluent tek tabaka (2-....
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Sonuçlar
Nedeniyle pamuk sıçanların son derece heyecanlı doğası, aşina olmak ve bir klinik öncesi hayvan modeli olarak kullanımı kolaylaştıracak hayvanların stresi azaltmak için optimize prosedürler kullanılarak için. Uygun kullanım tekniklerinin kullanımı da araştırmacı riskini en aza indirecektir.
Pamuk fareleri kullanırken sakin kalmak zorunludur. sıçanlar son derece heyecanlı ve onların kafesini kaçmaya çalışacaktır. Bir zenginleştirme tüpü ve kaçış girişimleri en aza indirecek nestlets kullanılm.......
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Tartışma
Pamuk fareleri oldukça heyecanlıdır ve güçlü bir uçuş tepkisine sahiptir. Bu nedenle, hayvan üzerindeki aşırı stresi en aza indirmek için özel dikkat gösterilmelidir. Açıklanan kafes düzeni, zenginleştirme tüpünün yerleştirilmesi son derece önemli olmak üzere, hayvanların güvenli ve kolay bir şekilde yakalanmasına olanak sağlayacaktır. Kafesleri kurarken zenginleştirme tüplerinin boyut ve şekil gereksinimlerini karşıladığından ve kafese doğru yönde yerleştirildiğinden emin olun. Hayvan bakımına yardımcı olabilecek teknis.......
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Açıklamalar
Yazarlar, bu araştırmayla ilgili herhangi bir mali çıkar çatışması olmadığını kabul etmektedir.
Teşekkürler
Breanne Cuddington, Kanada Meme Kanseri Vakfı'ndan bir bursa sahiptir. Bu çalışma, Kanser Araştırma Derneği ve Kanada Kanser Derneği Araştırma Enstitüsü'nden (eski adıyla Kanada Meme Kanseri Araştırma İttifakı) işletme hibeleri ile desteklenmiştir. LCRT hücreleri için Ann Tollefson'a (Saint Louis Üniversitesi Tıp Fakültesi) ve pamuk faresi muhafazası ve sedasyon konusunda teknik yardım için Dr. Kathleen Delaney ve Marion Corrick'e teşekkür ederiz.
....Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Malzemeler
| Ad | Şirket | Katalog numarası | Yorumlar |
|---|---|---|---|
| Dulbecco' s değiştirilmiş Kartal' S Orta | Gibco | 11965-092 | Herhangi bir markayı kullanabilir |
| 1X Fosfat Tamponlu Salin | , | ||
| 200 mM L-glutamin | Gibco'yu | 25030164 | Herhangi bir marka |
| 100x Antibiyotik-Antimikotik | Gibco | 15240-062 | Herhangi bir marka |
| Fetal sığır serumu | Quality Biological Inc. kullanabilir. | 110-001-101HI | Herhangi bir marka |
| T-150cm 2< / sup> doku kültürü şişesi | Fisher Scientific | 14-826-80 | Herhangi bir markayı kullanabilir |
| 1X TypLE Express | Life Technologies | 12604-013 | |
| 12 oyuklu hücre kültürü plakası, düz tabanlı | Fisher Scientific | 08-772-29 | Herhangi bir markayı kullanabilir, doku kültürü ile muamele edilmiş |
| olmalıdır alamarBlue | Life Hücre | canlılığının belirlenmesi için alternatif bir reaktif | DAL1025 |
| Teknolojiler 8640 Teklad 22/5 Kemirgen diyeti | Harlan | 8640 | |
| 1/8" mısır koçanı kemirgen yatağı | Harlan | 7092 | |
| Nestlets | Ancare-Hamur | haline getirilmiş işlenmemiş pamuk lifinden yapılmış, tozsuz ve otoklavlanabilir | |
| 50 mL Konik tüpler | Fisher Scientific | 14-432-22 | Herhangi bir markayı kullanabilir, steril olmalıdır |
| İzofluran USP, %99,9, inhalasyon anestezik | Pharmaceutical Partners of Canada Inc. | M60302 | |
| %70 Etanol | Laboratuvarda hazırlayabilir | ||
| %10 Nötr Tamponlu Formalin | Sigma-Aldrich | HT501128 | Herhangi bir markayı kullanabilir |
| NAPCO NapFlow 1200 Sınıf II A/B3 Biyogüvenlik Mikrobiyolojik Güvenlik Kabini (hücre kültürü başlığı) | NAPCO | Modeli kullanılmış şu anda mevcut değil | Herhangi bir markayı kullanabilir |
| Thermo Fisher Scientific Hassas Isıtmalı Su | Banyosu Fisher Kullanılan Bilimsel | Model şu anda mevcut değil | Herhangi bir markayı kullanabilir |
| [header] | |||
| Reichert Parlak Çizgili Hematitometre | Sigma-Aldrich | Z359629 | Herhangi bir markayı kullanabilir |
| Typhoon Trio BioAnalyzer | Kullanılan GE Healthcare Yaşam Bilimleri | Modeli şu anda mevcut değil | Herhangi bir floresan plaka okuyucu kullanabilir |
| Tecan Safire2 Çok Algılamalı Mikroplaka Okuyucu | Tecan | Modeli kullanılmış şu anda mevcut değil | Herhangi bir floresan plaka okuyucu kullanabilir |
| Allegra 6R tezgah üstü santrifüj | Beckman Coulter | 366816 | Herhangi bir markayı kullanabilir |
| Masa Üstü Anestezi makinesi | VetEquip | Modeli şu anda mevcut değil | Herhangi bir markayı kullanabilir, taşınabilir olmalıdır |
| Wahl Fıstık Mini Makası | Wahl | Herhangi bir marka küçük makas kullanabilir | |
| İnsülin şırıngaları 29 G x 1/2', 0,3 mL | BD | 329464 | Herhangi bir markayı kullanabilir. İnsülin şırıngaları, sıçan yoluyla enjeksiyonları daha kolay hale getirdikleri için önerilir Sert cilt. |
| Pamuklu çubuklar | MedPro | 018-425 | Herhangi bir markayı kullanabilir |
| Keskin Uçlu Diseksiyon Makası | Fisher Scientific | 8940 | Herhangi bir markayı kullanabilir |
| Diseksiyon Doku Forseps | Fisher Scientific | 13-812-41 | Herhangi bir markayı kullanabilir |
Kaynaklar
- Cervantes-Garcia, D., Ortiz-Lopez, R., Mayek-Perez, N., Rojas-Martinez, A. Oncolytic virotherapy. Ann Hepatol. 7 (1), 34-45 (2008).
- Vaha-Koskela, M. J., Heikkila, J. E., Hinkkanen, A. E. Oncolytic viruses in cancer therapy. Cancer Lett. 254 (2), 178-216 (2007).
- Abril, C., et al.
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Yeniden basım ve izinler
