Biz insan meme hormon eylem incelemek için yeni bir ex vivo modeli geliştirdik. Bu doku mimarisi, hücreler arası etkileşimleri ve parakrin sinyal korumak cerrahi göğüs doku numunesinin izole doku mikro dayanmaktadır.
Bu içeriği görüntülemek için JoVE aboneliğiniz gereklidir. Giriş yapın veya ücretsiz denemenizi bugün başlatın.
Bu makalede
Düzeltme bildirimi
Important: There has been an erratum issued for this article. View Erratum Notice
Özet
Özet
İnsan meme hormon eylem çalışması yeterli model sistemler eksikliği engel olmuştur. İn vitro kültüre, primer meme epitelyum hücreleri hormon reseptörü ifade kaybetme eğilimindedir. Yaygın olarak kullanılan hormon reseptörü pozitif meme kanseri hücre kuşakları in vivo duruma uygunluğu sınırlıdır. Burada, insan meme hormon etkisini incelemek için bir eks vivo modeli açıklar. Böyle azaltma tekniği mevcut ameliyat teknikleri veya mammectomies gibi cerrahi ıskarta malzeme Taze insan meme doku örnekleri mekanik ve enzimatik kanalları ve lobülleri ve çoklu stromal hücre tipleri içeren doku parçaları elde etmek için sindirilir. Büyüme faktörleri olmaksızın bazal ortamda tutulur Bu doku mikro bunların hücreler arası temas doku normal yapı, ve birkaç gün boyunca duyarlı hormon kalır. Bu maddeler hali hazırda, RNA ve protein çıkarma, histolojik analiz için işleme veya orta dondurma saklanır. Floresanaktif hücre ayrıştırma (FACS) belirli bir hücre popülasyonlarının zenginleştirilmesi için de kullanılabilir. Bu protokol son derece karmaşık, çeşitli insan örnekleri ile öteleme çalışmalar için basit, standart bir yaklaşım sağlar.
Giriş
Meme kanserinde mutasyon manzara hakkında bilgiler hızla artmaktadır. Daha az dikkat meme kanseri gelişimini etkileyen sistemik faktörler ödenmiştir. Üreme hormonları maruz kalma hastalığın ilerlemesine 1-3 üzerinde büyük bir etkisi vardır. Ancak, üreme hormonları, insan meme çarpmadan hangi mekanizmalar tam olarak anlaşılamamıştır. Genetiği fare modelleri ile çalışmak onlar birkaç mansap efektörlerinin 4 ile hücre içsel ve parakrin sinyal içerdiğini ortaya koymuştur.
İnsan meme hormon eylem hakkında sınırlı bilgi yeterli modellerin eksikliği büyük ölçüde kaynaklanmaktadır. Östrojen reseptörü (ER), progesteron resept....
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Protokol
Genel değerlendirmeler: Zaman Ahead, bir etik protokolü kurmak, hastalar için anketler hazırlar, ve klinik personelinin eğitim görmek. Indirgeme mamoplasti cerrahi malzeme kullanmadan önce, yetkileri tedarik ve hasta rıza sağlamak. Doku bulaşıcı olması ve buna göre ele alınması gerekiyor olabilir. Deneysel Kanser Araştırma Enstitüsü İsviçre - Bu protokol ISREC etik komitesi tarafından onaylandı.
1. Doku Kurtarma, İşleme ve Biyo-bankacılık
Biyo-bankacılık için en uygun örnek kalitesini sağlamak için, birkaç adım laboratuarına taşımak için önce hastanede yapılır.
Hastanede:
- G....
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Sonuçlar
Östrojen ve progesteron rolünü incelemek ve daha iyi insan meme moleküler işlevlerini anlamak için, onların bilgilendirilmiş onam alındıktan sonra azalma tekniği mevcut ameliyat teknikleri (Şekil 1) uygulanan hastalarda taze insan meme doku örneklerinin toplamak. Biz de hastaların tıbbi ve üreme geçmişi, hem de ameliyat sırasında serum progesteron seviyelerini belirlemek için kan örneği almak. Taze azaltma tekniği mevcut ameliyat teknikleri doku mekanik ve enzimatik ayrışmış. Elde edilen doku, mikro kök.......
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Tartışma
Burada anlatılan ex vivo kültür normalde insan kadın meme bulunan diğer hücre tipleri ile birlikte sağlam kanalları ve lobülleri içeren meme dokusu mikro sağlar. Genellikle azaltma tekniği mevcut ameliyat teknikleri elde edilen insan göğüs dokusunun işlenmesi sırasında, yağ dokusu, stromal matrisin mekanik ve enzimatik sindirme ve kırmızı kan hücrelerinin lizizine çıkarılması süt kanalı parçaları ve terminal duktal lobüler birimleri zenginleştirir. Sağ süresince doğru konsantrasyonda yumuşak enzimatik sindirimi.......
