Africanized ve Avrupa Bal Arısı Made by beebread besin tuzu karşılaştırılması yöntemleri ve Hemolenf Protein Titrelerin Etkileri

Özet

İşte iki bal arısı alt türü tarafından arı ekmeğine dönüştürülmeden önce ve sonra polendeki besin maddelerini ölçme yöntemleri. Her iki alt türde de arı ekmeği tüketimini ve bunun sonucunda ortaya çıkan protein titrelerini ölçmek için teknikleri açıklıyoruz.

Özet

Bal arılarının beebread olarak kovanda topladıkları polen ve mağaza besinleri almak. Biz arıların toplamak ve özel olarak inşa edilmiş kapalı uçuş alanı koloniler koyarak beebread dönüştürmek polen kaynağını kontrol etmek yöntemler geliştirdi. Yöntem polen ve beebread protein ve amino asidi bileşimi analizi için geliştirilmiştir. Biz de beebread tüketimi ölçülen ve yöntemler ortaya çıkması sonrasında 4, 7 ve 11 gün süreyle beebread üzerinde beslendikten sonra yetişkin işçi arı hemolimf protein titreleri belirlemek için kullanılmıştır açıklar. Yöntem genotip beebread polen dönüştürmeyi ve arılar tüketir ve bu proteini elde oranını etkiler olup olmadığını belirlemek için kullanılmıştır. İki alttür (Avrupa ve Africanized bal arıları, sırasıyla EHB ve AHB) aynı polen kaynağı ile sağlandı. Gelişmiş yöntemlere dayanarak, her iki alt türü tarafından yapılan beebread polen daha düşük protein konsantrasyonu ve pH değerlerine sahiptirler. Genel olarak, asit con aminoya EHB veya AHB tarafından yapılan beebread olarak deùerleri benzerdir ve polen daha beebread yüksek seviyelerde gerçekleşmiştir. -AHB Ve EHB Hem EHB göre daha AHB yapılan beebread önemli ölçüde daha fazla tüketilmesi. EHB ve -AHB beebread her tür benzer miktarlarda tüketilen rağmen, AHB içinde hemolimf protein konsantreleri EHB daha yüksek bulunmuştur. AHB ve EHB arasındaki protein edinimi farklılıklar her alttür gelişti coğrafi bölge ile ilgili çevresel uyarlamalar yansıtıyor olabilir. Bu farklılıklar nedeniyle damızlık yetiştiriciliği ve koloni gelişimi üzerindeki etkileri Yeni Dünya AHB nüfus başarılı kurulmasına katkıda bulunabilir.

Giriş

Beslenme bal arısı kolonilerinin sağlık ve canlılığı ve nüfus olarak kendi işyerinde temel bir rol oynar. Gıda Besinler enerji ve kuluçka yetiştiriciliği, termoregülasyon için gerekli biyokimyasal bileşenleri, yiyecek arama ve immün yanıtı sağlamak. Bal arısı kolonilerinin için, besin koloni popülasyonları büyümek ve sağlık nektar ve polen gelen korumak için gerekli. Nektar karbonhidrat sağlar ve polen gibi protein, lipit, vitamin ve mineraller ¹ olarak kalan beslenme gereksinimleri sağlamaktadır.

Bal arılarının subspecies gibi işçi uzun ömürlü, yavru yetiştiriciliği ve sosyal dokunulmazlık ^2-6 mekanizmaları gibi besin temelli koloni düzeyinde parametreleri farklı olabilir. Bu farklılıklar gıda, özellikle polen kolonisi tarafından işlenen ve bireylerde sindirilir nasıl bağlantılı olabilir. Polen kimyasal değişti tarak hücrelerinde ve mikrobik kaynaklı laktik asit fermantasyonu ile saklanır ^{7-10. Fermente polen beebread olarak adlandırılır. Orada topladıkları polen ve mağaza besin elde etme yeteneği alttür arasındaki genotipik farklılıklar olabilir ve bu koloni büyüme ve hayatta kalma etkileyebilir. Gıda işleme ve besin edinimine genotipik etkileri aynı gıdalar 11-14 tüketirken bazı kişiler diğerlerinden daha fazla besin ve kalori elde etmek neden diğer organizmalarda belgelenmiştir.}