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Açıklamalar
Yazarlar ifşa hiçbir şey yok.
Teşekkürler
Yazarlar mamoplasti fotoğrafı sağlamak için Lozan Üniversitesi Hastanesi M. Fişini teşekkür, M. Wirth ve Deneysel Kanser Araştırma Enstitüsü İsviçre, Araştırma Moleküler Onkoloji Yeterlilik Ulusal Merkezi, Yaşam Bilimleri Okulu, Ecole Polytechnique Fédérale de A. Ayyanan eleştirel yorumlar için Manchester Üniversitesi teknik yardım için Lozan ve R. Clarke. Bu sonuçlara önde gelen araştırma herhangi bir hibe anlaşması kapsamında SNF3100A0-112090, Oncosuisse 531.817 ve Yenilikçi İlaçlar Girişimi Ortak Taahhüt destek aldı. Avrupa Birliği'nin Yedinci Çerçeve Programı (FP7 / 2007-2013) ve tür katkı İlaç Sanayi ve Dernekleri şirketlerin 'Avrupa Federasyonu mali kat....
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Malzemeler
| Ad | Şirket | Katalog numarası | Yorumlar |
|---|---|---|---|
| Mikrolitre Santrifüj | Heraeus Biofuge Fresk | 75005521 | |
| Santrifüj 5810R | Eppendorf | 5810 000.327 | |
| Cryobox | Nalgene | 5100-0001 | |
| Kontrollü Hız Dondurucu EF600 Hibe | Asimptote | EF600 | |
| CO2 inkübatörü | Hera Cell Heraeus | 51022391 | |
| Silindirli Mikser SRT9D | Sturt | SRT9D | |
| Histoloji Kasetleri | Medizintechnik | 81-0021-00 | |
| Hücre Süzgeci | Falcon | 352340 | |
| Strile Cerrahi Bıçak | Aesculap | BB536 | |
| Neşter | Aesculap | BB084R | |
| Forseps | Aesculap | BD047R | |
| Makas | Aesculap | BC374R | |
| Parafin taban kalıbı | SAKURA | 4166 | |
| Optimal Kesme Sıcaklığı (OCT) Kriyomatris | Termobilimsel | 6769006 | |
| Penisilin / Streptomisin ve nbsp; | Yaşam Teknolojileri | 15070-063 | |
| Antibiyotik/Antimikotik | Yaşam Teknolojileri | 15240-062 | |
| DMEM F/12 | Yaşam Teknolojileri | 11039-021 | Ön Isıtma (37 ° C) |
| Kollajenaz | Roche | 11 088 793 001 | Ön ısıtma (37 > C) |
| Fetal Sığır Serumu Yaşam | Teknolojileri | 10270 | Fetal Buzağı Serumu |
| Hücre Kan Lizis Tamponu | Sigma | R7757 | |
| Dimetil sülfoksit (DMSO) | Sigma | D2650 | |
| Tripsin-EDTA | Yaşam Teknolojileri | 15400-054 | |
| Agaroz | Invitrogen | 16500-500 | |
| ile değiştirilebilirFormaldehit | Sigma | F1635 | |
| Paraformaldehit | Roth | 335 | |
| İzopentan | Sigma | M32631 | |
| Etanol | Merck | 1009831000 | |
| Kriyojenik şişeler (5.0 ml) | VWR, Uluslararası | 479-0820 | |
| Ultra düşük ataşman kültür kabı | Corning, NY 14831 | 3471 |
Kaynaklar
- Beral, V. Breast cancer and hormone-replacement therapy in the Million Women Study. Lancet. 362 (9382), 419-427 (2003).
- MacMahon, B., et al. Age at first birth and breast cancer risk. Bull World Health Organ. 43 (2), 209-221 (1970).
- Pike, M. C., Krail....
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Yeniden basım ve izinler
Düzeltme
Formal Correction: Erratum: An Ex Vivo Model to Study Hormone Action in the Human Breast
Posted by JoVE Editors on 2/01/2015. Citeable Link.
A correction was made to An Ex Vivo Model to Study Hormone Action in the Human Breast. There was an error with the author, Marie Shamsheddin's, name. The author's name has been corrected to:
Marie Shamseddin
instead of:
Marie Shamsheddin