Burada bal arılarının değişik alttürü tarafından yapılan kompozisyon ve beebread tüketimini karşılaştırmak için kullanılan yöntemleri açıklar. Yöntem işçi arıların neden hemolimf protein titreleri de tarif edilmiştir ölçmek için. Beebread besin bileşimine Önceki çalışmalar Avrupa bal arıları (EHB) ^10,15,16 ile yapıldı. Ancak, aynı polen yem bile farklı alttür arılar tarafından yapılan beebread farklılıklar olabilir. EHB ve AHB karşılaştırıldı bu denizaltılar, çünküPECIES gıda işleme ve besin satın ¹⁷ ile ilgili olabilecek farklı davranış ve fizyolojik farklılıklar var. En önemli farklılıkların bazıları AHB toplamak ve EHB daha fazla polen tüketmek ve kuluçka ¹⁸ içine daha kolay dönüştürmek gibi görünüyor vardır. AHB kolonileri EHB daha yüksek kaynaşma fiyat bilgisi ve gıda kaynaklarının kısıtlı ^19-23 olduğunda abscond. Absconding EHB nadirdir. AHB de EHB ²⁴ daha yüksek metabolik oranları var. EHB ve AHB arasındaki koloni düzeyi farklılıklarını beslenme temeli ve aynı zamanda besin içeriği o beebread dönüştürülür sonra (örneğin, amino asitler ve protein) için polen toplama oranı ile ilişkili olabilir. Beebread tüketimi ve ortaya çıkan protein edinimi de EHB ve AHB arasındaki koloni düzeyinde farklılıklar bir rol oynayabilir. Geliştirilen yöntemleri kullanarak, EHB ve AHB aynı polen kaynağı beebread yaptı. beebread sonra EAC arılar geri beslenmiştirh alttürü ve arılar kendi alttür veya beebread kaynağına özgü bir şekilde beebread proteini elde olmadığını belirleyebilir.

Protokol

1. AHB ve EHB Kolonileri gelen beebread Alınması

1. Bal arısı kolonilerinin üzerinde polen tuzakları yerleştirin ve polen toplamak. Bir kahve değirmeni kullanarak (anterlerden döken polen benzer) ince bir toz haline polen öğütün.
2. Arılar sadece verilen polen üzerinde yem böylece kapalı bir uçuş alanı (EFA) 5 koloni AHB ve EHB her kurulması. Arılar aralarında geçemez böylece EHB ve AHB koloniler arasında sürüklenen işçi önlemek için, ayrı bölüme EFA bölmek. 3,500-4,000 işçi arıların, EFA her bölümde nektar, bal, olgunlaşmamış kuluçka ve boş tarak ile balmumu tarak bireysel EHB veya AHB kolonileri yerleştirin.
   NOT: Kurulan zaman koloniler polen depolanmış yok. polen depolanır oranı koloniler bir döşeme kraliçe içermeyen artırılabilir.
3. EFA her bölümünde polen ile bir tepsi koyarak koloniler zemin polen besleyin. O foragin böylece her tepsi üzerinde polen yaklaşık 60 g Yayılmag arı o kadar corbicular yükleri toplamak ve beebread olarak kolonilerinde polen saklayabilirsiniz. 3 hafta boyunca her gün, her tepsi üzerinde taze polen sunmaya devam.
4. Avrupa beebread (EBB) olarak, ve Africanized beebread (ABB) olarak Africanized kolonilerin Avrupa kolonilerden beebread bakın.

Kafeslerde 2. Beslenme Arılar

1. Bir çevre odasında ayrı çıkması kafeslerde AHB ve EHB kolonilerden kapalı işçi damızlık Yeri çerçeveleri 32-34 ° C ve% 40 bağıl nemde set ..
2. İşçiler ortaya ve yaklaşık 24 saat eski olduğunda, 12 pleksiglas biyoanaliz kafesleri (boyutları = 11,5 x 7,5 x 16,5 cm ³⁾ kurmak ve 100 yeni ortaya çıkan EHB veya her kafese 100 yeni ortaya çıkan AHB işçi arılar ya ekleyin. AHB beslenen ABB, EHB beslenen ABB, AHB beslenen EBB ve EHB beslenen EBB: Aşağıdaki tedavi kombinasyonları oluşturmak için her kafeste EBB veya ABB ya hücrelerin bilinen bir sayı (kafes başına 24-30 hücre) ile tarak bir bölümünü yerleştirin. (4 tedaviler, 6Tedavi başına kafesleri; Toplam 24 kafesler).
3. Her bir kafes hacimce formüle su şişeleri ve% 50 bal ve su solüsyonu ekleyin. 11 günlük bir çalışma dönemi için günlük bal ve su şişeleri tekrar doldurun.

3. Örnekleme İşçi Arılar ve beebread ve tahmin Tüketim

1. Örnek 10 yeni önceki kafeslerde onları yerleştirerek EHB ve AHB işçileri ortaya çıktı. Gün 0 arılar gibi bunlara bakın ve onları hemolimf protein konsantrasyonları için temel olarak hizmet var.
2. Onlar 4, 7, ve 11 gün boyunca EBB veya ABB beslenen sonra her kafesten 10 arıları çıkarın.
3. Bireysel mikrosantrifüj tüpler canlı arılar koyun ve buz paketleri üzerinde ayarlayın. Hemolimf protein konsantrasyonu analizi için dört arı bir alt-numûnesinin seçin.
4. Gün-11 arılar örnekleme sonra, hala beebread ihtiva tarak hücrelerinin sayısını. Bu beebread tüketiminin bir nispi ölçüdür.
5. Her bir kafes içinde hücrelerden geri kalan beebread çıkarın ve Separ saklamakkafese göre mikrosantrifüj tüpleri yedi. PH, çözünür protein konsantrasyonu ve amino asit içeriği için analiz edilene kadar -80 ° C'de beebread örnekleri tutun.

4. Polen ve beebread pH tahmin

1. EFA arıların beslenen polen altı rastgele 0.3 g numune alın ve damıtılmış su, 300 ul içinde çözülür. 0,01 hassasiyetle bir su geçirmez çift kavşak pH mızrak kullanarak pH'ı ölçün.
2. Her bir kafeste 11 günlük besleme döneminden sonra kalan beebread 0.3 g örneği alın. Polen (4.1) için tarif edildiği gibi saf su ve ölçü pH 300 ul beebread çözülür.

5. Protein Analizi

1. Altı polen örnekleri ve her kafes EBB ve ABB bir örnek almak. -20 ° C'de saklayın örnekleri çözünür protein konsantrasyonu açısından analiz edilene kadar.
2. 0.1 M fosfat tampon çözeltisi (PBS) 1000 ul polen ya da beebread ya 20 mg karıştırın.
3. Vo1 dakika boyunca 571,2 x g'de 10 saniye ve santrifüj Karışımı rtex.
4. 96 gözlü düz tabanlı EIA / RIA polistiren bir levhanın gözleri içine yüzer tabakanın ve yerine bir 10 ul numune çıkarılmaktadır. Üç kuyu her örnek çoğaltın.
5. (Isıtıldı ve bir iğne sivri çekilmiş olan) kanatlı eklenme noktasının yakınında göğüs sağ yan kısmına, bir 20 ul kılcal tüp ekleyerek, herbir kafes toplanan arılar hemolimf çizin. Karın tergites arasındaki zarı içine aynı tüp takarak, gerekirse ek hemolimf toplayın.
6. 0.1 M PBS 9 ul hemolimf 1 ul ekle. Çözünür protein için analiz edilene kadar -20 ° C'de hemolimf çözeltisi saklayın.
7. Ticari bir Bradford protein deneyi kiti kullanılarak toplam polen, beebread çözünür protein konsantrasyonlarını ve hemolimf örnekleri belirler. Üreticinin talimatlarını izleyin.
8. Çözünür protein c tahmin etmek bir standart eğri kurmakoncentration büyükbaş hayvan serum albumin (BSA) içinde bilinen bir protein konsantrasyonları, protein absorbans ölçülerek örneklerinde. Bir spektrofotometre kullanılarak 595 nm'de protein absorbansı ölçülür.

6. Amino Asit Analizi

1. Her koloninin tarak hücrelerinden Havuz bireysel analiz için numuneler EBB ve ABB temsilcisi örnek oluşturmak için.
2. 50 mg polen al ya beebread örnek örnekleme şişelerine konuldu ve d _4-alanin oluşan 50 ng / ml iç standart solüsyonu, 100 ul ile birlikte şişeye damıtılmış su, 1 ml ilave d ₂₃ -lauric asit, ¹³ ° C ₆ -glükoz d ₃₉ -arachidiac asit elde edildi.
3. 5 dakika boyunca numune ve sonikasyon Cap.
4. Metanol, 1 ml ilave etmek suretiyle bir HLB KARTUŞU, beebread ve polen numune, 1 ml ilave edilir, damıtılmış suyun 1 mL eklenerek dengelenir. % 5.0 MeOH / _H2O ve ELU 1 ml kartuş yıkayın% 80 MeOH / _H2O 1 ml te
5. Bir azot akımı altında kuruyana kadar örnek buharlaştırın. Piridin ve 50 ul ve N, O-Bis (trimetilsilil) trifloroasetamid + Trimetilklorosilan (BSTFA + TMCS), 100 ul ile yeniden oluşturun.
6. Kapak 30 dakika süreyle 70 ° C'de inkübe edilir ve örnek.
7. Örnek soğutmak ve temiz bir otomatik numune şişesine aktarmak için izin verin.
8. Bir Kütle Seçici Dedektör içine Cap ve numuneyi uçucu bileşikler ve organik asitler hem örnekleri analiz etmek için bir gaz kromatografa arabirim. BSTFA + TMCS 1.0 um film kalınlığı olan bir sütun (30 x 0.25 mm iç çap) kullanılarak TMS türetme aşağıdaki şeker ve organik asitler ayırın.
9. 2 dakika boyunca 50 ° C'de sütun fırın ayarlayın, sonra 5 ° C / dakika ile 290 ° C'ye kadar doğrusal olarak sıcaklık artışı. ve 7 dakika tutun. Sırasıyla, 250 ° C ve 290 ° C GC enjektörü ve GC / MS arayüzü ayarlayın.
   1. Bir flo bir taşıyıcı olarak Helyum kullanın1.0 ml / dak ağırlık oranı. 230 ° C MS kaynak sıcaklığını ayarlayın.
10. Ayarlama ve perflorotirbütilamin (PptBA) günlük kütle spektrometresi kalibre. Varlığı ile ilgili veri ve amino asit konsantrasyonlarının elde edilmesi için tam tarama (35-700 amu) pozitif iyon modunda PptBA bir 1 ul enjeksiyon kullanın.

Sonuçlar

Beebread pH ve protein konsantrasyonu için analiz edilmeden önce en az bir ay süreyle -80 ° C'de saklanır ve amino asit analizi önce yaklaşık 4 ay süren. Beebread pH ve protein konsantrasyonu (Şekil 1) polen ile farklılaştığı keşfedildi. Protein konsantrasyonu olarak beebread pH polen daha düşüktür. EHB ve -AHB Hem EBT (Şekil 2) daha fazla ABB tüketti.

AHB hemolimfi çözünür protein seviyeleri, tüketilen beebread tipine (Şekil 3) EHB önemli ölçüde daha yüksek idi. EHB ve -AHB beebread her tür benzer miktarlarda tüketilen halde hemolimf protein düzeylerinde bu farklılıklar meydana geldi. örnekleme sırasında arıların yaşı anlamlı hemolimfteki çözünür protein konsantrasyonları etkilemiştir. Protein konsantrasyonları farklı değildi gün-7 ya da 11 ile karşılaştırıldığında gün 4 arılar anlamlı olarak düşüktü.

bal arıları için gerekli olan 10 amino asitlerden _content ">, histidin ama polen tespit edilmiştir. Bir çok durumda, beebread ölçülen amino asit konsantrasyonu (Şekil 4). Örneğin, konsantrasyon polen daha yüksekti lösin ve treonin poleni ile karşılaştırıldığında beebread yaklaşık% 60 daha yüksek olduğu, ve valin konsantrasyonları, yaklaşık% 25 daha yüksekti. Alanin, aspartik asit, glutamin, ve metiyonin düzeyleri de polen daha beebread yüksekti. Amino asitler konsantrasyonları arasında büyük farklılık fenilalanin ve sistein hariç ABB ve PDR. Fenilalanin seviyeleri EBT veya polen ya kıyasla ABB ile ilgili olarak iki kat daha yüksektir. Sistein konsantrasyonları ABB veya polen ile karşılaştırıldığında EBT düşüktü. Triptofan da daha yüksek konsantrasyonlarda, sadece amino asit mevcuttu EBB veya polen ve ABB prolin ABB. Konsantrasyonlu daha polen EBB daha yüksekti.

Şekil 1: pH (A) ve polen çözünür protein konsantrasyonları (B) ve Avrupa (EHB) veya Africanized (AHB) bal arıları tarafından yapılan beebread karşılaştırılması. polen pH varyans analizi ile tespit edildiği üzere beebread önemli ölçüde daha yüksek (F _2,12 = 3725, p <0.0001) bir Tukeys W-çoklu karşılaştırma testi ile gerçekleştirilmiştir. polen protein konsantrasyonu EHB (EBB) veya AHB (ABB) tarafından yapılan beebread göre anlamlı olarak yüksek bulundu (F _2,27 = 16.49; p <0.0001). Aynı harfle takip edilen araçlar 0.05 düzeyinde önemli ölçüde farklı değildir.

Şekil 2: cel ortalama yüzdesiTamamen kafesli arılar tarafından 11 günlük süre üzerinde tüketilen beebread içeren ls. beebread aynı polen kaynağı kullanılarak ya Avrupa (EHB) veya Africanized (AHB) arılar tarafından yapılmıştır. Araçlar, her tedavinin beş kafesleri tahmin edilmiştir; Bir tek yönlü varyans analizi (F _3,16 = 7.3, p = 0.003) ve Tukey B testi ile tespit edildiği üzere aynı harf olan 0.05 düzeyinde önemli ölçüde farklı değildir. Bu Şekil ²⁵ modifiye edilmiştir.

Şekil 3: 4, 7, ve 11 gün süreyle Avrupa (EBB) veya Africanized (ABB) arılar tarafından yapılan Avrupa (EHB) veya Africanized gelen hemolimfteki proteinin ortalama konsantrasyonu (AHB) bal arılarının beslenen beebread bir tekrarlı ölçümler analizi. Varyans 4 Akne tedavi edici arasında önemli farklılıklar belirtilentment grupları (F _3,20 = 19.7, p <0.001). AHB beslenen ABB çözünür protein düzeyleri EHB beslenen ABB (p = 0.008) veya EBB (p = 0.018) anlamlı olarak yüksek bulunmuştur. örnekleme sırasında arıların yaşı anlamlı hemolimfteki çözünür protein konsantrasyonları etkilemiştir. Seviyeleri gün 7 (p <0.0001) veya 11 (p = 0.001) ile karşılaştırıldığında gün-4 arı anlamlı olarak düşüktü. Gün 7 ve 11.Gün arılar (p = 0.149) farklılık yoktu. Bu ^{rakam, 25} modifiye edilmiştir.

Şekil 4:. Amino asitlerin konsantrasyonları (polen gramı başına ug veya beebread) polen ya da EBT yapılmış beebread Avrupa arıları tarafından yapılan beebread ve ABB Afrikalılaşmış arıları tarafından yapılmıştır. Triptofan, sistein, fenilalanin ve prolin ön açıklık amacıyla ayrı ayrı çizilmiştironların miktarda reyi. Bu ^{rakam, 25} modifiye edilmiştir.

Tartışma

Yukarıda tarif edilen metotlar kullanılarak, AHB tarafından yapılan beebread AHB ve EHB hem daha büyük miktarlarda tüketilen olduğu bulunmuştur. EHB ve -AHB beebread her tür benzer miktarlarda tüketilen rağmen, -AHB yüksek hemolimf proteini titreleri bulunmaktaydı. AHB de Hemolimf protein düzeyleri aynı diyetler ²⁶ beslenen olsa EHB daha yüksek olduğu nerede bizim yöntemlere dayalı bulgular daha önceki raporlara benzer. Hem EHB ve AHB tarafından farklı oranlarda tüketilen EBB ve ABB tüketimini ölçerek, her alttürde hemolimf protein konsantrasyonu artan gıda tüketimi tarafından gündeme olamayacağı belirlenmiştir. Hemşire arı yaş işçilerde hemolimf protein konsantrasyonu ve plato için ayar noktası EHB daha AHB yüksek olduğu bir plato gibi görünüyor.

Polen depolama oranını optimize edecek beebread üretim için koloniler kurmak için birkaç önemli koşullar vardır. İlk olarak, kolonies açık yavrularıyla çerçeveleri gerekir. Beslemek açık damızlık olmadan, işçiler çok polen toplamak olmaz. Hiçbir ek yavru üretilir, böylece İkincisi, koloni queenless olmalıdır. Kuluçka yetiştirme polen büyük miktarlarda gerektirir ve sadece aşırı polen saklanır. EFA kurulan küçük koloniler halinde, koloniler queenless olması gerekir, böylece yavru alanları genişleyen sanki beebread olarak depolanır az polen olacaktır. Beebread yapılabilmesi için, son olarak, polen corbicular yükler olarak toplanır ve tarak hücrelerinde depolanmalıdır. Polen polen tuzakları toplanan ise, onlar corbicular yükler olarak toplamak, böylece arıların bunu sunmadan önce ince bir toz toprak olması gerekir.

yöntemler beebread tüketimi yerine mutlak tahminlere göre nitel oluşturulan ölçmek için. Hücreler tamamen arı ekmek boşaltılması sırasında sayıldı tek tüketimi oldu. Toplam arı ekmek tüketiminin daha kesin bir tahmin arı br çıkararak elde edilebilirhücrelerden ead öncesi ve çalışma dönemi sonrasında tartılır olabilir bir börek içine yapım. Ancak, onlar bir koloni olur ve belki de çalışma dönemi sırasında işlemeye devam gibi arılar üzerinde yem diye hücrelerde arı ekmek tutmak istedim. Ağırlık artışı olabilir, çünkü arılar, bazı hücrelerde kendilerine beslenen seyreltilmiş bal koymak çünkü Çalışma öncesi ve sonrası tarak bölümlerinin ağırlık farkı tüketim tahmini olarak kullanılan değildi.

İşçiler ayrıca arı ekmeği ile seyreltilmiş bal bazı eklemiş olabilir. Bu nedenlerden dolayı, besleme süresinden önce ve sonra arı ekmek yaklaşık olarak eşit miktarlarını ihtiva eden hücreler sayıldı ve niteliksel bir ölçüm elde edildi. Yine de, 11 gün sonra EBT kıyasla sayılır boş ABB hücrelerin sayısında beebread iki tür arasında çarpıcı bir farklılık yoktu.

Saklanan polen beebread olur zaman belirleme olabilir diarılar sürekli hücrelere polen ekleyin çünkü fficult. arılar polen toplamak bu yüzden üretim beebread için kullanılan koloniler açık damızlık çerçeveler ile kurulmuştur. Koloni kurulduktan sonra larvalar yaklaşık 9 gün boyunca beslemek için vardı ancak, koloniler queenless edildi. 3 haftalık süre kalanı için kolonileri EFA, toplanan arılar depolanan ve beebread dönüştürülen polen içinde bulunduğumuz zaman. Kafeslerde arılar onu besleyen ek 11 gün süreyle tarak hücrelerinde depolanan polen tutulması da beebread için polen işleme devam etmiş olabilir. arı ekmek polen dönüşüm yaklaşık 7 gün ⁸ sürer. EHB ve AHB beslenen beebread düşük pH ve polen beslenen kıyasla daha düşük bir protein konsantrasyonları. Dönüşüm beebread sonra polen değişikliklerin benzer bulgular diğerleri ^7,10,27 tarafından rapor edilmiştir. Bizim sonuçlar ancak önceki raporlardan farklı, ki konsantrasyonlarda farklılıklar o vardıbeebread ve polen ile f bazı amino asitler yer alır. hem protein ve amino asit konsantrasyonlarında değişiklikler proteolitik enzimlerin aktivitesi nedeniyle olabilir, kaynak arılar kendileri veya beebread ^7,8,28,29 yılında kurulan mikrobiyal topluluklar olabilir.

Protein konsantrasyonunun ölçülmesi için kullanılan yöntem daha önce Africanized ile diyet protein ve Avrupa arı ²⁶ etkilerini belirlemek için tarif edilenlere benzerdir. Yöntemlerden bir uzantısı olarak, biz polen ve beebread çözünür protein tahmin başardık. Bu yöntemler, daha önceki raporlarda ^7,10,27 benzer bulgular oluşturulur. Bulgularımız AHB daha verimli EHB fazla diyet protein asimile olduğunu, ve bu göç ve ^30-32 kurulan haline gelmiştir çoğu bölgelerde AHB ekolojik hakimiyeti önemli bir faktör olabilir ek kanıtlar sunmaktadır.

Malzemeler

Bu makalede kullanılan malzemelerin listesi

Ad	Şirket	Katalog numarası	Yorumlar
su geçirmez çift eklemli pH mızrağı	Thermo Fisher
Kahve Değirmeni	Mr. Coffee	model 1DS77
Dulbecco'nun fosfat tampon çözeltisi	Emd-millipore	BSS-1005-B
EIA/RIA polistiren plaka	Sigma-Aldrich-Corning	CLS3590-100EA
mikrokapiler pipetler	Kimble Glass Inc.
Hızlı Başlangıç Bradford Protein Test Kiti 2	Bio-Rad	#500-0202
Spektrofotometre	Biotek Synergy HT
Kütle Seçici Dedektör	Agilent	5973N
HLB kartuş
gaz kromatografı	Agilent	6930
gaz kromatografisi kolonu	Bir J & W Bilimsel	DB-1701
d4-alanin	Sigma-Aldrich	488917
d23< / sub>-laurik asit	Sigma-Aldrich	451401
13< / sup>C 6< / sub>-glukoz	Sigma-Aldrich	389374
Piridin	Sigma-Aldrich	270970
N,O-Bis (trimetilsilil)trifloroasetamid +
Trimetilklorosilan (BSTFA + TMCS)	Sigma-Aldrich	33148
Perflorotributilamin (PFTBA)	Sigma-Aldrich	442747-U
< sup>d39 < / sup>-araşidiyak asit	Cambridge İzotopu